全 文 ：食用菌学报 2007.14(3):47 ～ 49
收稿日期:2007-04-23原稿;2007-08-28 修改稿
作者简介:邓云霞(1979-), 女 , 2004年毕业于华东师范大学资源植物化学专业 ,助理研究员 ,主要从事天然药物方
面的科研 、教学工作 , 发表主笔论文 2 篇。
＊本文通讯作者
文章编号:1005-9873(2007)03-0047-03
金耳胞外多糖体外抗氧化作用研究
邓云霞1 , 瞿伟菁2＊
(1东华大学化学与化工学院生物工程系 ,上海 201620;　2华东师范大学生命科学学院 , 上海 200062)
摘　要:对金耳(Tremella aurantialba)胞外多糖抗氧化作用进行研究 , 结果发现金耳胞外多糖能显著地抑制
H2O 2诱导的红细胞溶血 ,降低肝细胞的自氧化与诱导氧化产生的丙二醛(MDA),并能抑制氧化引起的肝线粒
体肿胀度。
关键词:金耳;胞外多糖;抗氧化
中图分类号:S567.34　　　　文献标识码:A
　　金耳 (Tremella aurantialba)为银耳目 、银
耳科 、银耳属的一种名贵珍稀的食药用菌 。多糖
作为药物的研究始于 20世纪 40 年代 。50 年代
末 ,由于发现了真菌多糖的抗癌作用 ,促使人们
更加系统深入地开展多糖研究 。瞿伟菁等报道
了金耳胞内多糖具有降血糖活性[ 1-3] ,而胞外多
糖的生理活性却未见报道。本实验研究了金耳
胞 外 多 糖 (Extracellular polysaccharide of
Tremel la aurantialba , TEP)的体外抗氧化作用 ,
为进一步开发利用金耳的胞外多糖提供科学依据。
1　材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株
金耳(Tremel la aurant ialba)菌株由中华全
国供销总社昆明食用菌研究所刘正南实验室
提供 。
1.1.2 试剂
三氯乙酸 、硫代巴比妥酸 、过氧化氢 、抗坏血
酸和硫酸亚铁等均为国产分析纯试剂 。
1.1.3 实验动物
雄性 SD大鼠购于上海西普尔 -必凯公司
(许可证号:沪动合证字 152号)。
1.2 方法
1.2.1 金耳胞外多糖制备
50 L 通气搅拌反应器发酵培养的金耳发酵
液经过滤 、离心除去菌丝体后 , 滤液中加 3%
NaOH 40 ℃水解 4 h ,用 2 M H2 SO 4调节 pH 至
10 ～ 11过夜。取水解液 ,用 0.1μm 膜微滤 ,滤液
用 MW5000膜截留 ,截留液用蒸馏水洗数次至
pH 中性 。浓缩后加入 4 倍酒精沉淀 ,并用无水
乙醇 、乙醚洗涤数次 ,真空干燥得褐色粉末状金
耳胞外多糖粗品。
1.2.2 金耳胞外多糖对 H2O 2诱导红细胞氧化溶
血的测定[ 5]
2只大鼠尾静脉采血 ,加入抗凝剂 , 3000×g
离心 5 min 得红细胞 ,冷生理盐水洗 3 次 ,制成
0.5%红细胞悬浮液。各组均取红细胞悬浮液
0.5 mL ,每组 5 个平行 ,加不同浓度(0.4 、0.6 、
0.8 、1.0 mg/mL)的金耳胞外多糖 0.1 mL ,最后
加入 300 mmo l/L H2O 20.1 mL 启动反应 ,37 ℃
作用 1 h , 3000×g 离心 5 min ,生理盐水稀释 6
倍 ,取上清液于 415 nm处测定吸光度(OD)。
1.2.3 抗脂质过氧化的测定[ 6]
迅速取上述 1.2.2.1取血后大鼠的肝 ,用冷
生理盐水洗净 ,冰浴下匀浆 ,制成 10%的肝细胞
悬浮液 , 100×g 离心 10 min ,去除离心后的沉淀
得匀浆液 。各组取肝匀浆液 1 mL , 每组 4 个平
行 , 加不同浓度的(0.03 、0.3 、0.5 、0.7 mg/mL)
金耳胞外多糖 0.1 mL , 37 ℃作用 1 h , 间或摇
晃。加入 1 mL 20%三氯乙酸 (TCA)结束反应 ,
再加入 1 mL 0.8%硫代巴比妥酸 (TBA),于沸
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2007.03.004
食　用　菌　学　报 第 14 卷
水浴中显色 15 min , 冷却后 3000 ×g 离心
10 min ,取上清液于 532 nm 处比色。
抑制率(%)=(MDAc-MDAs)/ MDAc×100%
MDAc和 MDA s分别为对照处理和样品
(TEP)处理的 OD值 。
1.2.3 3对Fe2+-VitC诱导大鼠肝脂质过氧化的测定
各组取肝匀浆液 1 mL , 每组 4 个平行 , 加
不同浓度的(0.03 、0.3 、0.5 、0.7 mg/mL)金耳胞
外多糖 0.1 mL ,再分别加入抗坏血酸和 FeSO 4
(终浓度分别为 1 mmol/L 和 0.1 mmo l/L)。
37 ℃作用 1 h , 间或摇晃。加入 1 mL 20%TCA
结束反应 ,再加入 1 mL 0.8%TBA ,于沸水浴中
显色 15 m in ,冷却后3000×g离心 10 min ,取上清
液于 532 nm 处比色 ,抑制率计算同上。
1.2.4 肝线粒体肿胀度的测定[ 7]
取 10%的肝组织匀浆液 10 mL ,4 ℃3000×g
离心 10 min ,弃沉淀 ,取上清液 10000×g 离心
15 min ,沉淀物为线粒体 。用生理盐水配制成吸
光值为 0.5 ～ 0.6 的肝线粒体悬浮液备用 , 由
FeSO 4-VitC产生 OH , 1.0 mL 悬浮液各加入不
同浓度(0.4 、0.8 、1.0 mg/mL)金耳胞外多糖
100μL ,1 mmol/ L FeSO4 50 μL 和 1 mmol/ LVitC
50 μL ,在 520 nm 处测定不同反应时间(5 min 、
10 min 、15 min 、20 min 、25 min 、30 min)的吸
光值 。
2　结果
2.1 金耳胞外多糖对 H2O2诱导红细胞氧化溶血
的作用
　　金耳胞外多糖浓度在 0.8 mg/mL 时能抑
制 H 2O 2诱导的大鼠红细胞氧化溶血 , 浓度
1.0 mg/mL时的抑制率达到 33.5%(表 1),表明
金耳胞外多糖浓度大于 0.8 mg/mL 时可抑制氧
化损伤 ,保护红细胞膜。
表 1　金耳胞外多糖对 H2O2诱导红细胞氧化溶血的作用
Table 1　Effect of TEP on RBC haemolysis induced by H2O2
组别
Group
浓度
TEP concentr ation(mg/m L)
OD 值
OD value
抑制率
Inhibition ratio(%)
对照 Control - 0.783±0.02 -
Ⅰ 0.4 0.752±0.02 -
Ⅱ 0.6 0.756±0.02 -
Ⅲ 0.8 0.681±0.021) 13.0
Ⅳ 1.0 0.521±0.051) 33.5
1)P<0.01(n=5),与对照组相比　1)P<0.01 (n=5)compared with controls
表 2　金耳胞外多糖对大鼠肝组织自发性脂质过氧化的影响
Table 2　Ef fect of TEP on MDA production in mice liver homogenates
组别
Group
浓度
TEP concentr ation(mg/m L)
OD 值
OD value
抑制率
Inhibition ratio(%)
对照 Control - 0.265±0.02 -
Ⅰ 0.03 0.310±0.05 0
Ⅱ 0.30 0.235±0.07 11.3
Ⅲ 0.50 0.156±0.051) 41.1
Ⅳ 0.70 0.130±0.011) 50.9
1)P<0.01(n=5),与对照组相比　1)P<0.01 (n=5)compared with controls
2.2 金耳胞外多糖对大鼠肝组织自发性脂质过
氧化的影响
　　金耳胞外多糖对大鼠肝组织自发性脂质过
氧化的结果如表2所示 ,浓度为0.5和 0.7 mg/mL
的金耳胞外多糖组的大鼠肝组织 MDA 生成量均
显著低于对照组(P <0.01);抑制率分别达到
41.1%和 50.9%。
2.3 金耳胞外多糖对 Fe2+-VitC诱导大鼠肝脂质
过氧化的影响
　　由表 3可知 ,金耳胞外多糖各组大鼠肝组织
中的 MDA 生成量均显著低于 Fe2+-VitC 对照组
(P <0.05 、P <0.01)。表明金耳胞外多糖可抑
制 Fe2+-VitC 诱导的脂质过氧化作用 ,但没有明
显的剂量-效应关系。
48
第 3 期 邓云霞 , 等:金耳胞外多糖体外抗氧化作用研究
表 3　金耳胞外多糖对 Fe2+-VitC诱导大鼠肝脂质过氧化的影响
Table 3　Effect of TEP on MDA production induced by VitC-Fe2+
组别
Group
浓度
TEP concentr ation(mg/m L)
OD 值
OD value
抑制率
Inhibition ratio(%)
对照 Control - 0.645±0.03 -
Ⅰ 0.03 0.529±0.021) 17.9
Ⅱ 0.30 0.491±0.212) 23.9
Ⅲ 0.50 0.461±0.022) 28.5
Ⅳ 0.70 0.509±0.102) 21.1
1)P<0.05 , 2)P<0.01 (n=5),与对照组相比 1)P<0.05 , 2)P<0.01(n=5)compared w ith contro ls
2.4 金耳胞外多糖对肝线粒体肿胀度的影响
　　线粒体氧化损伤后发生肿胀 ,表现为其悬浑
浊度下降 ,在 520 nm 处吸收值降低;抑制肿胀 ,
则使线粒体在 520 nm 处吸收值趋于稳定。由实
验结果(图 1)表明 , 大鼠肝线粒体经 VitC 和
Fe2+诱导后 ,模型组肿胀程度增加 ,随着反应时
间的延长肿胀越明显。加入不同浓度的金耳胞
外多糖后 ,在相同的时间里 ,线粒体的肿胀受到
明显地抑制。
图 1　金耳胞外多糖对 VitC-Fe2+系统诱导肝线粒体
形态改变的影响
Fig 1　Effect of TEP on liver mitochondria enlargement
induced by Fe2+-VitC
3　结论
　　自由基是带有不配对电子的原子 、原子团或
分子 。自由基可引发生物膜的不饱和脂肪酸花
生四烯酸过氧化 ,形成过氧化脂质(LPO),丙二
醛(MDA)即为 LPO 的降解产物[ 8] 。自由基在体
内引起各种生物学反应 ,如破坏生物膜等 ,导致
体内的脏器受损。超氧阴离子自由基(O-2)、羟自
由基(·OH)等含氧自由基称为氧自由基。其中·
OH 对细胞的危害最大 ,可直接损伤各种生物膜 ,
导致多种疾病的发生[ 9] 。
本研究发现金耳胞外多糖能显著地抑制
H 2O 2诱导的红细胞溶血及显著降低肝匀浆的自
氧化与诱导氧化产生的 MDA ,对于诱导氧化引
起的肝线粒体肿胀度的改变亦有显著的抑制作
用。以上结果提示 ,金耳胞外多糖具有较高的羟
基自由基清除能力 ,对红细胞和组织细胞以及亚
细胞膜性结构有保护作用 ,这可能是金耳胞外多
糖防衰老 、增强免疫等功能的药理基础 ,有待继
续深入研究。
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[本文编辑] 　唐庆九
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