全 文 ：檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
性物质减少所致，具体的原因有待于进一步研究。
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［责任编辑 聂淑琴］
［收稿日期］ 20130104(020)
［基金项目］ 全军医学科技“十二五”重大项目(AS11J003)
［第一作者］ 何晓义，硕士研究生，从事中药药理与新产品开发研究，Tel:13817429757，E-mail:hy062412@ 163． com
［通讯作者］ * 沈先荣，博士生导师，研究员，从事海洋生物及中药研究，Tel:021-81883171，E-mail:xianrong_sh@ yahoo． com
木蹄复方提取物体内抗肿瘤作用研究
何晓义1，葛卫红1，刘琼2，沈先荣2* ，何颖2，蒋定文2，
陈伟2，莫琳芳2，刘玉明2，侯登勇2，王庆蓉2，钱甜甜2
( 1. 浙江中医药大学中药体外代谢实验室，杭州 310053;
2. 海军医学研究所防护医学研究室，上海 200433)
［摘要］ 目的:考察木蹄复方提取物(ECF)的体内抗肿瘤活性，并探讨部分作用机制。方法:制备 S 180和 Lewis 肺癌实
体瘤小鼠模型，接种次日将 2 种实体瘤模型小鼠均分为模型组，EFC 低、中、高剂量(0. 05，0. 1，0. 15 g·kg －1)组和环磷酰胺
(CTX)阳性对照组，分别连续给药 8 和 15 d，观察 ECF 对荷瘤小鼠瘤质量、胸腺指数和脾脏指数、血清中肿瘤坏死因子-α
(TNF-α)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)水平的影响。结果:ECF 低、中、高 3 个剂量组对 S 180荷瘤小鼠肿瘤抑制率分别
为 11. 8%，47. 1%和 58. 8%;对 Lewis肺癌实体瘤小鼠肿瘤抑制率分别为 7. 1%，57. 1%和 28. 6%。与模型组比较，ECF 高剂
量组能抑制 S180荷瘤小鼠肿瘤的生长(P ＜ 0. 05) ，提高胸腺指数(P ＜ 0. 05) ，降低血清中 M-CSF 水平;中剂量组可抑制 Lewis
肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长(P ＜ 0. 05) ，提高胸腺指数(P ＜ 0. 05) ，降低血清中 M-CSF水平，3 个剂量组均能提高血清中 TNF-α
水平(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)。结论:ECF对 S 180荷瘤小鼠和 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长具有明显抑制作用，显示较强的体
内抗肿瘤活性，其作用机制可能与提高免疫器官指数以及调节血清中 TNF-α和 M-CSF的表达有关。
［关键词］ 木蹄复方;体内;抗肿瘤;肿瘤坏死因子-a;巨噬细胞集落刺激因子
［中图分类号］ R285. 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0170-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150170
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． R． 20130527． 1142． 008． html
［网络出版时间］ 2013-05-27 11:42
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第 19 卷第 15 期
2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013
Antitumor Effect of Extracts from Compound Fomes fomentarius in vivo
HE Xiao-yi1，GE Wei-hong1，LIU Qiong2，SHEN Xian-rong2* ，HE Ying2，JIANG Ding-wen2，CHEN Wei2，
MO Lin-fang2，LIU Yu-ming2，HOU Deng-yong2，WANG Qing-rong2，QIAN Tian-tian2
(1. Metabolism Laboratory of Traditional Chinese Medicine (TCM) ，
Zhejiang Chinese Medicine University，Hangzhou 310053，China;
2. Department of Radiation Protection Medicine，Navy Medical Research Institute，Shanghai 200433，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the anti-tumor activity in vivo of extract from compound Fomes
fomentarius (ECF) ，and reveal the anti-tumor mechanism of ECF． Method:S180-bearing and Lewis tumor-
bearing mice models were established． Mice were divided into five groups，model group，cyclophosphamide (CTX)
group，high- (0. 15 g·kg －1) ，middle- (0. 1 g·kg －1)and low-dose (0. 05 g·kg －1)of ECF． The S180-bearing
and Lewis tumor-bearing mice in every group received corresponding drugs for 10 and 15 days respectively，then
the effects of ECF on tumor growth，thymus and spleen indexs，tumor necrosis factor (TNF-α) and macrophage
colony-stimulating factor (M-CSF)levels were determined． Result:The inhibition rate of the three groups (low-，
middle-，and high-dose group)of ECF in S180-bearing mice was 11. 8%，47. 1% and 58. 8% respectively，and
in Lewis tumor-bearing mice，the inhibition rate was 7. 1%，57. 1% and 28. 6% respectively． Compared with
model group，high-dose group of ECF could inhibit tumor growth and reduce M-CSF levels of S180-bearing mice
(P ＜ 0. 05) ，middle-dose group could inhibit tumor growth and reduce M-CSF levels of Lewis tumor-bearing mice
(P ＜ 0. 05) ，high-dose group could increase thymus indexes，high-，middle-and low-dose groups of ECF could
elevate TNF-α levels (P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)． Conclusion:ECF could exhibit effect on the growth of transplanted
S180 and Lewis tumor，probably via increasing indexes of immune organ and the regulation of TNF-α and M-CSF
expression．
［Key words］ compound Fomes fomentarius ;in vivo;antitumor;TNF-α;M-CSF
木蹄层孔菌 Fomes fomentarius(L． ex． Fr．)
Kickx．又名火绒层孔菌，为多孔菌科、层孔菌属药用
真菌［1］，松针层孔菌 Phellinus igniarius(L． ex． Fr．)
Quel．又名松木层孔菌，为多孔菌科、层孔菌属药用
真菌［2］，赤芝 Ganoderma lucidum (Leyss． ex． Fr)
Karst．为多孔菌科、灵芝属药用真菌［3］。把三者组
成复方进行抗肿瘤作用的研究，前期结果表明本复
方提取物(ECF)对多种肿瘤细胞的生长具有较强的
抑制作用，并可诱导肿瘤细胞凋亡，本研究进一步考
察其体内抗肿瘤活性并初步探讨其可能作用机制。
1 材料
1. 1 瘤株与动物 S180 腹水瘤种鼠和 Lewis 肺癌
实体瘤种鼠购自上海医药工业研究院;C57BL /6 小
鼠 40 只，SPF级，雄性，18 ～ 22 g，购自上海斯莱克实
验动物有限责任公司，许可证号 SCXK(沪)2007-
0005;ICR小鼠 40 只，SPF 级，雄性，18 ～ 22 g，购自
上海西普尔-必凯实验动物有限公司，许可证号
SCXK(沪)2008-0016。
1. 2 药物与试剂 木蹄复方提取物(ECF)为实验
室制备(批号 20120323)。复方组成药味和比例为
木蹄层孔菌∶赤芝∶松针层孔菌 4∶ 1∶ 2。ECF 制备工
艺如下:复方药材，粉碎，加水，100 ℃加热回流提取
3 次，每次 2 h，料液比分别为 1∶ 20，1∶ 15 和 1∶ 10，过
滤，合并滤液，9 000 r·min －1离心 30 min，上清液减
压浓缩，浓缩液加 95% 乙醇使乙醇体积分数为
80%，4 ℃静置 24 h，9 000 r·min －1离心 30 min后弃
沉淀，上清液减压浓缩，真空干燥，即得 ECF。ECF
总糖含量在 13. 1%以上，总三萜含量在 5. 5%以上，
总黄酮含量在 7. 9%以上。环磷酰胺(CTX) (江苏
恒瑞医药股份有限公司，批号 11030621) ;肿瘤坏死
因子-α(TNF-α)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)
ELISA试剂盒(达科为生物科技有限公司) ，其他试
剂均为市售分析纯。
1. 3 仪器 354 型酶标仪(美国 Thermo 公司) ;TB-
214 型电子天平(北京赛多利斯分析系统有限公
司) ;超净工作台(苏净集团安泰公司)。
2 方法
2. 1 S180 荷瘤小鼠肿瘤模型的制备与分组给
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何晓义，等:木蹄复方提取物体内抗肿瘤作用研究
药［4-5］ 取肿瘤生长良好的 S 180腹水瘤 ICR 小鼠，
无菌条件下取腹水，用生理盐水 1∶ 8稀释，接种在同
种异体小鼠右前肢腋下皮下，每只 0. 2 mL，接种 24
h后按体重随机分为 5 组，每组 8 只，分别为模型
组，ECF 低、中、高剂量组(0. 05，0. 1，0. 15 g·kg －1)
和阳性对照组(CTX，0. 03 g·kg －1)。模型组每天 ip
0. 2 mL生理盐水，给药组每天 ip 0. 2 mL 不同浓度
的 ECF，阳性对照组每天 ip 0. 2 mL 环磷酰胺溶液，
连续给药 8 d。
2. 2 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤模型的制备与分组给
药［6］ 取肿瘤生长良好的 Lewis 肺癌 C57BL /6 小
鼠，无菌条件下取瘤块，剔除包膜和坏死部分，加生
理盐水(1∶ 4)匀浆。接种在同种异体小鼠右前肢腋
下皮下，每只 0. 2 mL，接种 24 h后按体重随机分组，
分组和给药方法同 2. 1，连续给药 15 d。
2. 3 ECF对荷瘤小鼠肿瘤的抑制率、免疫器官指数
及血清中 TNF-α和 M-CSF 水平的影响 末次给药
24 h后，分别称取小鼠体重，各组动物摘眼球取血，
分离血清，ELISA 法检测血清 TNF-α 和 M-CSF 含
量。剥取瘤块、胸腺和脾脏，称重，计算抑瘤率和胸
腺(脾)指数。
抑瘤率 =(模型组瘤质量 －给药组瘤质量)/模型组瘤
质量 × 100%
胸腺(脾)指数 =胸腺(脾)质量(mg)/体重(g)
2. 4 统计学处理 实验结果以 珋x ± s 表示，经 SPSS
17. 0 统计软件处理并进行 t 检验，以 P ＜ 0. 05 为有
统计学意义。
3 结果
3. 1 对 S180 荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用 ECF 低、
中、高 3 个剂量对 S180 荷瘤小鼠肿瘤均有一定的抑
制作用，呈现剂量依赖关系，与模型组比较，ECF 高
剂量组小鼠瘤质量显著减轻(P ＜ 0. 05)。与阳性
对照组比较，ECF 3 个剂量组小鼠肿瘤质量增加，低
剂量组差异显著，抑瘤率明显低于阳性对照组
(P ＜ 0. 05)。见表 1。
表 1 ECF对 S180 荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用(珋x ± s，n = 8)
组别 剂量 / g·kg －1 瘤重 / g 抑瘤率 /%
模型 － 1. 65 ± 0. 93 0
ECF 0. 05 1. 48 ± 0. 603) 10. 56
0. 10 0. 92 ± 0. 61 44. 00
0. 15 0. 70 ± 0. 331) 7. 67
CTX 0. 03 0. 48 ± 0. 172) 71. 20
注:与模型组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与 CTX 组比较3)P ＜
0. 05，4)P ＜ 0. 01(表 2 ～ 4 同)。
3. 2 对 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用 ECF
低、中、高 3 个剂量组对 Lewis 肺癌荷瘤小鼠肿瘤均
有一定的抑制作用，但没有剂量依赖关系，与模型组
比较，ECF中剂量组抑瘤率显著(P ＜ 0. 05)。与阳
性对照组比较，ECF 3 个剂量组抑瘤率明显低于阳
性对照组(P ＜ 0. 05)。见表 2。
表 2 ECF对 Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用(珋x ± s，n = 8)
组别 剂量 / g·kg －1 瘤重 / g 抑瘤率 /%
模型 － 1. 44 ± 0. 70 0
ECF 0. 05 1. 28 ± 1. 273) 11. 56
0. 10 0. 6 ± 0. 71，3) 56. 51
0. 15 1. 00 ± 0. 922，3) 31. 01
CTX 0. 03 0 ± 02) 100
3. 3 对 S180 荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数及血清中
TNF-α和 M-CSF水平的影响 和模型组比较，ECF
高剂量组能明显增加 S180 荷瘤小鼠的胸腺指数
(P ＜ 0. 05) ，但 ECF各剂量组脾指数无明显变化，阳
性对照组胸腺指数和脾指数均显著低于模型组(P
＜ 0. 01) ，也显著低于 ECF 各剂量组(P ＜ 0. 01)。
ECF各剂量组和模型组比较可显著升高荷瘤小鼠
血清中 TNF-α水平(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ，也显著高
于阳性对照组。血清中 M-CSF 水平各组间没有显
著差异。见表 3。
3. 4 对 Lewis肺癌荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数及
血清中 TNF-α和 M-CSF 水平的影响 和模型组比
较，ECF高剂量组明显增加荷瘤小鼠胸腺指数(P ＜
0. 05) ，但 ECF各剂量组脾指数无明显变化，阳性对
照组胸腺指数和脾指数均显著低于模型组(P ＜
0. 01)。ECF各剂量组和模型组比较可显著升高荷
瘤小鼠血清中 TNF-α 水平(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ;
ECF 3 个剂量组小鼠血清中 M-CSF 水平与模型组
比没有显著差异。见表 4。
4 讨论
恶性肿瘤的发生、发展、转移都与机体的免疫状
态有密切关系。当宿主免疫功能低下或受抑制时，
肿瘤发生率增高，而在肿瘤进行性生长时肿瘤患者
的免疫功能受抑制，二者也互为因果。机体抗肿瘤
的免疫机制主要包括细胞免疫和体液免疫两方面，
其中以 T 细胞介导的细胞免疫为主导。细胞因子
是由活化的淋巴细胞、单核巨噬细胞等产生的一类
活性物质，近年来 TNF-α，M-CSF等细胞因子的抗肿
瘤作用越来越引起重视。
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第 19 卷第 15 期
2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013
表 3 ECF对 S180 荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数及血清中 TNF-α和M-CSF水平的影响(珋x ± s，n = 8)
组别 给药剂量 / g·kg －1 胸腺指数 /mg·g － 1 脾指数 /mg·g － 1 TNF-α /ng·L －1 M-CSF /mg·L －1
模型 － 2. 36 ± 0. 42 8. 07 ± 1. 04 33. 47 ± 3. 42 1. 70 ± 0. 17
ECF 0. 05 2. 33 ± 0. 334) 8. 33 ± 1. 024) 41. 42 ± 1. 331，4) 1. 92 ± 0. 22
0. 10 2. 55 ± 0. 374) 7. 75 ± 1. 224) 57. 33 ± 7. 452，4) 1. 90 ± 0. 20
0. 15 2. 69 ± 0. 291，4) 7. 99 ± 1. 364) 67. 45 ± 7. 692，4) 1. 68 ± 0. 10
CTX 0. 03 1. 36 ± 0. 522) 3. 67 ± 0. 602) 27. 69 ± 7. 47 1. 58 ± 0. 16
表 4 ECF对 Lewis肺癌荷瘤小鼠胸腺指数、脾指数以及血清中 TNF-α生成的影响(珋x ± s，n = 8)
组别 给药剂量 / g·kg －1 胸腺指数 /mg·g － 1 脾指数 /mg·g － 1 TNF-α /ng·L －1 M-CSF /mg·L －1
模型 － 1. 83 ± 0. 12 15. 69 ± 4. 15 19. 74 ± 9. 03 1. 48 ± 0. 18
ECF 0. 05 1. 98 ± 0. 334) 13. 08 ± 4. 654) 32. 03 ± 2. 871，4) 1. 62 ± 0. 22
0. 10 2. 14 ± 0. 374) 11. 40 ± 4. 114) 42. 87 ± 2. 862，4) 1. 38 ± 0. 23
0. 15 2. 30 ± 0. 391，4) 11. 40 ± 4. 114) 29. 86 ± 9. 631，4) 1. 57 ± 0. 15
CTX 0. 03 0. 78 ± 0. 212) 7. 24 ± 1. 202) 22. 63 ± 2. 74 1. 32 ± 0. 22
TNF-α是一种由多核巨细胞产生的有广泛生物
学活性的细胞因子，可调节机体的免疫功能，促进 T
细胞及其他杀伤细胞对肿瘤细胞的杀伤，也可作用
于血管内皮细胞，损伤内皮细胞或导致血管功能紊
乱使血管损伤和血栓形成，造成肿瘤组织的局部血
流阻断而发生出血、缺氧坏死［7］。目前有研究表明
中药的抗肿瘤活性和增强机体免疫作用与其诱生
TNF-α有关［8］，本研究结果表明木蹄复方提取物可
显著升高荷瘤小鼠血清中 TNF-α 水平，显示较强的
抗肿瘤活性。
M-CSF是由多种细胞产生的一种具有谱系特
异性的细胞因子［9］，研究发现许多实体肿瘤细胞能
够分泌 M-CSF和(或)表达受体，使其表达异常，肿
瘤中发现 M-CSF 的水平升高，且血清中循环的 M-
CSF已成为这些恶性肿瘤的分子标记物，M-CSF 参
与了肿瘤的发生发展过程，对肿瘤的生长、侵袭和转
移以及新生血管的形成均有重要的作用［10-11］。本
研究发现 ECF 抑瘤率最高的剂量组和阳性对照组
M-CSF水平均下降，提示 ECF的抗肿瘤作用可能与
调节荷瘤小鼠 M-CSF的表达有关。
综上，ECF 可提高荷瘤小鼠的胸腺指数，调节
TNF-α和 M-CSF 的表达，增强和调节机体免疫功
能，从而达到抑制肿瘤细胞生长的作用，但其抑瘤作
用确切机制还有待进一步研究。
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