全 文 ：收稿日期:2007-06-20基金项目:苏州市科技厅资助项目(ZS0307);苏州大学青年教师研究基金(Q3132532)。
作者简介:唐丽华(1952-), 女 , 山东人 , 副教授 , 硕士生导师 ,中药新剂型与新技术。 E-mail:tanglihua@suda.edu.cn
AB-8树脂对珍珠菜总黄酮的吸附性能研究
唐丽华 ,游本刚 ,王祎茜 ,李根发
(苏州大学药学院 , 江苏 苏州 215007)
摘　要　目的:考察 AB-8树脂对珍珠菜提取液中总黄酮的吸附 、解吸附性能及影响因素。方法:采用紫外分光光
度法测定总黄酮的含量 ,分别考察了样品液浓度 、pH值和流速对 AB-8树脂吸附珍珠菜总黄酮的影响 ,以及洗脱
剂乙醇浓度和流速对解吸附效果的影响。结果:样品液总黄酮浓度 10mg/mL、pH值 5.07、流速 1.0mL/min时 , AB
-8树脂对珍珠菜总黄酮的吸附效果较好;洗脱剂为 70%乙醇 ,流速 1.5 mL/min时 , 洗脱完全 , 固体总黄酮含量较
高。结论:在上述条件下 , AB-8树脂可用于珍珠菜提取液中总黄酮的分离纯化。
关键词　珍珠菜;总黄酮;AB-8树脂
中图分类号:R948　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1006-9690(2008)02-0049-03
AdsorptionPropertiesofAB-8 ResintoSeparateandPurifyTotal
FlavonesinLysimachiaclethroideDuby
TangLihua, YouBengang, WangYiqian, LiGenfa
(SchoolofPharmaceuticalScience, SooChowUniversity, Suzhou215007, China)
Abstract:OBJECTIVEToinvestigatetheadsorptionanddesorptionproperties, andfactorsofAB-8res-
infortotalflavonesinLysimachiaclethroideDuby.METHODSUVspectrophotometrywasusedtodeter-
minetheconcentrationoftotalflavones.Factorsofconcentration, pHandfluidvelocityofsamplesthat
afectadsorptionofflavones, andconcentrationandfluidvelocityofethanolthatafectdesorptionoffla-
voneswereinvestigated.RESULTSTheoptimumconditionsforAB-8resintoseparateandpurifytheto-
talflavonesfromLysimachiaclethroideDubywereasfolows:concentrationoftotalflavonesofliquidsam-
pleswas10 mg/mL, pHwas5.07, andfluidvelocitywas1.0 mL/min, concentrationandfluidvelocity
ofethanolaseluantwere70% and1.5mL/min, respectively.CONCLUSIONTotalflavonesinLysima-
chiaclethroideDubywouldbewelseparatedandpurifiedwhenAB-8resinwasused.
Keywords:LysimachiaclethroideDuby;totalflavones;AB-8 resin
　　珍珠菜(LysimachiaclethroideDuby)系报春花科
植物虎尾珍珠菜的根或全草 ,味苦 、辛 ,性平 ,具有清
热利湿 ,活血散淤 ,解毒消痈之功效 [ 1] 。国外学者
从 20世纪 70年代开始 ,相继从中分离得到槲皮素
苷 ,山奈素 ,黄芪素等黄酮类化合物 [ 2-3] ,国内学者
近年来对其化学成分也有所研究 [ 4 -5] 。本实验室曾
经对珍珠菜提取物进行药理学研究 ,发现从全草得
到的黄酮类化合物具有良好的抗肿瘤作用[ 6-7] 。
AB-8树脂是一种树状弱极性聚合物吸附剂 ,具有
相当大的比表面和适宜的孔径 ,对多种中药有效成
分具有良好的吸附作用[ 8-11] 。本文详细研究了 AB
-8树脂对珍珠菜总黄酮的吸附性能 ,并初步确定
了珍珠菜总黄酮的分离纯化工艺 。
1　仪器与试剂
UV-2401PC紫外 -可见分光光度计(日本岛
—49—
第 27卷第 2期
2008年 4月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.27 No.2Apr.2008
津制作所),电子分析天平(starorious), DZ-900回
转振荡器(中国太仓市实验设备厂), PHS-3TC精
密酸度计 (上海天达仪器有限公司),调温电热器
(上海电理仪器厂),旋转蒸发器(上海申生科技有
限公司);AB-8树脂(南开大学化工厂),芦丁标准
品 (中国药品生物制品鉴定所), 95%乙醇(分析
纯 ,上海振兴化工一厂),无水三氯化铝(分析纯 ,上
海金山区兴塔美兴化工厂),珍珠菜药材(苏州雷允
上药材采购站 ,经本院生药教研室刘春宇副教授鉴
定为珍珠菜全草)。
2　实验方法与结果
2.1　含量测定方法
采用紫外分光光度法 [ 12 -15] ,最大吸收波长 405
nm,显色剂为 10% AlCl3溶液 ,溶剂为 95%乙醇 ,对
照品为芦丁 。标准曲线为 C=38.672A+0.075, r=
0.999 9(n=5),线性范围 4.014 ～ 32.112 g/mL,质
量浓度与吸收度值的线性关系良好。具体测定方法
如下:取一定量待测样品溶液于 25mL容量瓶中 ,加
入 1 mL10%AlCl3 ,以 95%乙醇定容至刻度 ,在 405
nm处测定其吸收度值 ,代入标准曲线方程求得总黄
酮的浓度。
2.2　AB-8树脂吸附性能考察
2.2.1　珍珠菜提取液的制备
采用加热回流法 ,取珍珠菜经粉碎的药材适量 ,
依次加入加 12、10、8倍量的 80%乙醇 ,加热回流提
取 3次 ,每次 1.5 h,合并提取液 ,过滤 。滤液减压回
收溶剂并浓缩至 2 mL/g药材 ,浓缩液加 2倍量水稀
释 ,静置 、抽滤除去不溶性物质 ,滤液再次浓缩后即
得珍珠菜提取液 ,冷藏保存备用 。
2.2.2　静态吸附性能考察
取经预处理的 AB-8湿树脂 3份(每份 4.0 g)
于 100mL具塞锥形瓶中 ,精密加入 10 mg/mL样品
液 50mL,置电子振荡器上恒温振荡 24h(25℃, 110
r/min)。分别测定样液的初始浓度与平衡浓度 ,计
算饱和吸附量(mg/g湿树脂)。将吸附饱和后的树
脂用水洗至洗脱液无色 ,吸干树脂表面残留的溶液 ,
精密加入 95%乙醇 50 mL,振荡 24 h后过滤 ,测定
滤液总黄酮浓度 。计算洗脱出的总黄酮量及洗脱百
分率 ,结果见表 1。
表 1　AB-8树脂对总黄酮静态吸附性能考察(n=3)
树脂
编号
初始浓度(mg/mL) 平衡浓度(mg/mL) 饱和吸附量(mg/g) 洗脱量(mg) 洗脱百分率(%)
1 9.98 7.04 36.81 143.19 97.25
2 9.98 6.90 38.50 137.75 89.44
3 9.98 7.19 34.88 146.81 105.24
平均 9.98 7.04 36.73 142.58 97.31
　　结果表明 , AB-8湿树脂的平均吸附率为
36.73mg/g, AB-8树脂干湿比为 0.334,则每克干
树脂可吸附总黄酮 109.97 mg, 95%乙醇平均洗脱
百分率为 97.31%。
2.2.3　动态吸附性能考察
2.2.3.1　样品液浓度对吸附性能的影响
准确称取经预处理的湿树脂 20.0g,湿法装柱 ,
分别以不同浓度样液上柱 , pH3.57,流速为 1.5mL/
min,样品液总黄酮量约为 2 000mg。收集流出液 ,
测定总黄酮浓度 ,计算各浓度下的树脂饱和吸附量 ,
饱和吸附量 =(样品液浓度 ×加液体积 -流出液浓
度 ×其体积)/树脂量(mg/g湿树脂);并将各流出
液制备成固体 ,测定其中总黄酮的含量 ,结果见表 2。
表 2　样品液浓度对 AB-8树脂总黄酮
吸附性能的影响(n=3)
样品液浓度
(mg/mL)
饱和吸附量
(mg)
固体总黄酮含量
(%)
5.002 740.75 3.95
9.715 772.35 4.94
15.251 601.88 7.34
20.061 549.35 7.65
由上表可见 ,样品液在 5或 10 mg/mL左右时
饱和吸附量较大 ,有较好的吸附效果 ,且流出液中固
体总黄酮含量较小 ,说明此时被吸附的物质中总黄
酮含量较高。随着样品液浓度的增加 ,流出液中总
黄酮固体含量增加 ,样品液的利用率降低。
2.2.3.2　上样速度对吸附性能的影响
准确称取经预处理的湿树脂 20.0g,湿法装柱 ,
以浓度为 10mg/mL, pH3.57的样品溶液上柱 ,加液
体积为 200 mL,流速分别控制为 0.5、1.0、1.5、2.0、
2.5 mL/min。计算各流速下的树脂饱和吸附量 ,并
测定各流出液中总黄酮的固体含量 ,结果见表 3。
—50—
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 27卷
表 3　上样速度对 AB-8树脂总黄酮
吸附性能的影响(n=3)
上样速度
(mL/min)
饱和吸附量
(mg)
固体总黄酮含量
(%)
0.5 562.72 5.96
1.0 706.74 5.19
1.5 772.35 4.93
2.0 661.32 5.43
2.5 639.84 5.45
由上表可见 ,流速对树脂的饱和吸附量影响较
大 , 1.5 mL/min时饱和吸附量最大 ,当流速增大或
减小时 ,饱和吸附量都有所降低 。
2.2.3.3　样品液 pH值对吸附性能的影响
准确称取经预处理的湿树脂 20.0 g,湿法装柱 ,
上柱样液浓度为 10 mg/mL,加液体积为 200 mL,调
节其 pH值分别为 2.57、 3.07、3.57、4.07、 4.57、
5.07、5.57、6.07、6.57、7.07,流速为 1.5 mL/min。
计算各 pH下的树脂饱和吸附量 ,并测定各流出液
中总黄酮的固体含量 ,结果见表 4。
表 4　pH值对 AB-8树脂总黄酮吸附性能的影响(n=3)
pH值 饱和吸附量(mg) 固体总黄酮含量(%)
2.57 414.23 6.34
3.07 525.86 5.98
3.57 557.39 5.95
4.07 585.84 5.74
4.57 595.27 5.47
5.07 666.63 4.12
5.57 579.43 4.93
6.07 572.18 4.87
6.57 561.44 5.01
7.07 559.13 5.02
由上表可见 ,样品溶液 pH值对吸附有较大影
响 ,较低 pH值时 ,树脂的饱和吸附量随着 pH值的
增加而增加 ,到 pH5.07以后 ,饱和吸附量则随 pH
值的增加而减小 。因此 , 样品液 pH值以 5.07左右
为最佳 。
2.3　AB-8树脂的解吸附性能考察
2.3.1　乙醇浓度对总黄酮解吸附性能的影响
对已知吸附总黄酮量的饱和吸附树脂柱 ,用不
同浓度乙醇进行动态洗脱 , 统一流速为 1.0 mL/
min,洗脱液总量为 200 mL。测定洗脱液中总黄酮
浓度 ,计算洗脱百分率 ,并将洗脱液制备成固体 ,测
定其中总黄酮的含量 ,结果见表 5。
表 5　不同乙醇浓度下的解吸附结果(n=3)
乙醇浓度 洗脱百分率(%)
固体总黄酮含量
(%)
30% 71.40 27.82
40% 85.33 29.46
50% 97.52 26.33
60% 95.74 25.45
70% 98.30 23.15
80% 97.37 23.95
95% 97.34 24.82
由上表可见 ,乙醇浓度较低时 , 洗脱百分率较
低 ,但固体总黄酮含量较高;当乙醇浓度增加时 ,洗
脱百分率升高 ,但固体总黄酮含量有所降低。考虑
到总黄酮的收率 ,宜采用 70%作为洗脱剂 。
2.3.2　洗脱剂流速对总黄酮解吸附性能的影响
对已知吸附总黄酮量的饱和吸附树脂柱 ,统一
以浓度为 70%的乙醇 ,采用不同流速进行动态洗
脱 ,洗脱液总量为 200 mL。测定洗脱液中总黄酮浓
度 ,计算洗脱百分率 ,并将洗脱液制备成固体 ,测定
其中总黄酮的含量 ,结果见表 6。
表 6　不同流速下的解吸附结果(n=3)
乙醇流速(mL/min) 洗脱百分率(%) 固体总黄酮含量(%)
0.5 99.85 24.85
1.0 98.30 23.15
1.5 98.21 30.77
2.0 97.53 25.88
2.5 95.28 27.62
由上表可见 ,采用 70%乙醇洗脱时 ,洗脱百分
率均在 95%以上 ,洗脱完全;当流速为 1.5 mL/min
时 ,固体总黄酮含量最高 ,可达 30.77%,所以采用
的洗脱流速应为 1.5 mL/min。
3　讨　论
(1)静态吸附实验表明 , AB-8树脂对珍珠菜提
取液中总黄酮有较好的吸附特性 ,每克干树脂可吸附
总黄酮 109.97mg,用 95%乙醇可将其较好的洗脱。动
态吸附实验结果表明 , AB-8树脂纯化珍珠菜总黄酮
是可行的 ,当样品液浓度为10mg/mL、pH值为 5.07、流
速为 1.5 mL/min时 , AB-8树脂对珍珠菜总黄酮的吸
附效果较好。 (下转第 60页)
—51—
第 2期　　　　　　　　　　　　　唐丽华 ,等:AB-8树脂对珍珠菜总黄酮的吸附性能研究　　　　　　　　　　　　　
酶的电泳分析 ,结果表明:2个品种牡丹既有相似
点 ,又各具特征。 POD同工酶中 ,二者共有酶带 3
条 ,铜陵牡丹较垫江牡丹多出 4条特有酶带 ,且铜陵
牡丹的 POD同工酶活性很强 ,说明 POD同工酶在
铜陵牡丹花蕾雄蕊中的表达更活跃 ,较之垫江牡丹 ,
铜陵牡丹花蕾雄蕊的代谢更复杂一些 ,这可能与调
控铜陵牡丹花结实有关;而垫江牡丹花中代谢较单
一 ,也可能也其只开花不结实有一定的相关性 。
EST同工酶中 ,铜陵牡丹和垫江牡丹共有酶带
5条 ,并各具特征酶带。二者的共有酶带说明二者
在基因分化上的相似以及二者的亲缘关系相近;特
征酶说明了在不同原生态环境下形成的 2个牡丹栽
培品种在基因分化上的差异 ,表现在植株形态上有
明显的不同。
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(上接第 51页)
　　(2)乙醇对总黄酮的动态洗脱实验表明 , AB-8
树脂对总黄酮的解吸附性能好 ,速度快 ,解吸完全 。
乙醇浓度对解吸附性能有很大影响 ,低浓度的醇洗
脱不完全 ,但得到的固体总黄酮含量较高 ,随着乙醇
浓度的增加 ,洗脱速度加快 ,洗脱百分率增大 ,但固
体总黄酮含量有所降低。综合考虑 ,可采用 70%作
为洗脱剂。
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