全 文 ：菌 物 系 统 18( l) : 1 2一 9 1, 1 99 9
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e o妙 s te m a
P A R T I A L 25 5 r D N A S E Q U E N C E O F aC
n ht a r e lu
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A N D I T S P H Y L O G E N E T I C IM P L I C A T I O N S
L i T ia 一h u i ’ , e h e n Y ue 一q i n , , Q u iL a n g一h u Z , L u Y o n g一u n Z , s o n g B i n ,
今 s et侧 t i e 场 e o l o刀 & jI e h e n o l o舒 劫 b o r a ot 勺, , A` a (l’. m i a inS i e a , Be 红i n g 10 0 8 0
G u a n g do
n g
Bl o le c h o lo剧
nI s t i l u te 了 iM e r o b i o l o舒 , G u a n g : h o 、 5 10 0 7 0
r e s e a r c h eC
n te r , 及 o n g s h a n nU i v e r s i护 , G u a n g动 o u 5 10 2 7 5
A B S T R A C T P a irt al
s e q u e cn e o f 2 5 5 r D N A o f aC
n l a r e l lu s e ib a r i u s 15 d e te rm i
n e d
.
B as e d o n ht e
a n a ly s e s o f ht e o b at i一l e d s e q u e cn e a n d ht e 2 5 5 r D N A s e q u e n e e s d e te rm i
n e d b y P re de e e s s o rs ofr m 14
re P re s e n 切 t l v e s P e e i e s o f 1 0 o ht e r b a s id io m y e e te o dr e rs a n d o n e z y g o m y e e te o dr e r, Ph y lo g e ne it e ter e s
a er c o n s utr
e et d i n w h l c h th e o u gt
r o u P 15 er Per s e n et d b y ht e z y g o m y e e et
J飞币廿c o r r a e e m o s u s . T】l e
er la it o n s ih P s be wt
e e n C e ib a r i u 泞 a n d o ht e r axt
a o f b as id io nr y e e et s a n d ht e i r P h y lo g e n e t ic s ig in if e an
e e
a er i n v e s it g a et d
.
K E Y W O R D S aC
n hl a r e l l u
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, , 2 5 5 rD N A
s e que
n e e , Ph y lo g e n e it c i m P l ic a it o n s
1 I N T R O D U C T I O N
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e o dr e r C a n ht a re l lal e s G a eum an
n ( 1 9 2 6 ) 15 a g r o u P o f fl e sh y hom
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d i o m y e e te s w ih c h h va
e s o m e P h y l o g e n e it e a l l y
“
i n d e if n i te
” o r “ i n te rm
e d i a te
”
m o rp h o l o g i e a l
, a n a t o m i c a l a n d m i
e r o s e o P i e e h a r ac et sr
.
S i n e e ht e sh o r ta g e s o f e v i d e n c e s
s
uP P
o
ert d w i t h ir g
o or u s l y et s et d d a at
,
d i fe er
n t P h y l o g e n e it e P lac e m e n st an d h y P
o ht e s e s
ab
o u t ht e i r e v o l u it o n a yr h i s t o yr an d er l a it
o n s h iP s t o o ht e r b a s id i o m y c e et s h va e l o n g
be e n h i g h l y c o n otr
v e r s i al
.
S o m e m y c o axt
o n o m i s st c o n s id e r i t a s ht e P ir m i it v e an d k
e y
g or u P o f al l H o m o b as id i o m y c e et s ( Sm iht
,
19 7 1 )
, a n d e v e n e o n s id e r ht a t i t d e ir v e d
for m au ir
e u lan ac
e o u s
fu
n g i
,
ht e o het
r
axt
a o f H o m o b as id i o m y e e et s d e ir v e d for m i t
o r
i st a l li e s ht r o u g h s e v e r a l m ia n e v o lu it o n a yr l i n e s (J it li e h
,
19 8 1) ; w ih l e s o m e o ht e sr
i n s i s t ht a t i t m i g h t h va e e l o s e r er l iat
o n s h iP w iht e lva a ir o i d fu n g i (P e et r s e n 1 9 7 1 ; S i n g e r,
19 8 6 )
, o r c o n s id e er d i t e l o s e l y er l a et d ot yH
n u m a n d P l ac e d i t i n A P h y ll op h
o
alr
e s
(M
.
A
.
Lk ) n k
,
1 9 6 4 ) ; b u t ht e B ir it s h m y c o l o g i s t D
.
N
.
P e g l e r a n d s o m e o ht e sr P er fe r ot
etr
a t ht e m as an
o
dr
e r C a n ht a er l l ia e s an d P lac
e ht e o dr e r P h y l o g e n e it c a ll y a fet
r
A P h y ll o P h o r al e s a n d i n fr o n t o f ht e er s t ag a ir e o dr e r s
.
In A i n s w o hrt
’ 5 s y s et m ( 1 9 7 3 )
,
i t 15 al s o P lac e d i n ht e P ir m i it v e P o s i it o n w iht i n H o l o b a s i d i o m y c e et s
.
eR
c e n it y
,
s o m e e x pe srt h va
e be g u n ot ap P l y m
o le c u lar b i o l o g i e al et e h in q u e s ot ht e
s y s et m iat
e s ut d i e s o f e h a n et er l l e s
.
eF ibe lm an
e t al
.
( 19 9 4 )
,
fo
r i n s t正1l l c e , d i s c o v e r ht at
ht e l e n g ht v a ir a it o n i n ht e IT S o f r D N A i n c h an et er l l
e s
.
A n o het
r er c e n t s t u d y (B e er s
eR
e e l v e d 19 9 8习4 一 14 , R e v i s e d 19 9 8习 7一 2 0
DOI : 10. 13346 /j . mycosystema . 1999. 01. 003
期 李泰辉等 : 鸡油菌的 25 5 r l ) N A部分序列及其系统学意义 1 3
e t a .l
,
19 9 5) h a s im P l i e d ht at a u ir a la ir ac e o u s fu n g i h va e b e e n d e v e l o Pi n g a l o n g i ts
o w n e v o l u it o n a ry l i n e
,
i t 15 im P or b
a b l e ht a t ht e H o m o ba s i d i o m y e e et s d e ir v e d for m
au ir
e u la ir ac e o u s f t u l g i
.
W ih l
e a
m
o er er e e n t s t u d y ( iH b b e t t e r a l, 19 9 7 )
,
i n w h i e h th e
n cu l e a r a n d m i ot e h o n d ir al s m al l s u b u n i t rD N A o f a er e x am i
n e d
, s u g g e s st ht at
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n ht a r e l l u s 翻b a efb r m is 15 e lo s e l
·
t o 场 dn u m a n d lC a v u l l’n a o f A P场 ll o P h o alr e s an d 15
er l a it v e l y i n d e P e n d e n t fr o m o ht e r
“
utr
e ag a ir e s (e u a g a ir e s )
” .
hT
e P er s e n t s ut d y 15 ot fu hrt
e r ivn
e s it g a et ht e i r P h y l o g e n e it e er l iat
o n s ih P s w i ht het
m o l e e u l a r s y s et m a it c et e h n iq ue s
.
S i n e e 2 5 S r】) 卜A c o n iat n s b o ht s l o w l y a n d r ap id l y
e v o l v i n g d o m ia n s
,
P o et n it a l l y er P er s e n it n g a w i d e 一 s P e c t r l l l l l i n d ic at o r , P a irt a l s e q u e n c e
o f 2 5 5 r l ) N A o f C
.
e i b a r i u s h a s b e e n d e et mr i
n e d an d i st P h y l
o g e n e it e er l a it o n s ih P s
a er d i s e u s s e d
.
2 M A T E R I A L S A N D M E T H O D S
F u n g a l s P e e im e n : C
.
e ib a r i u s w as c o l l e c et d fr o m J ian fe
n g l i n g aN ut er eR
s e vr e a t
a l t
.
8 0 0一 8 5 o m , 日由 n a n P or v i n c e , e h i n a , 19 9 2 年 5 月 2 0 日 . d uP l i e a et s p e e im e n s
(HM I G D 14 5 16 ) 15 P er s e vr e d i n t h e H e ht an um
o f iM
c r o b io l o g y In s it ut et o f
C u a n g d o n g (H M IG 【) ) .
T o t a l D N A e x t r a e t i o n : T o at l D N A 15 e x t r ac et d b y a m o d i if e d P or ot e o l o f M a kr
e t al
.
( 1 9 9 5 )
.
D N A 15 ht e n P u ir if e d w i t h D P S s y s et m i
n e l u d i n g g l a s s m i l k
,
N a l
,
T a b l e 1 S p e e ie s a n a ly z e d
, th e i r o r d i n a l P o s i t io n
,
D N A s o u r e e
, t a x a a b b r e v i a t io n a n d
G e n B a n k a c e e s s io n n u m b e r
S pe e l e s O dr e r A bb r 〔记 n B a n k
A e e e s s i o n
为刀 a n iat m u s e a r i a ( L . : rF ) P e sr .
A u r i e u l a r i a a u r i c u l a 寸 u da e ( B u l l . : rF ) S c h r o e t
《二Zn ht a r e l l u s e i b a r i u s rF .
G a n o de r 胡 a st “ g a e M u r .
leI l i
e o b a s i id
u m m o 刀 V〕a T a n ak
a
eH l i
e o g l o e a va r i a b i l沽 W e l l s
山 e at r i u s 〔刀 r r u g is eP c k
到勺l lop o r u s r h o do 淑 n ht u s ( S e h w . ) B er s -
尸抢 u r o ut s e o r n “ e OP i a e aP u le t: rF
.
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e e in ia g r a m i n is P e sr
.
法贷刀t o b a s id i u m e a r e s r i a n u 胡 B er s .
兀 l le t i a e a r i e s ( IX !` ) T u l .
rT i
e h o lo m a v e r n a lt c u爪
价 t ilag o h o r de i ( eP r s
,
) L a g e ht
.
八翻 e o r r a e e m o s “ s f丫e s .
A m a in at l e s
A u ir e u la r l al e s
C a n ht a er l la le s
A P h y l lo P h o r al e s
A u n e u la ir a l e s
A u ir e u la n al e s
R u s s u lal e s
B o l e 扭 l e s
A P h y ll o P h o alr
e s
U er d i n al e s
S e P t o b a s id i a l e s
T i l le it a le s
T ir e h o lo m a alt
e s
U s it l ag
l n al e s
M uc o ar le s
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L 2 0 2 7 8
l l S U bm l l l e d
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L 2 0 2 8 1
L 2 0 2 8 2
U 1 19 19
U 1 19 2 5
U O4 13 5
L O8 7 2 8
L 2 0 2 8 9
L 2 0 2 8 5
U 7 6 4 6 1
L 2 0 2 86
M 2 6 19 0
14 菌 物 系 统 18 卷
w a s h i n g bu fe
r
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e re s u lti n p ge l le t ( g la s s m i l卜 bin d i n g l) A N) 1 a 5 llo w e d to ai o d ry
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e n re s u s P e n d e d i n T E o r th e g la s s m i l卜 i bn d i n g D NA 1 5u s e d d i re c t y lfo r P C R
am
P li f le a ti o n
.
P C R a m P li fi c a t i o n : 5 0林1 o f P C R re ac ti o n s e o n ta in 2 . 0m
o / lL M gC I
,
; 5 0m m o l / L
K C I: I Om m o l / L T ir s 一 H C I, P H S . 0 : 2 0 0 n m o l / L dN T P s : 10 nm o l /L P ir m e r ; 2 u n i st
T aq l ) N A P
o l y m e r a s e a n d t r ac e m i l k g l a s s b i n d i n g D N A
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a dr P ir m e r 15 5 5# :
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C C A T A T C A A T A A G C G G A G G A A A A G 3
’ ,
P o s i it o n 4 0一 6 4 i n
ha
c e h a r o哪 e e s c e r e v i s i a e 2 5 5 r R N A ( Q u , 1 9 8 8 ) a n d ht e r e v e r s e P ir m e r 15 D 3 5 ’
A T A G T T C A C C A T C T I
,
T C G G ( 1 3
’ ,
P o s i it o n 13 3 0 一 13 5 0 i n 2 5 5 r RN A (a l s o
fr o m .5 c e r e v i s a e )
.
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e th e mr
a l p r o g r a m 15 : d e n a ut ir n g a t 9 2 oC fo r 1 m i n
,
an n e al i n g
at 5 5 oC fo
r 一 m i n , e x et n s i o n a t 7 2 oC fo r Z 一n i n : 3 0 e y e l e s ; a n if n a l e x et n s i o n a t 7 2 oC
fo
r 10 m i n : uP
o n e o m P le it o n
,
h o l d a t 4 oC
.
C lo n i n g a n d S e q u e n e i n g : P C R P or d
u e t 15 P u ir if e d w i t h l ) P S s y s et m
, a n d t h e n
e l o n e d i n t o 手v e c t o r: P l a s m id s for m 3 m l o f e u l t u er a er s u s P e n d e d i n 3 0林1 T E &
R N a s e
, a n d P u ir if e d w i t h l ) p s s y s et m
,
l卜1 o f ht e p la s m i d s 15 d i g e s et d w iht cE o租
a n d B a m H I I n a if n a l v o l u m e o f 10 卜1 ot v e ir fy e l o n i n g . 3 3协1 P l a s m i d s a er d e n a ut er d
b y ad d i
n g s 协1 o f 2 m o l / L aN O H a n d i n e u b a it n g a t 3 7℃ fo r 1 5 m i n : d e n a ut er d
忱m P l a et s w e er n e u t ar l i z e d a n d P er c i Pi at et d b y ad d i n g 6 协1 o f 3 m o l /L
am
o in unt
ac
e t a忱 ( P H 4 . 8 ) an d 12 0 协1 o f 1 0 0% E tO杖 d e n a ut er d P l a sm id P er e iP i at et s a er
P e l l e te d b y c e n tir fu g a ti o n an d ir
n s e d i n 7 5% EOt H
.
S u P e m a at n t 15 er m o v e d an d
pe l l e t s a er al lo w e d t o a i-r d yr
.
S e q u e n a s e v e sr i o n 2
.
0 S e q u e n e i n g K i t er a g e n st o f U n i et d S at et s B i o e h e m i e al ( U S B )
e o印 . a n d A m e r s ham d A T P [a ’ 5 5 ] l a b e l ( 10 协。
. 卜 l 一 ’ ) a er u s e d . 仆 e i n s e srt a er
s e q u e n e e d u s i n g th e am
P l i if e a it o n fo wr
a dr P ir m e r 5 5# fo l l o w e d ht e s at n d a dr U S B
s e q u e n c i n g P r o t o e o l
,
P or duc st
o f ht e er ac it o n s a er er s o l v e d o n s at n d a dr s%
P o l y ac yr lam id
e ( 1 9 : 1 a e yr l am i d
e : ib s一ac yr l a m i d e ) , 8
.
3 M u er a
,
1 X T B E g e l
.
eG l 1
5
if x e d i n 10% e th a n o l / 1 0% g la c i al ac e ti e fo r 3 0m i n
,
d ir e d a t SOoC w i th 叩 p l i e d
v ac u u m
, a n d e x P o s e d to X 一 r a y fl lm
.
S e q u e n e e a li g n m e n t a n d a n a ly s i s一 s e q u e n e e s a er m a n u a ll y a l i g n e d a n d g a P s a er
in t r o d u c e d
. 压 s t a n e e a n a l y s e s a er Pe r fo mr e d u s i n g P h y l ip v e sr i o n 3 . 5 ( eF l s e n s et i n ,
19 9 3 )
.
P ia wr i
s e d i s at n e e m a t ir e e s a er g e n e r a ot d fr o m ht e a li g n e d s e q u e n e e s u s i n g het
1) N Ad i s t P r o g r a m o f P h y l l P w i t h 幻 m u r a M o d e l s o f n cu l e o tid e s u b s it t u it o n ( K im i u ar ,
19 8 0 )
.
P h y l o g e n i e s a er e s it m
a et d fr o m t h e d i s ta l l c e m a itr e e s u s i n g iF 忱h- M ar g o l i a s h
(iF tC h P r o g r a m ) w iht g l o b a l er a r a n g e m e n 招 . B o o st t ar P p i n g 15 p e for mr e d u s i n g ht e
S e q b o o t C o n s e n s e P or g
r
am
s w iht 10 0 er P l i e a et s
.
hT
e m a x im u m li k e l ih o o d t r e e s a er
e o n s t
cur
et d w iht a t r a n s i it o n / t r a n s v e sr i o n P a r am
e et r o f 2
.
0 ( t r an
s i it o n s aer wt i
e e as
li k e ly a s t r a n s v e r s i o n )
.
期 李泰辉等 :鸡油菌的5 25 rD A N部分序列及其系统学意义l5
E 3 RU ST L SA ND D I SCU S SIO N
Mor h e ta n 70 0 ba s ePa ir s
s el c e e tda n d eom Pa r d ew ih t
Pr d e e eo s s er sr fom 1 3r ePr esl e za ti tv e
o fCei ba r i s u15 l o n ger tha nh to s e
O fth e
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s P e Cl s e
o fa ny
r fa gm n e ta r ed e e trm i
n ed
, a n d 2 5 8 b P s a er
h o m o l o g o u s s e q u e n e e s d e t emr i
n e d b y
o f 10 b a s id i o m y e e et o dr
e r s
.
T h e f r a g m e n t
o t h e r B a s id i o m y e e et s ( w i t h o n l y Z ] 4 t o 2 4 1
7 0
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C T及.G T及月心 G G C G及G T GA A GA GG AA A G共石 C T C几 A A G T士一 G G A二 A C T 一G T T T C G一 C T T共石 C T
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一 r及 G T及月心 G G C G A G T G AA GA G G G月 J J心 C C C ~及及 A一 T T 一 G T AA T C T ~ G召~ 一
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28 5
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e s , i t 15 i n ht e g r o u P s m i入e d
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o n g H o m o b a s i d i o m y c e et s
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I t 15 w o rt h y b e i n g fu hrt
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o r i st a l li e s : i t h a s m u e h l e s s a if n i yt w 一t h a u ir e u l a n ac e o 一15 fu n g i ht an w iht
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1 8 菌 物 系 统 1 8 卷
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李泰辉等 : 鸡油菌的2 5 5 D rN A部分序列及其系统学意义
o n 2 5 5 i rb o s o ma l 』〕N As e q u e n e e s . 场 e o l o g i a 8 7 ( 6) : 8 2 1一 8 4 0
氏nk N I A, 19 6 4 . A e o n s pe e t u s o f ht e 几11ll i l z e s o f A P h y l lo P h o ar l e s . eP r s o o n i a 3 : 19 9一 3 24
eF ibe lrn a n T
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, 肠 lbu l a WG, 19 9 4 . 坟 n g ht v a ir a ti o n i n ht e i n et nr al tar n s e ir b e d s P ac e r o f ir b o s o m al
D N A I n e h a n et er lle s
. 岭〔 o l o g i e a l 凡 s e a r e h 9 8 ( 6): 6 14一 6 1 8
比 b b e t t D S, 巧 ne E M , L a n g e r E , L a n g e r G , 山 n o g h u e M J , ! 9 9 7 . E v o l u it o n o f 肠 l le d M u s h ro o m s an d uP f’b al l s
In fe r r e d fro m jR b
o s o m al l )卜A S e q u e n e e s . 介。 `· 撇 tl 刀 e a d 及下 v 剐 9 4 : 12 0 0 2一 12 0 0 6
J让l l e h w , 19 8 1
. 伟 g h e r T ax a o f aB , id i o 刀 U` e勿 5 J . (〕 n m e r , eG m a n y
P e et sr o n R l l
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19 7 1
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S i n g e r 民 19 8 6 . T h e A g an e a l e s in M o d e rn T ax o n o m y . K o e l tz S c l e n t l八e B o o k s , eG rm a n y
鸡油菌的
李泰辉 ’
25 5 r D N A 部分序列及其系统学意义
陈月琴 2 屈良鹊 2 陆勇军 2 宋 斌
(中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学 开放研究实验室 , 北京 10 0 0 80)
(
’广东省微生物研究所 , 广州 5 10 0 7 0)
( 2中山大学生物工程研究中心 , 广 州 5 10 2 7 5)
摘 要 菌物分类学家通常根据形态学 、 解剖学和显微观察特征的分析把鸡油菌类真菌
(c an ht are lo id fun is) 置于非褶菌 目助彻 z娜 h o ra le s 中或在非褶菌 目和其他真正 的伞菌之
间 , 但由于缺乏足够的科学证据 , 有关其进化历史及其在担子菌中的系统发育位置等方面 的
关系等的各种假设 , 一直都存 在着激烈的争论 。 本文从分子系统学 角度 出发 , 对鸡油 菌
aC
n hl ar el us
。 ib ar iu ; 的 2 55 r D N A 部分序列进行了测定 , 并与另外 10 目的 13 个担子菌代表
种 和 一个 接 合菌 代 表种 的 25 r l ) N A 序 列 进行 比 较分 析 , 以 接合 菌 总 状毛 霉 几石记co ;
ar ce m 口翎 : 为外类群构建出这些担子菌的系统树图 , 探讨鸡油菌与其他担子菌的关系及其系统
学上的意义 。 从所构建的 10 多个进化树图来看 , 鸡油菌几乎总是在树图中最远的分枝的末
端 , 与 同担 子菌 中的各类 肉质 的伞菌 目纯 an ca les 和 牛 肝菌 目 B ol e alt es 的 类群 (乳菇 属
山 c la iur 、 、 褶孔菌属 月即 z入沪 oI’ 。 、 鹅膏属 」m an iat 和 口蘑属 rT i动 01 0脚a) 最接近 , 其次是同担子
菌中的非褶菌目的类群 (侧耳属 leP ur o ut ; 和灵芝属 G an o de r m a) , 然后才是木耳 A ur i川 la ir a 等
有隔担子菌的类群 。 用于 比较的鸡油菌 1) N A 片段长度最长 , 有 25 8 个碱基 , 而其他类群则只
有 2 14 至此 2 41 个碱基 。 本文认为鸡油菌与其他各 肉质的伞菌类群的关系相对较密切 , 但它
应该有其相对独立的进化路线 , C 日e u m an n ( 1 92 6) 把这一类真菌上升至 目一级的分类阶元是
比较恰 当的 ; 但它并不是其他伞菌或同担子菌的原始类型 , 本研究的分子生物学证据不支持
Jilt hc ( 198 1) 认为鸡油菌起源于木耳类真菌 、 然后再 由鸡油菌类真菌演化出各种伞菌 (甚至其
他同担子菌 )的假设。
关键词 鸡油菌 , 25 5 r D N A 序列 , 系统学意义 ,
中图分类号 Q 9 39 5 ; 文献标识码 : A ; 文章编号 : 10 0 7一 35 1 5 ( 1 9 99 ) 0 1一0 0 1 2一 0 0 1 9