全 文 ：收稿日期:2010-07-08; 修订日期:2011-01-12
基金项目:云南省教育厅基金资助项目(No． 09Y0361)
作者简介:夏从龙(1974-) ，男(汉族) ，云南大理人，现任大理学院药学院
副教授，硕士学位，主要从事天然药物资源与品质评价工作．
滇重楼不同生长发育期有效成分的变化规律
夏从龙，周 浓，陈立师，庞 婕，徐 萍
(大理学院 药学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 通过对滇重楼不同生长发育期有效成分(重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ)含量的研究，为滇重楼适宜采收期的确定
提供实验依据。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱为 Agilent Zorbax SB － C18(4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相为乙腈
－水，梯度洗脱;流速为 1． 0 ml·min －1;检测波长为 203 nm;柱温为 35 ℃。结果 不同生长期滇重楼中 4 种重楼皂苷总含
量发生明显变化。该类成分在 5 ～ 6 月份含量最高;5 ～ 10 月呈下降趋势;到次年的 4 ～ 6 月呈升高趋势。结论 明确了滇
重楼不同生长发育期重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的量和总量的动态变化规律。
关键词:滇重楼; 重楼皂苷; 高效液相色谱; 生长发育期
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 07． 034
中图分类号:S567;R284． 1 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2011)07-1624-02
滇重楼系百合科植物云南重楼 Paris polyphylla var． yun-
nanensis的干燥根茎［1］，为《中国药典》收载的常用中药材，其主
要的活性成分为甾体皂苷，具有止血、抗菌、抗肿瘤、调节免疫、镇
静、镇痛等生物活性［2，3］。在云南，重楼又是一些著名中成药宫
血宁胶囊、楼莲胶囊等的主要原料之一，每年仅云南省的用量就
达数百吨，市场需求量较大。但由于长期掠夺式的采挖，资源日
益减少，重楼的工业药用原料严重紧缺，现已被列为云南省 30 种
稀缺濒危天然药物之一［4］。
近年来随着人工栽培品的日益增多，对栽培滇重楼药材进行
质量评价和综合开发利用已引起人们的广泛重视。在生产实践
中，如何采取有效措施控制与提高药材质量，仍然是值得关注的
重要问题。重楼皂苷是滇重楼的活性成分和衡量药材质量的重
要指标，但目前尚未查阅到对滇重楼药材不同采收期进行系统研
究的相关资料，因此本实验拟采用 HPLC法对 7 个不同生长发育
期滇重楼中 4 种重楼皂苷进行含量分析，为确定滇重楼的最佳采
收期提供实验依据，进一步为云南人工栽培滇重楼的规范化种植
与采收提供实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 1100 LC高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司，真空在
线脱气机，四元泵，自动进样器，柱温箱，DAD 检测器，Agilent
chemstation化学工作站) ;KQ －250B型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司) ;RE － 2000 型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器
厂) ;SHZ －Ⅲ循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司) ;
AE240 天秤［梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司］;FZ102 型
微型植物试样粉碎机(北京中兴伟业仪器有限公司)。
1． 2 试药 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品(中国药品生物制品检
定所，批号分别为:111590 － 200402、111591 － 200402、111592 －
200402、111593 － 200402，供含量测定用) ;乙腈为色谱醇(美国
Tedia试剂公司) ，水为娃哈哈牌纯净水，其他试剂均为国产分析
纯。
滇重楼 7 份样品于 2009 － 04 ～ 10 期间采自云南省云龙县关
坪乡种植基地，并经作者本人鉴定为百合科植物云南重楼 Paris
polyphylla Smith var． yunnanensis (Franch．)Hara的干燥根茎。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱为 Agilent zorbax SB －
C18柱(4． 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动相乙腈(A)－水(B) ，进行
梯度洗脱:30 % ～60 % A(0 ～ 40 min) ，60 % ～ 30 % A(40． 00 ～
50． 00 min) ;检测波长 203 nm;柱温 35 ℃;流速:1． 0 ml·min －1;
进样量 20 μl。理论塔板数按重楼皂苷Ⅰ峰计算不低于4 000，与
其他峰的分离度均大于 1． 5。对照品和滇重楼样品分离的色谱
图见图 1。
1．重楼皂苷Ⅶ 2．重楼皂苷Ⅵ 3．重楼皂苷Ⅱ 4．重楼皂苷Ⅰ
图 1 混合对照品(a)及样品(b)HPLC图
2． 2 溶液的配制
2． 2． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取于 40 ℃减压干燥 2 h
的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品适量，加甲醇制成每毫升分别含
重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ 0． 236 4，0． 081 0，0． 042 4，0． 040 2 mg 的
混合溶液，即得。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 取本品粉末(过 3 号筛)约 0． 4 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 75 %乙醇 30 ml，超声处理
30 min，提取温度为 60℃，放冷过滤，重复 1 次，合并滤液。回收
乙醇至干，用甲醇溶解定容至 10 ml，即得供试品溶液。
2． 3 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液(分别含重
楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ 0． 236 4，
0． 081 0，0． 042 4，0． 040 2 mg·ml －1)1，2，5，10，15，20 μl，注入液
相色谱仪，得进样量 C(μg)与峰面积 A的线性方程。结果表明，
重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ进样量分别
在0． 236 4 ～ 4． 7280，0． 081 0 ～ 1． 620 0，0． 042 4 ～ 0． 848 0，0． 040
2 ～ 0． 804 0 μg 与峰面积成良好的线性关系，回归方程分别为:A
= 251． 58 C － 1． 051 4(r = 0． 999 9) ;A = 85． 709 C － 5． 412 4
(r = 0． 999 9) ;A = 57． 458 C + 8． 934 2(r = 0． 999 6) ;A = 38． 369 C
+ 6． 709 5(r = 0． 999 7)。
2． 4 精密度实验 以混合对照品溶液连续进样 6 次，测定峰面
积，计算重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ和重楼皂苷Ⅶ的
RSD分别为 0． 13%，2． 71%，2． 96%，2． 89%，表明仪器精密度良
好。
2． 5 重复性实验 取同一滇重楼样品 6 份(9 月份) ，按“2． 2． 2”
项下供试品溶液的制备方法制备及“2． 1”项下色谱条件测定，测
定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ峰面积，
·4261·
时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 7
RSD分别为 2． 81%，2． 42%，2． 61%，2． 37%(n = 6) ，表明本方法
重复性良好。
2． 6 稳定性实验 取同一供试品溶液(9 月份) ，室温密闭放置，
分别在制备后 0，4，8，12，16，24 h进样，测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂
苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ峰面积，RSD 分别为 2． 33%，
2． 62%，2． 79%，2． 98%(n = 6) ，表明样品溶液在 24 h内稳定。
2． 7 加样回收率实验 精密称取已知含量的滇重楼药材约 0． 4 g
(9 月份) ，共 6 份，分别精密加入一定量的重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷
Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ对照品，按“2． 2． 2”项下供试品溶液
的制备方法制备及“2． 1”项下色谱条件测定。结果表明，重楼皂
苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的平均回收率为
97． 61%，92． 69%，98． 11%，97． 4%，RSD 为 1． 61%，2． 71%，
2． 45%，2． 27%，符合分析要求。
2． 8 样品含量测定 分别按“2． 2． 2”项下方法制备供试品溶液，
按“2． 1”项下色谱条件测定，以峰面积代入回归方程中计算重楼
皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ的含量。结果见
表 1。4 种重楼皂苷含量随月份的动态变化见图 2，总皂苷的动
态变化见图 3。
表 1 不同采收期滇重楼中 4 种重楼皂苷的含量
编号 采集日期 重楼皂苷Ⅰ(%) 重楼皂苷Ⅱ(%) 重楼皂苷Ⅵ(%) 重楼皂苷Ⅶ(%) 重楼皂苷Ⅰ +Ⅱ +Ⅵ +Ⅶ(%)
1 4 月 15 日 0． 007 6 0． 013 1 0． 004 7 0． 167 3 0． 192 6
2 5 月 15 日 0． 332 7 0． 184 2 0． 031 4 0． 048 8 0． 597 2
3 6 月 16 日 0． 230 0 0． 222 4 0． 039 4 0． 080 7 0． 572 5
4 7 月 16 日 0． 100 1 0． 128 5 0． 010 0 0． 021 1 0． 259 7
5 8 月 14 日 0． 067 3 0． 025 0 0． 004 2 0． 005 8 0． 102 3
6 9 月 15 日 0． 012 1 0． 074 9 0． 007 5 0． 009 5 0． 176 7
7 10 月 18 日 0． 053 7 0． 045 0 0． 006 0 0． 014 0 0． 118 6
图 2 滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、
重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ量的动态变化
图 3 滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、
重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ总量的动态变化
3 讨论
滇重楼的生长发育一般分为营养生长期(4 月)、授粉期(5 ～
6 月)、果熟期(7 ～ 9 月)、衰老期(9 ～ 10 月)等 4 个物候期［5］。
不同生长发育期的滇重楼其 4 种重楼皂苷的积累处于一个动态
的过程中，随时间的变化而变化，含量差异较大。由实验结果可
知，4 种重楼皂苷的总含量有 1 个高峰期，即 5 ～ 6 月(授粉期) ，7
月份降至 5 月、6 月的一半左右，5 ～ 10 月呈下降趋势，到次年的 4
～ 6 月呈升高趋势。而 4 种重楼皂苷单体化合物的含量规律与 4
种重楼皂苷的总含量基本一致。实验结果规律不是太明显，可能
与采样为野生变家种药材，很难确定其准确的生长年限有关。
采收期是影响中药材产量和质量的重要环节之一，确定最佳
采收期需要从药材的产量和质量两个方面进行综合考虑［6］。虽
然授粉期(5 ～ 6 月)含量最高，可能与光合作用后根茎大量合成
自身营养物质有关，但其药用部位根茎进入旺盛生长期、影响产
量，所以不经济［7］。因此，滇重楼的最佳采收期兼顾产量和含量
因素，笔者认为应以 9 ～ 10 月份(衰老期)为宜，这与实际生产中
传统采收期基本一致。
滇重楼含多种活性成分［2］，以 4 种重楼皂苷为有效成分指标
来确定最佳采收期是否合理，并且采收期与栽培地的地域性及生
态环境条件等有关，可考虑规范化种植后再用本方法对滇重楼的
最佳采收期进行进一步研究，并得出更为准确、可靠的结论。
对不同流动相体系、检测波长和供试品溶液的制备方法［8］进
行了考察，结果显示乙腈 －水流动相体系梯度洗脱所得到色谱图
基线较平稳，色谱峰数较多，且分离效果好;检测波长在 203 nm
处各色谱峰的吸收强度大，灵敏度高;以 75 %乙醇为提取溶剂，
超声提取 30 min，提取 2 次可将滇重楼中的 4 种重楼皂苷基本提
取完全。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会． 中国药典，Ⅰ部［S］． 北京:中国医药科技出版
社，2010:243．
［2］ 何 俊，张 舒，王 红，等． 滇重楼植物的研究进展［J］． 云南
植物研究，2006，28(3) :271．
［3］ 黄 芸，崔力剑，刘伟娜，等． HPLC － ELSD法分析重楼商品药材
中甾体皂苷的含量［J］． 中国中药杂志，2006，31(15) :1230．
［4］ 陆 辉，许继宏，陈锐平，等． 云南重楼属植物资源现状与保护对
策［J］． 云南大学学报(自然科学版) ，2006，28(S1) :307．
［5］ 金 梅． 药用植物重楼快速繁殖技术研究前景［J］． 保山师范高等
专科学校学报，2005，24(2) :16．
［6］ 李 化，黄璐琦，杨 滨． 论植物物候学指导中药材采收期的研
究［J］． 中国药学杂志，2008，43(19) :1441．
［7］ 刘丽娟，金德祥，牛志多，等． 穿龙薯蓣最佳采收期的研究［J］．
中草药，2005，36(12) :1879．
［8］ 李维莉，彭永芳，李 银，等． 超声法提取重楼中重楼皂苷的研究
［J］． 中成药，2010，32(2) :218．
·5261·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 7 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 7 期