全 文 ：贵州产金耳环不同采收期多糖的
含量变化及止血作用*
魏学军，夏亚兰，林先燕，李雪营，余跃生
(黔南民族医学高等专科学校药学系，都匀 558003)
摘 要 目的 观察贵州产金耳环不同采收期多糖含量的变化及止血作用。方法 利用水提醇沉法提取金耳环多
糖，经除杂、纯化后，采用紫外分光光度法测定多糖含量;采用剪尾法及玻片法测定小鼠出、凝血时间。结果 不同采收
期金耳环中多糖含量具有明显差异，6 月采收整体含量较高，为 1． 78% ～ 1． 82%。正常对照组和精制多糖大剂量组小鼠
出血时间分别为(6． 73 ± 1． 21)，(4． 91 ± 1． 58)min(P ＜ 0． 01) ;正常对照组和精制多糖中、大剂量组小鼠凝血时间分别
为(7． 27 ± 2． 09) ，(3． 96 ± 1． 78) ，(3． 27 ± 1． 61)min(P ＜ 0． 05 或 P ＜ 0． 01)。结论 多糖是金耳环止血的活性物质;金
耳环用于止血以 6 月采收为宜。
关键词 金耳环，贵州产;采收期;多糖;止血作用
中图分类号 Ｒ282． 71;Ｒ285． 5 文献标识码 A 文章编号 1004 － 0781(2015)05 － 0606 － 03
Change of Polysaccharide from Asarum insigne in Guizhou During Different Harvest
Period and the Hemostatic Effect of Polysaccharide Study
WEI Xuejun，XIA Yalan，LIN Xianyan，LI Xueying，YU Yuesheng(Department of Pharmacy，Qiannan Medical
College for Nationalities，Duyun 558003，China)
ABSTＲACT Objective To study the change of polysaccharide from Asarum insigne in Guizhou during different harvest
period and its hemostatic effect． Methods Asarum insigne polysaccharide was extracted by water isolation and alcohol
precipitation． We measured the polysaccharide content by UV spectrophotometry and detected the bleeding and clotting time by
tail cutting and slide methods in mice． Ｒesults There was significant variation in polysaccharide of Asarum insigne at different
harvest time，which was at a higher level in June(1． 78% － 1． 82%)． The bleeding time in mice of normal control group was
(6． 73 ± 1． 21)min，and that in mice treated with refined polysaccharide at high dose was (4． 91 ± 1． 58)min，the difference
between two groups was statistically significant(P ＜ 0． 01)． The clotting time in mice of normal control group was (7． 27 ± 2． 09)
min，and that in the refined polysaccharide at middle and high dose groups was (3． 96 ± 1． 78)min and (3． 27 ± 1． 61)min，
respectively(P ＜ 0． 05 or P ＜ 0． 01)． Conclusion The polysaccharide is an active hemostatic substance in Asarum insigne and
the optimum harvest time of it is in June for the clinical use．
KEY WOＲDS Asarum insigne in Guizhou;Harvest time;Polysaccharide;Hemostatic effect
金耳环为马兜铃科植物金耳环(Asarum insigne
D．)的干燥全草，主要分布在我国长江以南各省区，具
有温经散寒、祛痰止咳、散瘀消肿、行气镇痛的功能，含
黄酮类、氨基酸、糖类和挥发油等成分［1］。在贵州三
都水族集聚地，由于疗效显著，采集方便，金耳环被广
泛用于风寒感冒、慢性支气管炎、风寒痹痛、跌打损伤、
细菌性痢疾等症候的治疗［2-3］，《中国水族医药宝典》
记载名为骂广瓦［4］，民间多用于各种外部损伤引起的
出血。研究表明植物多糖可能是止血作用的重要活性
收稿日期 2014 － 03 － 10 修回日期 2014 － 05 － 12
基金项目 * 贵州省优秀科技教育人才省长专项资金项目
［黔省专合字(2010)156 号］;贵州省黔南州科技局资金项目
［黔南科合社字(2010)18 号］
作者简介 魏学军(1972 －) ，男，四川成都人，副教授，学
士，从事中药及民族药开发应用研究。电话:0854 － 8308038，E-
mail:qndywxj@ 163． com 。
成分之一［5-8］，因而推测金耳环多糖可能具有一定的止
血作用。有关其止血作用的活性成分研究笔者未见文
献报道，拟对金耳环多糖的止血作用及不同采收期多
糖含量的动态变化进行探讨，初步确定止血作用的物
质基础和适宜采收期，为黔产金耳环的开发应用提供
理论依据。
1 动物、试药与仪器
1． 1 动物 无特定病原体(specefic pathogen free，
SPF)级昆明种小鼠，体质量 18 ～ 22 g，雌雄各半，由贵
阳医学院实验动物中心提供，使用许可证号:SCXK
(黔)2003-0003，动物合格证号:SCXK(黔)2002-001。
饲养在室温 20 ℃、相对湿度 60%的清洁级实验动物
房。
1． 2 试药 葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究
院，批号:110833-200904);酚磺乙胺片(张家口云峰制
药厂，批号:H13024449，每片 0． 25 g) ;其他试剂均为
·606· Herald of Medicine Vol. 34 No. 5 May 2015
分析纯。金耳环药材于 2012 年 4 ～ 9 月采于贵州三
都水族自治县境内，经本校药学系朱文仁副教授鉴定
为金耳环(Asarum insigne D．)正品。
1． 3 仪器 Cary 100 型双光束紫外可见分光光度计
(安捷伦科技有限公司);AE 240 型十万分之一电子天
平(瑞士 Mettler公司) ;DW-60W156 型超低温冰箱(青
岛海尔集团公司);DHG-9240A型真空干燥箱(上海金
山公司) ;2． 0Ｒ型大容量低速离心机(德国 Heraeus 公
司)。
2 方法与结果
2． 1 金耳环多糖的提取与精制 60 ℃恒温干燥药
材，精密称定 10 g，石油醚回流脱脂 3 次。挥去石油
醚，在液固比 10∶1，提取温度 80 ℃的条件下加水回
流提取 2 次，每次 90 min。合并提取液，滤过，放冷，
4 000 r·min －1离心 5 min，取上清液，冻融除杂 3 次，
Sevage法除蛋白，活性炭脱色。滤过，滤液用 90%乙
醇沉淀，静置 24 h，除去上清液，沉淀依次用无水乙醇、
丙酮、无水乙醚多次洗涤，于 60 ℃真空干燥，即得金耳
环精制多糖，称质量后计算得率(mg·g －1)［9-10］。
2． 2 标准曲线的绘制 葡萄糖对照品 105 ℃干燥至
恒质量，精密称定 10 mg，置 100 mL量瓶中，纯化水溶
解并定容，配制成 100 mg·L －1储备液。精密吸取
0． 1，0． 2，0． 4，0． 6，0． 8，1． 0 mL 储备液分别加入具塞
试管中，加纯化水补至 2． 0 mL，配制成 5，10，20，30，
40，50 mg·L －1葡萄糖对照品系列溶液。另取纯化水
2． 0 mL作为空白对照。向上述葡萄糖系列对照品溶
液及纯化水中各加入 5%苯酚溶液 1． 0 mL，混匀，迅速
沿管壁加入浓硫酸 5． 0 mL，摇匀，封口，室温放置
30 min。在 496 nm波长处测定吸光度，以吸光度(A)
为纵坐标，葡萄糖对照品溶液质量浓度(C)为横坐标，
绘制标准曲线，得回归方程:A = 136． 107 2C － 0． 663 8
(r = 0． 999 6)。实验结果表明，对照品溶液在 5 ～
50 mg·L －1范围内与吸光度呈良好的线性关系。
2． 3 换算因子的测定 2012 年 4 月 15 日采收金耳
环提取所得的精制多糖于 60 ℃干燥至恒质量，精密称
取20 mg，置于 100 mL 量瓶中定容。再吸取上述溶液
1． 0 mL定容至 10 mL，得样品 1 多糖溶液。吸取上述
溶液 2． 0 mL，按“2． 2”项方法显色后，在波长 496 nm
处测定吸光度，按下式计算换算因子:f = W /(C × D)。
式中:W为多糖质量(mg)，C 为多糖溶液中葡萄糖的
浓度(μg·mL －1) ，D为多糖的稀释倍数。测得换算因
子f = 1． 201 7。
2． 4 精密度实验 精密吸取样品 1 多糖溶液1． 0 mL，
按测定标准曲线的方法，连续测定 6 次，其吸光度平均
值 0． 135 3，ＲSD为 0． 94%。
2． 5 回收率实验 精密吸取样品 1 多糖溶液 1． 0 mL
共 6 份，分别置于 20 mL 试管中，各精密加入
10 μg·mL －1葡萄糖标准溶液 1． 0 mL，按“2． 2”项方
法操作，计算回收率。结果平均回收率为 98． 73%，
ＲSD为1． 12%。
2． 6 同生长期金耳环多糖的含量测定 精密称取不
同采收时间金耳环精制多糖各 10 mg，定容于 50 mL
量瓶中，再吸取上述溶液 1． 0 mL 定容至 10 mL，摇匀
得样品溶液。精密吸取样品溶液 1． 0 mL，按“2． 2”项
方法操作，测定多糖质量分数并按下式计算原药材中
多糖含量。测定结果见表 1。
多糖含量(mg·g －1)=精制多糖得率(mg·g －1)
×多糖质量分数(%)。
表 1 不同采收期金耳环多糖含量的动态变化
Tab． 1 Dynamic changes of polysaccharide content in
Asarum insigne from different harvest period n = 3
样品 采收时间
精制多糖得率 /
(mg·g － 1)
多糖质量
分数 /%
多糖含量 /
(mg·g － 1)
ＲSD /
%
1 20120415 1． 181 99． 07 1． 170 1． 01
2 20120430 1． 254 99． 68 1． 250 0． 97
3 20120515 1． 580 98． 10 1． 550 0． 76
4 20120530 1． 772 97． 63 1． 730 0． 83
5 20120615 1． 791 99． 39 1． 780 0． 91
6 20120630 1． 823 99． 29 1． 810 0． 63
7 20120715 1． 752 99． 32 1． 740 0． 65
8 20120730 1． 620 99． 38 1． 610 0． 84
9 20120815 1． 321 98． 41 1． 300 0． 75
10 20120830 1． 150 99． 13 1． 140 0． 66
11 20120915 0． 876 98． 17 0． 860 1． 12
12 20120930 0． 592 97． 97 0． 580 0． 77
2． 7 金耳环多糖止血作用
2． 7． 1 供试溶液的制备 酚磺乙胺溶液:取酚磺乙胺
粉末 2． 15 g，加入纯化水 100 mL 即得。多糖溶液:称
取 2012 年 4 月 15 日采收金耳环提取所得的精制多糖
适量，使用时加纯化水配成小、中、大 3 个剂量。
2． 7． 2 小鼠出血时间的测定 取昆明种小鼠 50 只，
雌雄各半，按数字表法随机分成正常对照组，酚磺乙胺
组和多糖小、中、大剂量组，共 5 组，每组 10 只，分别灌
胃给予 0． 9%氯化钠溶液，酚磺乙胺和小、中、大剂量
(210，420，840 mg·kg －1)金耳环多糖溶液，给药体积
为 20 mL ·kg －1，每天 1 次，连续灌胃 5 d，末次给药
1 h后用解剖剪距小鼠尾尖 3 mm 处横向剪断，待血液
自行溢出计时，每 30 s 用滤纸吸血 1 次，直至血液自
·706·医药导报 2015 年 5 月第 34 卷第 5 期
然停止，所需的时间即为出血时间［11］。
2． 7． 3 小鼠凝血时间的测定 取昆明种小鼠 50 只，
雌雄各半，动物分组、给药剂量、给药途径均同上。末
次给药 1 h 后用毛细管于小鼠左眼内球后静脉丛取
血，滴两滴在玻璃片上并同时计时，每 30 s 用清洁大
头针在玻片上挑血液一次，观察是否有凝血丝，记录从
出血至出现凝血丝的时间即为凝血时间［11］。
2． 7． 4 统计学方法 采用 SPSS17． 0 版统计软件包对
数据进行处理。计量资料以均数 ±标准差(x ± s)表
示，组间比较采用 t检验，以 P ＜ 0． 05 为差异有统计学
意义。
2． 7． 5 金耳环多糖对小鼠出血、凝血时间的影响 结
果见表 2。
表 2 不同剂量金耳环精制多糖对小鼠出血、凝血时间的
影响
Tab． 2 Effect of refined polysaccharide in Asarum
insigne at different doses on bleeding and coagulation time of
mice min
组别
剂量 /
(mg·kg －1)
出血时间 凝血时间
正常对照组 － 6． 73 ± 1． 21 7． 27 ± 2． 09
酚磺乙胺组 430 3． 20 ± 1． 37* 1 1． 87 ± 1． 29* 2
多糖
小剂量组 210 7． 49 ± 1． 76 6． 47 ± 1． 76
中剂量组 420 5． 68 ± 1． 96 3． 96 ± 1． 78* 3
大剂量组 840 4． 91 ± 1． 58* 4 3． 27 ± 1． 61* 5
与正常对照组比较，t = 6． 11，* 1 P ＜ 0． 01，t = 6． 95，* 2 P ＜
0． 01，t = 2． 66，* 3P ＜ 0． 05，t = 2． 89，* 4P ＜ 0． 01，t = 4． 79，* 5P ＜
0． 01
Compared with normal control group，t = 6． 11，* 1P ＜ 0． 01，t =
6． 95，* 2P ＜ 0． 01，t = 2． 66，* 3P ＜ 0． 05，t = 2． 89，* 4P ＜ 0． 01，t =
4． 79，* 5P ＜ 0． 01
3 讨论
止血作用实验结果表明，与正常对照组比较，酚磺
乙胺组和精制多糖大剂量组小鼠出血时间均显著缩短
(均 P ＜ 0． 01)，精制多糖小剂量组和中剂量组差异无
统计学意义(P ＞ 0． 05);酚磺乙胺组、精制多糖中剂量
组及大剂量组小鼠凝血时间均显著缩短(P ＜ 0． 05 或
P ＜ 0． 01) ，说明金耳环精制多糖具有一定的止血作
用，且与剂量相关。考虑到金耳环中尚含有黄酮类、氨
基酸和挥发油等化学成分，因而不能确定多糖是其止
血作用的唯一活性物质，其止血的作用机制尚不明确，
仍需进一步研究。
不同采收期金耳环多糖含量的动态变化实验结果
表明，采收时间对多糖含量影响显著。随着植物的生
长，多糖含量变化呈先升后降的趋势，以 6 月下旬采收
最高，9 月下旬采收最低，6 月期间整体含量较高，提示
实际应用及药物制剂开发时，如金耳环止血以多糖类
成分为主，为使制剂生产获得较多的活性多糖量，建议
6 月采收为宜。
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DOI 10． 3870 /yydb． 2015． 05． 010
·806· Herald of Medicine Vol. 34 No. 5 May 2015