全 文 ：　
第４１卷　第１０期 　
２０１１年１０月　
中 国 海 洋 大 学 学 报
ＰＥＲＩＯＤＩＣＡＬ　ＯＦ　ＯＣＥＡＮ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＯＦ　ＣＨＩＮＡ
４１（１０）：０８７～０９２
Ｏｃｔ．，２０１１
厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）
胞外多糖的化学组成和结构研究＊
徐　健，陶洪文，陈　荫，李红燕，齐晓辉，陈艳丽，毛文君＊＊
（中国海洋大学医药学院海洋药物教育部重点实验室，山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东 青岛２６６００３）
摘　要：　从厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）发酵液中提取得到胞外多糖，以 Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ阴离子
交换柱和Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ－７５凝胶色谱柱对其进行分离纯化，得到纯度高的多糖组分Ｆ１Ｓ。采用ＨＰＧＰＣ和ＨＰＬＣ对Ｆ１Ｓ的分
子量及单糖组成进行分析，结果表明Ｆ１Ｓ主要由 Ｍａｎ、Ｇｌｃ和Ｇａｌ组成，其摩尔比为１．０∶１．９∶２．１，分子量为３７．３ｋＤ。
Ｆ１Ｓ的ＧＣ－ＭＳ和１Ｄ，２Ｄ－ＮＭＲ分析表明，该多糖是以→６）－β－Ｇａｌｆ（１→为主链，以→２）－α－Ｇｌｃｐ（１→，α－Ｇｌｃｐ（１→和β－Ｍａｎｐ
（１→为支链的杂多糖，支链取代于→６）－β－Ｇａｌｆ（１→的Ｏ－２位。该厚藤共生真菌的胞外多糖为富含呋喃型半乳糖的结构新
颖的具有多分支结构的中性杂聚多糖。
关键词：　厚藤共生真菌；胞外多糖；分离纯化；化学组成；结构
中图法分类号：　Ｑ９３－３３１　　　　　文献标志码：　Ａ　　　　　文章编号：　１６７２－５１７４（２０１１）１０－０８７－０６
　　１９８０年代以来，有关多糖的研究及多糖类药物的
开发应用呈现出逐渐活跃趋势［１］。海洋微生物胞外多
糖由于其独特的化学结构和生物活性，在海洋药物研
究领域正受到人们的特别关注［２］。而且由于微生物培
养方便，生长周期短，不受季节限制，可进行大规模的
生产，将可能成为多糖的１个重要来源［３－４］。目前，海
洋微生物多糖的研究主要集中在海洋细菌多糖，有关
海洋真菌多糖的研究较少［５］。
红树林生态系统由于处于咸淡水交汇的特殊环
境，兼具海洋与陆地的性质，蕴藏着极为丰富独特的微
生物资源，也是海洋微生物的重要资源库。研究表明，
红树林真菌的次级代谢产物结构新颖，活性独特，具有
重要的研究价值，但是对红树林真菌的胞外多糖的研
究却罕见报道［６－７］。本文报道１种红树林伴生植物厚
藤（多年生 植物，生于热带、亚热带海滩的潮间带上）
共生真菌Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　Ｙ２４－２发酵液中胞外
多糖的分离纯化、化学组成及结构研究工作。
１　实验部分
１．１材料与仪器
葡聚糖分子量标准品（Ｍｗ：５．９，１１．８，２２．８，
４７．３，１１２，２１２，４０４ｋＤ）购于日本Ｓｈｏｄｅｘ公司；单糖标
准品（Ｇｌｃ，Ｍａｎ，Ｇａｌ，Ｆｕｃ，Ｒｈａ，ＧｌｃＮ，ＧａｌＮ，Ｘｙｌ，
Ａｒｂ）、标准牛血清白蛋白、１－苯基－３－甲基－５－吡唑啉酮
（ＰＭＰ，９９％）购于美国Ｓｉｇｍａ公司；Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ
Ｆｌｏｗ和 Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ　７５购于瑞典Ｐｈａｒｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ
公司。氯仿、吡啶、乙酸酐等试剂均为国产分析纯。厚
藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）发酵液由中
国海洋大学医药学院天然药化二室朱伟明教授提供。
快速蛋白纯化色谱仪（ＡＫＴＡ－ＦＰＬＣ，瑞典Ｐｈａｒ－
ｍａｃｉａ　Ｂｉｏｔｅｃｈ公司），气相色谱仪（Ａｇｉｌｅｎｔ　５８９０Ｓｅ－
ｒｉｅｓ１１，美国惠普公司），紫外可见分光光度计（ＵＶ－
２１０２ＰＣＳ，日本尤尼科公司），红外光谱仪（Ｎｉｃｏｌｅｔ
Ｎｅｘｕｓ　４７０，美国Ｔｈｅｒｍｏ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ公司），旋转蒸发仪
（Ｒ－４１，瑞士Ｂüｃｈｉ公司），冷冻干燥机（ＥＺ５５０Ｑ，美国
ＦＴＳ　Ｓｙｓｔｅｍｓ公司），色谱柱（Ｓｈｏｄｅｘ　Ｏｈｐａｋ　ＳＢ　８０４
ＨＱ，日本 Ｓｈｏｄｅｘ 公司），核磁共振波谱仪 （ＪＥＯＬ
ＪＮＭ－ＥＣＰ　６００ＭＨｚ，日本株式会社）。
１．２多糖的分离纯化
厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）发酵
液抽滤除去不溶性杂质，滤液减压浓缩至原体积的
１／１０，浓缩液加入４倍体积无水乙醇，４℃醇沉过夜。
沉淀加水溶解离心去除不溶物后，以截留分子量为
３　５００的透析袋透析，除去小分子杂质。袋内透析液减
压浓缩，冷冻干燥得到胞外多糖粗品。采用Ｓｅｖａｇｅ
法［８］对粗多糖进行脱蛋白处理，将Ｓｅｖａｇｅ试剂［氯仿：
正丁醇＝５∶１（Ｖ／Ｖ）］与样品溶液按照１∶２比例混合，
震荡离心，去除两液面交界处的变性蛋白质，重复上述
操作４次。以Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ阴离子交换色谱
柱（２．６ｃｍ×５０ｃｍ）对粗多糖进行纯化，用０～１ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ溶液进行线性洗脱，根据线性洗脱结果，确定ＮａＣｌ
＊
＊＊
基金项目：山东省科技攻关计划项目（２０１０ＧＨＹ１０５０９）；长江学者和创新团队发展计划项目（ＩＲＴ０９４４）资助
收稿日期：２０１０－１２－２７；修订日期：２０１１－０８－１６
作者简介：徐　健（１９８４－），男，硕士生。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｊｉａｎ－００４＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者：Ｔｅｌ：０５３２－８２０３１５６０；Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｊｕｎｍ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
中　国　海　洋　大　学　学　报 ２　０　１　１年
梯度洗脱浓度，并分别以水，０．１５和０．２５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ洗
脱，将糖含量最高０．１５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ组分Ｆ１透析浓缩，
冻干，采用Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ－７５凝胶色谱柱对其进一步纯化，
流动相为０．２ｍｏｌ／Ｌ　ＮＨ４ＨＣＯ３，流速为０．３０ｍＬ／ｍｉｎ，
部分收集器自动收集，硫酸－苯酚法检测多糖含量，收集
相应的组分，减压浓缩，冻干得到纯化多糖，命名为
Ｆ１Ｓ。
１．３化学成分分析
采用硫酸－苯酚法，以甘露糖为标准品测定总糖含
量［９］。采用Ｆｏｌｉｎ酚法，以牛血清蛋白为标准品，测定
蛋白含量［１０］。采用氯化钡明胶比浊法测定硫酸根含
量［１１］。采用咔唑－硫酸法，以葡萄糖醛酸为标准测定糖
醛酸含量［１２］。
１．４纯度及分子量分析
以不同分子量的葡聚糖为标准品（Ｍｗ：５．９，
１１．８，２２．８，４７．３，１１２，２１２，４０４ｋＤ），采用高效凝胶渗
透色谱法（ＨＰＧＰＣ）对多糖组分的纯度和分子量进行
检测［１３］，分析柱为Ｓｈｏｄｅｘ　Ｏｈｐａｋ　ＳＢ８０４ＨＱ，７．６ｍｍ
×３００ｍｍ，流动相为０．１ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＳＯ４，流速０．５
ｍＬ／ｍｉｎ，柱温为３５℃，进样量２０μＬ，示差检测器在线
检测。以标准多糖分子量的对数（ｌｏｇ　Ｍｗ）对保留时间
（ｔＲ）作图，绘制标准曲线，运用ＧＰＣ分析软件根据标准
回归方程计算样品的分子量。
１．５单糖组成分析
取１．０ｍｇ多糖样品，加入１．０ｍＬ三氟乙酸（２．０
ｍｏｌ／Ｌ），于１１０℃下降解６ｈ。反复加入甲醇减压蒸干
除去残余的三氟乙酸。采用ＰＭＰ柱前衍生高效液相
色谱法对单糖组成进行分析［１４］，以ＺＯＲＢＡＸ　Ｅｃｌｉｐｓｅ
ＸＤＢ－Ｃ１８柱进行分析，流动相为磷酸盐缓冲液 ∶
乙腈＝８３∶１７，柱温为２５℃，流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ，紫
外检测器检测。
１．６红外分析
采用ＫＢｒ压片法，Ｎｉｃｏｌｅｔ　Ｎｅｘｕｓ　４７０型红外光谱进
行测定。红外光谱仪测定参数如下：背景扫描次数：３２
次；扫描范围为４００～４　０００ｃｍ－１；分辨率：４．０ｃｍ－１；检
测器：ＤＴＧＳ。
１．７甲基化分析
采用改良的 Ｈａｋｏｍｏｒｉ法［１５］对得到的多糖样品进
行甲基化分析。称取１．０ｍｇ减压干燥后的多糖样品，
加入１．０ｍＬ二甲基亚砜，磁力搅拌至样品完全溶解，
快速加入１００．０ｍｇ干燥的ＮａＨ，充入Ｎ２密封后于室
温下反应１ｈ，缓慢加入碘甲烷１．０ｍＬ，继续反应１ｈ，
最后加入１．０ｍＬ水终止反应。反应液以氯仿萃取多
次，合并萃取液，并以水洗涤氯仿层３次。将甲基化后
样品完全酸水解，硼氢化钠还原，醋酸酐乙酰化得到部
分甲基化的糖醇乙酸酯衍生物进行气质色谱分析。
１．８核磁分析
采用６００ＭＨｚ核磁共振波谱仪在２３℃下测定
１　Ｈ－ＮＭＲ和１３Ｃ－ＮＭＲ［１６］。４０ｍｇ多糖以０．５ｍＬ　Ｄ２Ｏ
溶解，反复蒸干交换 ２ 次。最后以 ０．５ ｍＬ　Ｄ２Ｏ
（９９．９８％）将样品转移至核磁管，丙酮作为内标（１　Ｈ化
学位移为２．２２５ｐｐｍ，１３　Ｃ为３１．０７ｐｐｍ）。并进行１　Ｈ－
１　Ｈ　ＣＯＳＹ、１　Ｈ－１３Ｃ　ＨＭＱＣ和１　Ｈ－１３ＣＨＭＢＣ实验。
２　结果与讨论
２．１多糖的分离纯化
厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）发酵
液经浓缩醇沉，透析等处理后得到多糖粗品，其得率约
为０．２ｇ／Ｌ。粗多糖经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ阴离子
交换柱层析，得到３个组分，其中０．１５ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ洗
脱组分Ｆ１总糖含量最高（见图１）。Ｆ１经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ
Ｓ７５凝胶色谱柱（见图２）进一步纯化得到１个主要组
分，命名为Ｆ１Ｓ。
图１　厚藤共生真菌胞外多糖离子交换柱梯度洗脱曲线
Ｆｉｇ．１　Ｓｅｇｍｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｇｒａｐｈ　ｏｆ　ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｂｙ
Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ
图２　多糖Ｆ１的Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ７５凝胶纯化曲线
Ｆｉｇ．２　Ｅｌｕｔｉｏｎ　ｇｒａｐｈ　ｏｆ　Ｆ１ｂｙ　Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ７５
２．２多糖纯度及化学成分分析
Ｆ１Ｓ在 ＨＰＧＰＣ色谱图上显示为单一对称的色谱
峰（见图３），说明Ｆ１Ｓ为纯度高的均一多糖，其分子量
约为３７．３ｋＤ。采用化学方法测定Ｆ１Ｓ组分的化学组
成，结果表明Ｆ１Ｓ的总糖含量为８８．９％，蛋白含量为
５．８％；未检出硫酸根及糖醛酸。
８８
１０期 徐　健，等：厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）胞外多糖的化学组成和结构研究
图３　Ｆ１Ｓ高效凝胶渗透色谱图
Ｆｉｇ．３　ＨＰＧＰＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
２．３单糖组成分析
经过完全酸水解后，通过ＰＭＰ柱前衍生 ＨＰＬＣ
法测定Ｆ１Ｓ的单糖组成。结果表明Ｆ１Ｓ主要由甘露
糖、葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比为１．０∶１．９∶２．１
（见图４），Ｆ１Ｓ为不含糖醛酸和氨基糖的中性杂多糖。
（Ａ：单糖标准品 Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｂ：Ｆ１Ｓ单糖 Ｆ１Ｓ
ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）
图４　Ｆ１Ｓ单糖组成高效液相色谱图
Ｆｉｇ．４　Ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｆ１Ｓｉｎ　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
２．４红外分析
多糖Ｆ１Ｓ的红外光谱见图５，３　４０８ｃｍ－１为多糖化
合物中羟基的伸缩振动吸收峰，２　９２８ｃｍ－１处为糖环上
的Ｃ－Ｈ伸缩振动吸收峰，１　６４８ｃｍ－１处为羟基的弯曲
振动吸收峰，１　４２５ｃｍ－１为碳氢弯曲振动吸收峰，１　０７２
ｃｍ－１为羟基变角振动吸收峰，８９０ｃｍ－１为β－型糖苷键
特征吸收峰。
图５　Ｆ１Ｓ的红外光谱图
Ｆｉｇ．５　ＩＲ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
２．５甲基化分析
为研究多糖中各种单糖残基之间的连接方式，采用
改良的Ｈａｋｏｍｏｒｉ法对多糖Ｆ１Ｓ进行甲基化分析。为了
确定多糖Ｆ１Ｓ甲基化程度，对甲基化之后的样品进行红
外光谱测定（见图５）。Ｆ１Ｓ甲基化后３　４０８ｃｍ－１处的
－ＯＨ伸缩振动吸收峰消失，而２　９２８ｃｍ－１处的Ｃ－Ｈ伸缩
振动吸收峰增强，１　０７２ｃｍ－１的羟基变角振动吸收峰消
失，由此可见甲基化后，羟基被甲氧基取代，甲基化比
较完全。甲基化后的样品经完全酸水解、还原、乙酰化
得到部分甲基化的糖醇乙酸酯衍生物，采用气质联用
色谱仪对其进行分析，结果见表１。分析表明，多糖
Ｆ１Ｓ以→２，６）Ｇａｌｆ（１→为主链，同时还含有→２）－Ｇｌｃｐ
（１→，Ｇｌｃｐ（１→和 Ｍａｎｐ（１→连接方式。
表１　厚藤内生真菌胞外多糖组分Ｆ１Ｓ甲基化结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｆ１ＳｆｒｏｍＦｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２
甲基化产物
Ｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　ａｌｄｉｔｏｌ　ａｃｅａｔｅ
连接方式
Ｌｉｎｋａｇｅ　ｐａｔｔｅｒｎ
摩尔比
Ｍｏｌａｒ　ｒａｔｉｏ
质谱片断
Ｍａｊｏｒ　ｍａｓｓ　ｆｒａｇｍｅｎｔｓ
２，３，４，６－Ｍｅ４－Ｍａｎ　 Ｍａｎｐ（１－ １．０　 １０１　１１７　１２９　１４５　１６１　２０５
２，３，４，６－Ｍｅ４－Ｇｌｃ　 Ｇｌｃｐ（１－ １．０　 １０１　１１７　１２９　１４５　１６１　２０５
３，４，６－Ｍｅ３－Ｇｌｃ →２）Ｇｌｃｐ（１→ １．１　 ８７　１０１　１１７　１２９　１６１　１８９
３，５－Ｍｅ２－Ｇａｌ →２，６）Ｇａｌｆ（１→ ２．２　 ８７　１０１　１１７　１２９　１７３　１８９　２３３
２．６核磁波谱分析
为进一步确定多糖的结构，对Ｆ１Ｓ进行了核磁共
振波谱分析。如图６所示，在１３　Ｃ－ＮＭＲ低场区（９０～
１１０）ｐｐｍ之间主要存在３个端基碳信号。通过与文献
［１７－１８］对比分析，确定１０７．４ｐｐｍ为→２，６）－β－Ｇａｌｆ－
（１→的端基Ｃ信号，９９．１ｐｐｍ为→２）－α－Ｇｌｃｐ－（１→与α－
Ｇｌｃｐ－（１→的Ｃ－１信号，１０１．１ｐｐｍ较弱的碳信号，为β－
Ｍａｎｐ－（１→的Ｃ－１信号。
９８
中　国　海　洋　大　学　学　报 ２　０　１　１年
图６　Ｆ１Ｓ的１３　Ｃ－ＮＭＲ图谱
Ｆｉｇ．６　１３　Ｃ－ＮＭＲ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
采用 二 维 核 磁 波 谱１　Ｈ－１　Ｈ　ＣＯＳＹ 和１　Ｈ－１３　Ｃ
ＨＭＱＣ对多糖Ｆ１Ｓ的Ｃ和Ｈ信号进行归属（见图７），
这些分析结果能将糖残基的大部分１　Ｈ和１３Ｃ信号进行
归属，结果见表２。
图７　Ｆ１Ｓ的１　Ｈ－１３　Ｃ　ＨＭＱＣ图谱
Ｆｉｇ．７　１　Ｈ－１３　Ｃ　ＨＭＱＣ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
表２　Ｆ１Ｓ的核磁共振信号归属
Ｔａｂｌｅ　２　ＮＭＲ　ｓｉｇｎａｌｓ　ａｓｓｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
连接方式
Ｌｉｎｋａｇｅ　ｐａｔｔｅｒｎ
化学位移１　Ｈ／１３　Ｃ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｈｉｆｔ
１　 ２　 ３　 ４　 ５　 ６（ａ） ６（ｂ）
Ａ　 Ｈ　 ５．１８　 ４．２１　 ４．２７　 ４．０３　 ４．０２　 ３．６８　 ３．９２
Ｃ　 １０７．４　 ８８．１　 ７７．０　 ８３．９　 ７１．１　 ７０．８
Ｂ　 Ｈ　 ５．１０　 ３．５１　 ３．７４　 ３．４６　 ３．７５　 ３．９２　 ３．８１
Ｃ　 ９９．１　 ７２．０　 ７４．４　 ７０．８　 ７２．９　 ６１．１
Ｃ　 Ｈ　 ５．０９　 ３．５９　 ３．７５　 ３．５４　 ３．９２　 ３．９６　 ３．８９
Ｃ　 ９９．１　 ７２．２　 ７３．９　 ７０．８　 ７２．４　 ６１．２
Ｄ　 Ｈ　 ４．９１　 ４．１１ － － － － －
Ｃ　 １０１．１　 ７１．８ － － － －
注：Ａ：→２，６）－β－Ｇａｌｆ－（１→，Ｂ：α－Ｇｌｃｐ－（１→，Ｃ：→２）－α－Ｇｌｃｐ－（１→，Ｄ：β－Ｍａｎｐ－（１→。－表示未能有效归属，６（ａ）与６（ｂ）分别代表 Ｈ（６ａ）和 Ｈ（６ｂ）。
　　通过１　Ｈ－１３Ｃ　ＨＭＢＣ谱（见图８）对Ｆ１Ｓ各单糖残
基之间的连接方式进一步归属。从图８中可以看出，
化学位移在５．１８ｐｐｍ处β－Ｇａｌｆ 的 Ｈ－１与７０．８ｐｐｍ处
Ｃ－６相关，表明该多糖β－Ｇａｌｆ 之间的连接方式是１，６
连接。β－Ｇａｌｆ 的 Ｈ－１与化学位移８３．９ｐｐｍ 的β－Ｇａｌｆ
的Ｃ－４相关，这是由于β－Ｇａｌｆ 为１个五元环的呋喃型
结构，在１　Ｈ－１３　Ｃ　ＨＭＢＣ上则可表现为同环的Ｃ，Ｈ 远
程相关。化学位移在５．１０ｐｐｍ的α－Ｇｌｃｐ 的 Ｈ－１与化
学位移为７３．９ｐｐｍ的Ｃ－５相关，为同环内的 Ｈ－１与Ｃ－
５的远程相关。α－Ｇｌｃｐ－（１→和→２）－α－Ｇｌｃｐ－（１→的 Ｈ－１
与８８．１ｐｐｍ处的β－Ｇａｌｆ 的Ｃ－２相关，表明这两者均连
接在β－Ｇａｌｆ 的Ｃ－２位上。化学位移为４．９１ｐｐｍ的β－
Ｍａｎｐ 的 Ｈ－１与化学位移为７２．０ｐｐｍ的α－Ｇｌｃｐ 的Ｃ－２
相关，表明β－Ｍａｎｐ 连接于α－Ｇｌｃｐ 的Ｃ－２位。由于→
２）－α－Ｇｌｃｐ－（１→与α－Ｇｌｃｐ－（１→所处的化学环境相似，造
成二者的 Ｈ－１和Ｃ－１信号相互重叠。
图８　Ｆ１Ｓ的１　Ｈ－１３　Ｃ　ＨＭＢＣ图谱
Ｆｉｇ．８　１　Ｈ－１３　Ｃ　ＨＭＢＣ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
综合甲基化分析和１Ｄ，２ＤＮＭＲ的结果对Ｆ１Ｓ的
结构进行推测，其结构见图９。
０９
１０期 徐　健，等：厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）胞外多糖的化学组成和结构研究
图９　Ｆ１Ｓ的结构式
Ｆｉｇ．９　Ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｓｅｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｆ１Ｓ
３　结语
本文对厚藤共生真菌所产胞外多糖进行了分离纯
化，对多糖含量较高的Ｆ１Ｓ组分化学组成和结构进行
了研究。结果表明，Ｆ１Ｓ主要由半乳糖、葡萄糖和甘露
糖组成，其摩尔比为２．１∶１．９∶１．０，分子量约为３７．３
ｋＤ，该多糖为富含→２，６）－β－Ｇａｌｆ－（１→独特连接方式的
具有多分支结构的中性杂聚多糖，主链为→６）－β－Ｇａｌｆ－
（１→，而→２）－α－Ｇｌｃｐ－（１→，α－Ｇｌｃｐ－（１→和β－Ｍａｎｐ－（１→
等侧链主要连接于→６）－β－Ｇａｌｆ－（１→的Ｃ－２上，类似结
构的多糖鲜见报道，该研究为红树林微生物胞外多糖
的开发利用提供了重要的基础资料。微生物是获得结
构新颖多糖的一个重要资源，具有潜在的研究价值。
致谢：衷心感谢中国海洋大学医药学院天然药物
化学二室朱伟明教授提供厚藤共生真菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ
ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ Ｙ２４－２）发酵液。
参考文献：
［１］　Ｈｕｒｔｌｅｙ　Ｓ，Ｓｅｒｖｉｃｅ　Ｒ，Ｓｚｕｒｏｍｉ　Ｐ．Ｃｉｎｄｅｒｅｌｈ’ｓ　ｃｏａｃｈ　ｉｓ　ｒｅａｄｙ［Ｊ］．
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００１，２９１（５５１２）：２３３７．
［２］　苏文金，黄益丽，黄耀坚，等．产免疫调节活性多糖海洋放线菌的
筛选 ［Ｊ］．海洋学报，２００１，２３（６）：１１４－１１９．
［３］　Ｌｉｎ　Ｙ　Ｃ，Ｗｕ　Ｘ　Ｙ，Ｆｅｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　Ｎ－ｃｉｎｎａｍｏｙｌｃｙｃｌａｐｏｐ－
ｔｉｄｅ　ａｎ　ａｎｅｎｉｃ　ｅｔｈｅｒ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｘｙｌａｒｉａ（ｓｔｒａｉｎ　２５０８）ｆｒｏｍ
ｔｈｅ　Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｅａ［Ｊ］．Ｔｅｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００１，３（１５）：４４９－
４５１．
［４］　Ｌｉｎ　Ｙ　Ｃ，Ｗｕ　Ｘ　Ｙ，Ｆｅｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｉｖｅ　ｕｎｉｑｕｅ　ｃｏｒｎｐｏｕｎｄｓ，ｘｙ－
ｌｏｋｅｔａｌｓ　ｆｒｏｍ　ｍａｎｇｒｏｖｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｘｙｌａｒｉａｓｐ（ｓｔｒａｉｎ　２５０８）ｆｒｏｍ　ｔｈｅ
Ｓｏｕｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｅａ　ｃｌｇｔ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，６６
（１９）：６２５２．
［５］　陈荫，郭守东，徐健，等．海绵内生真菌胞外多糖理化性质及自由
基清除活性研究 ［Ｊ］．中国海洋大学学报：自然科学版，２０１０，４０
（５）：１－４．
［６］　Ｌｉｎ　Ｐ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ　Ｂ，Ｄｅｎｇ　Ａ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ　ａｎｄ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｓｏｉｌ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ｉｎ　ｍａｎｇｒｏｖｅ　ｆｏｒｅｓｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｊｉｕ
Ｌｏｎｇ　Ｅｓｔｕａｒｙ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｏｃｅａｎｏｌｏ　Ｇｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，２００５，２７（３）：１３３－
１４１．
［７］　林鹏．中国红树林生态系 ［Ｍ］．北京：北京科学出版社，１９９７：１－
６７．
［８］　Ｍａｔｔｈａｅｉ　Ｊ　Ｈ，Ｊｏｎｅｓ　Ｏ　Ｗ，Ｍａｒｔｉｎ　Ｒ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＮＡ　ｃｏｄｉｎｇ　ｕｎｉｔｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ａ－
ｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９６２，４８（４）：６６６－６６７．
［９］　Ｄｕｂｉｏｓ　Ｍ，Ｇｉｌｅｓ　Ｋ　Ａ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ　Ｊ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ
ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｇａｒｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９５６，２８（３）：３５０－３５４．
［１０］　Ｂｒａｆｏｒｄ　Ｍ　Ｍ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｍｉｃｒｏｇｒａｍ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｕｔｉｌｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ｄｙｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７６，７２：２４８－２５４．
［１１］　Ｄｏｄｇｓｏｎ　Ｋ　Ｓ，Ｐｒｉｃｅ　Ｒ　Ｇ．Ａ　ｎｏｔｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｓｔｅｒ
ｓｕｌｆａｔｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９６２，８４（１）：１０６－１１０．
［１２］　Ｂｉｔｔｅｒ　Ｔ，Ｍｕｉｒ，Ｈ　Ｍ．Ａ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｕｒｏｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｃａｒｂａｚｏｌｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６２（４）：３３０－３３４．
［１３］　Ｍａｏ　Ｗ　Ｊ，Ｌｉ　Ｈ　Ｙ，Ｆａｎｇ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ　ａｎｄ　ａｎ－
ｔｉｃｏａｇｕｌａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ
Ｍｏｎｏｓｔｒｏｍａ　ｌａｔｉｓｓｉｍｕｍ ［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，２００８，７１
（３）：７０－７３．
［１４］　Ｓｕｎ　Ｈ　Ｈ，Ｍａｏ　Ｗ　Ｊ，Ｃｈｅｎ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃ－
ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ
ｍａｒｉｎｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｓｐ．Ｆ２３－２［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｐｏｌｙ－
ｍｅｒｓ，２００９，７８（１）：１１７－１２４．
［１５］　Ｈａｋｏｍｏｒｉ　Ｓ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ，ａｎｄ　ｐｏｌｙｓａｃ－
ｃｈａｒｉｄｅ　ｃａｔａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｉｎｙｌ　ｃａｒｂｉｎｏｎ　ｉｎ　ｄｉｍｅｔｈｙｌ　ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ
［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６４，５５（２）：２０５－２０９．
［１６］　Ｇｕｏ　Ｓ　Ｄ，Ｍａｏ　Ｗ　Ｊ，Ｈａｎ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ
ｂｙ　ｍａｒｉｎｅ　ｂａｃｔｅｒｉｕｍＥｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ　ｔａｒｄａ［Ｊ］．Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１０１（１２）：４７２９－４７３２．
［１７］　Ａｌｉｃｉａ　Ｐ，Ｊｕａｎ　Ａ　Ｌ，Ｍａｒ　ａ　Ｉ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｄｅ－
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｕｎｉｑｕｅ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｍａｎｎｏｆｕｒａｎｏｓｅ
ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｗａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ａｃｒｏｓｐｅｒｍｕｍ　ｃｏｍｐｒｅｓｓｕｍ ［Ｊ］．
Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ，２００７，２４（８）：４２１－４２８．
［１８］　Ｏｕｓｓａｍａ　Ａ，Ａｌｉｃｉａ　Ｐ，Ｍａｒｉ　Ｉ　Ｇ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｆｕｎｇａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｗａｌ　ｏｆ　Ｐｌｅｃｔｏｓｐｈａｅ－
ｒｅｌｌａ　ｃｕｃｕｍｅｒｉｎａ　ａｎｄ　Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ．［Ｊ］．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ　Ｒｅ－
ｓｅａｒｃｈ，２００６，３４１（２）：２４６－２５２．
１９
中　国　海　洋　大　学　学　报 ２　０　１　１年
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ａｎ　Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
Ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｆｕｎｇｕｓ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍＹ２４－２
ＸＵ　Ｊｉａｎ，ＴＡＯ　Ｈｏｎｇ－Ｗｅｎ，ＣＨＥＮ　Ｙｉｎ，ＬＩ　Ｈｏｎｇ－Ｙａｎ，ＱＩ　Ｘｉａｏ－Ｈｕｉ，ＣＨＥＮ　Ｙａｎ－Ｌｉ，ＭＡＯ　Ｗｅｎ－Ｊｕｎ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｙ；Ｔｈｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｄｒｕｇｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ；Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ　＆Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　Ｆ１Ｓｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｂｒｏｔｈ　ｏｆ　ｍａｒｉｎｅ　ｆｕｎｇｕｓ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
Ｙ２４－２，ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ　ａｎｄ　Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　Ｓ－７５．Ｔｈｅ　ｐｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ
ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　Ｆ１Ｓｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｔｏｇｅｔｈｅｒ　ｗｉｔｈ　ＨＰＬＣ，ＨＰＧＰＣ，ＩＲ，
ＧＣ－ＭＳ　ａｎｄ　１Ｄ，２Ｄ－ＮＭＲ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｆ１Ｓｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ　Ｍａｎ，Ｇｌｃ　ａｎｄ　Ｇａｌ，ａｎｄ
ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　３７．３ｋＤ．Ｔｈｅ　ｂａｃｋｂｏｎｅ　ｏｆ　Ｆ１Ｓｗａｓ　ｃｏｍｐｏｓｅｄ　ｏｆ→６）－β－Ｇａｌｆ－（１
→，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｉｄｅ　ｃｈａｉｎｓ→２）－α－Ｇｌｃｐ（１→，α－Ｇｌｃｐ（１→ａｎｄβ－Ｍａｎｐ（１→ ｗｅｒｅ　ｌｉｎｋｅｄ　ｔｏ　Ｏ－２ｏｆ　ｔｈｅ→６）－β－
Ｇａｌｆ－（１→．Ｔｈｅ　ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　Ｆ１Ｓｗａｓ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｂｒａｎｃｈｅｄ　ｎｅｕｔｒａｌ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗｉｔｈ　ｇａｌａｃｔｏｆｕｒａｎｏｓｅ
ｒｅｓｉｄｕｅｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：　ｍａｒｉｎｅ　ｆｕｎｇｕｓ；Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　Ｙ２４－２；ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
责任编辑　徐　环
更改说明
中国海洋大学学报２０１１年增刊中“波致土体液化下水体含沙量垂向分布试研究”一文（见２０１１，４１（增刊）：
３８９），图５由原来的
图５　水槽试验数据对比
Ｆｉｇ．５　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｌｕｍｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
改为：
图５　水槽试验数据对比
Ｆｉｇ．５　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄａｔａ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｌｕｍｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
２９