作 者 ：阮班展Organ-单位: 福建农林大学
期 刊 ：福建农林大学 2013年 08期 页码：91
关键词：密码子优化；内源启动子；银耳；人胰岛素；实时荧光定量PCR；
摘 要 ：本研究以对潮霉素敏感的银耳野生菌株Tr 21-01作为供试菌株,以pBHg-BCA为出发质粒,进行如下研究：参考银耳的密码子使用偏好性分析结果,对人胰岛素基因BCA进行密码子优化并人工合成优化后基因BCA1；将来源于双胞蘑菇的gpd启动子替换为银耳内源高表达基因启动子p-G06；采用密码子优化和启动子替换两个策略,结合传统的载体构建方法和高效的In-Fusion法构建3个真核表达载体；利用高效的农杆菌介导法将载体转化到银耳Tr 21-01的孢子内；使用PCR, RT-PCR和ELISA逐级筛选最终获得可表达人胰岛素的银耳阳性转化子；使用实时荧光定量PCR相对定量法检测各银耳转化子基因组中BCA...