全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(4)∶469 ～ 470
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:81001606) ;霍英东教育基金项目(No． 121045 ) ;高等学校博士学科点专项科研基金项目(No．
20095132120004) ;四川省教育厅资助科研项目(No． 11ZB049) ;四川省“十二五”农作物育种攻关项目(No． 2011NZ0098 － 12 － 02)
作者简介:汪瑶(1989—) ，女，正攻读生药学专业的硕士学位。Email:254913610@ qq． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:zhanghhx@ vip． sina． com
HPLC测定球药隔重楼中的 5 种重楼皂苷
汪 瑶1，薛 丹1，文飞燕1，尹鸿翔2，林 丹1，张 浩1*
(1．四川大学华西药学院，四川 成都 610041;2．成都中医药大学民族医药学院，四川 成都 611137)
摘要:目的 测定不同产地球药隔重楼中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、II、I的含量，并评价其质量。方法 采用 HPLC法。采用 Kroma-
sil C18柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，测定波长 210 nm，柱温 35 ℃，流动相为乙腈 －水，梯度洗脱，流速 1． 0 mL·min
－1。结果 5
种皂苷在线性范围内的线性关系良好(r2 ＞ 0． 9989) ，球药隔重楼中重楼皂苷 H占所测 5 种皂苷总量的约 50%。结论 所用
方法准确、简便，可用于球药隔重楼的质量评价。
关键词:球药隔重楼;重楼皂苷;高效液相色谱法;不同产地;质量控制;七叶一枝花;云南重楼
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)04 － 0469 － 02
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 04． 028
Determination of five kinds of paris saponins in Paris fargesii by HPLC
WANG Yao1，XUE Dan1，WEN Fei － yan1，YIN Hong － xiang2，LIN Dan1，ZHANG Hao1*
(1． West China School of Pharmacy，Sichuan University，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China;2． College of Ethnomedicine，Chengdu
University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu，Sichuan，611137 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To determine five kinds of paris saponins (Ⅶ，H，Ⅵ，II，I)in Paris fargesii Franch． from the different
habitats，and evaluate their quality．METHODS HPLC analysis was carried out on a Kromasil ＲP － C18 column (250 mm ×4． 6 mm，
5 μm)with mobile phase of acetonitrile － water，gradient elution with a flow at 1． 0 mL·min －1，ultraviolet detection wavelength at
210 nm and column temperature at 35 ℃ ． ＲESULTS Five kinds of paris saponins in P． fargesii were determined by this method，and
showed a good linear relationshiop within the linear ranges(r2 ＞ 0． 9989)． The content of paris saponin H was about 50% ． CONCLU-
SION This method is accurate and simple． It can be used for evaluating the quality of P． fargesii．
Key words:Paris fargesii Franch．;Paris saponin;HPLC;Different habitats;Quality control;P． polyphylla Smith var． chinensis
(Franch．)Hara;P． polyphylla Smith var． yunnanensis (Franch．)Hand． － Mazz．
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2015)04 － 0469 － 02
重楼为百合科重楼属植物的总称［1］。《中国药
典》中收载的重楼药材为七叶一枝花 Paris
polyphylla Smith var． chinensis(Franch．)Hara 或云
南 重 楼 P． polyphylla Smith var． yunnanensis
(Franch．)Hand． － Mazz．［2］。球药隔重楼 P． farge-
sii Franch．的资源分布广泛，根茎较大，重楼皂苷 H
的含量较高［3］。为评价球药隔重楼的质量，现以重
楼皂苷 H 和《中国药典》中重楼项下规定的重楼皂
苷 I、II、Ⅵ、Ⅶ为对照品来测定其含量。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
LC － VP高效液相色谱仪(日本岛津)。重楼皂
苷 II、I对照品(中国药品生物制品检定所，批号分
别为 111591 － 200402、111590 － 200402) ;重楼皂苷
Ⅶ、H、Ⅵ对照品 (自制，纯度大于 98%) ;10 批球药
隔重楼样品(由课题组采集，为带花或果的样品，并
经张浩教授鉴定，样品信息见表 1) ;乙腈、甲醇为色
谱纯;水为超纯水;其余试剂为分析纯。
表 1 球药隔重楼样品的信息
Table 1 Detailed information of P． fargesii
No． 产地 采集日期
1 四川崇州市鸡冠山乡 2009 － 05 － 12
2 四川彭州市龙门山镇 2009 － 07
3 四川宜宾屏山县龙华镇 2010 － 06 － 02
4 四川宝兴县灵关镇 2013 － 04 － 13
5 四川芦山市大川镇 2009 － 04 － 30
6 云南盐津县普洱镇 2013 － 05 － 16
7 四川安县高川镇 2013 － 04 － 29
8 四川大邑市花水湾镇 2013 － 07 － 05
9 四川乐山沙湾区葫芦坝 2013 － 05 － 14
10 四川彭州市白鹿镇 2009 － 07
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 采用 Kromasil 反相 C18色谱柱
(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)－水
(B) ，梯度洗脱(0 ～ 5 min、70% ～55% B，5 ～ 10 min、
55%B，10 ～20 min、55% ～50%B，20 ～30 min、50% ～
40%B，30 ～ 35 min、40% ～ 0% B)［3］，检测波长 210
nm，柱温 35 ℃，流速 1． 0 mL·min －1，进样量 20 μL。
1． 2． 2 溶液的制备 分别精密称定重楼皂苷Ⅶ、
H、Ⅵ、II 、I对照品(皂苷编号分别为 1 ～ 5) ，加甲醇
制成各皂苷浓度分别为 0． 471、0． 810、0． 276、
0. 438、0． 240 mg·mL －1的混合对照品贮备液。取干
燥至恒重的样品各约 0． 5 g，参照《中国药典》2010
年版中重楼项下的方法制备供试品溶液［1］。
1． 2． 3 线性关系的考察 分别取 30、60、120、180、
240 μL 混合对照品贮备液，加甲醇分别稀释至
240 μL，按“1． 2． 1”项色谱条件，进样。以对照品的
浓度为横坐标、峰面积为纵坐标进行回归，各皂苷的
线性方程分别为:Y1 = 1 × 10
6X1 + 7． 613 × 10
3(r2 =
0. 9994)、Y2 = 1 × 10
6X2 + 2． 179 × 10
4(r2 = 0. 9989)、
Y3 = 2 × 10
6X3 + 2． 290 × 10
3(r2 = 0. 9995)、Y4 = 1 ×
106X4 + 3． 598 × 10
3(r2 = 0． 9995)、Y5 = 2 × 10
6X5 －
2． 801 × 103(r2 = 0． 9999) ，线性范围分别为 58． 9 ～
471、101 ～ 810、34． 5 ～ 276、54． 8 ～ 438、30 ～ 240 μg·
mL －1，各皂苷在线性范围内的关系良好。
1． 2． 4 精密度、重复性和稳定性试验 取 4 号溶
液，按“1． 2． 1”项色谱条件，连续进样 6 次，计算得
各对照品峰面积的 ＲSD 分别为 0． 78%、0. 74%、
1. 75%、1． 70%、1． 06%，表明方法的精密度良好。
精密称取同一批样品 5 份，按“1. 2. 2”“1． 2． 1”项方
法制备供试品溶液并进样测定，记录峰面积，计算各
皂苷含量的 ＲSD 分别为 1. 20%、1． 3%、1． 7%、
0. 9%、1． 1%(n = 5) ，表明方法重复性好。取 4 号
溶液，分别于 0、2、4、8、12、24 h时，进样 20 μL，计算
各对照品峰面积的 ＲSD 分别为 1． 32%、0． 78%、
1. 54%、1. 60%(n = 6) ，表明各皂苷溶液在 24 h 内
稳定。
1． 2． 5 加样回收率试验 取同一批样品 5 份，各精
密加入适量重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ。按“1． 2． 2”项方法
制备供试品溶液，按“1． 2． 1”项色谱条件进样，计算
得平均加样回收率分别为 99. 92%、99． 8%、98. 85%，
ＲSD分别为 1． 66%、1. 58%、1． 74%(n =5)。
1． 2． 6 样品的测定 分别取 0． 5 g 1 ～ 10 号样品，
精密称定，按“1． 2． 2”项方法制备供试品溶液，按
“1. 2. 1”项色谱条件进样，测定其峰面积和保留时
间，计算含量(表 2) ，其中，重楼Ⅰ、Ⅱ未检出。色谱
图见图 1。
表 2 球药隔重楼中 5 种皂苷的含量(%)
Table 2 Contents of five kinds of saponins in P． fargesii(%)
No． Ⅶ H Ⅵ Ⅵ +Ⅶ + H Ⅵ +Ⅶ H占比
1 0． 777 1． 71 0． 908 3． 395 1． 685 50． 37
2 0． 757 1． 352 0． 547 2． 656 1． 304 50． 90
3 0． 822 1． 931 1． 776 4． 529 2． 598 42． 64
4 0． 715 1． 705 0． 994 3． 414 1． 709 49． 94
5 0． 442 1． 259 0． 472 2． 173 0． 914 57． 94
6 0． 898 1． 568 1． 051 3． 517 1． 949 44． 58
7 1． 439 2． 600 1． 341 5． 380 2． 780 48． 33
8 1． 518 3． 450 1． 205 6． 173 2． 723 55． 89
9 0． 711 1． 394 0． 863 2． 968 1． 574 46． 97
10 0． 707 1． 340 0． 646 2． 693 1． 353 49． 76
重
楼
皂
苷
Ⅶ
重
楼
皂
苷
H
重
楼
皂
苷
Ⅵ
重
楼
皂
苷
Ⅱ
重
楼
皂
苷
Ⅰ
0 10 20 30
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
t/min
s
图 1 10 批球药隔重楼样品的 HPLC色谱图
Figure 1 HPLC chromatograms of 10 batches of P． fargesii
2 讨论
文中所测样品中仅检测到药典规定的重楼皂苷
VI、Ⅶ，未检测到重楼皂苷 I、II;但仅重楼皂苷 VI、Ⅶ
的含量就达 0． 914% ～ 2． 780%，符合药典中重楼皂
苷 I、II、VI、Ⅶ总量不低于 0． 6%的规定，所有样品均
符合药典要求。重楼皂苷 H 具有体外诱导血小板
聚集和抗肿瘤的活性［4］。重楼皂苷 H 为球药隔重
楼的主要皂苷类成分，占 5 种皂苷总量的42． 64% ～
57． 94%;重楼皂苷 VI、Ⅶ、H 为偏诺皂苷，I、II 为薯
蓣皂苷，从所测的 10 批来看，球药隔重楼主要含偏
诺皂苷类成分。
参考文献:
［1］ 邹亮，周浓，张海珠，等． HPLC测定不同产地滇重楼中的 4 种
重楼皂苷［J］．华西药学杂志，2009，24(5) :521 － 523．
［2］ 中华人民共和国国家药典委员会． 中国药典［S］． 北京:中国
医药科技出版社，2010:243 － 244．
［3］ Wen FY，Yin HX，Chen C，et al． Chemical characteristics of
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of its main ingredient，paris saponin H［J］． Fitoterapia，2012，83:
627 － 635．
［4］ 李青，文飞燕，尹鸿翔，等． HPLC 测定黑籽重楼中的皂苷含量
并评价其药材质量［J］．华西药学杂志，2013，28(4) :395 －397．
收稿日期:2014 － 07 － 12
074 华 西 药 学 杂 志 第 30 卷