全 文 :太阳菇与姬松茸栽培比较及酯酶同工酶分析
林衍铨 1 , 李开本 1 , 林兴生 1 , 黄建成2 , 陈体强 1 , 余应瑞 1 , 胡润芳2
( 1. 福建省农业科学院植物保护研究所 , 福建 福州 350013;
2. 福建省农业科学院耕作轮作研究所 , 福建 福州 350013; )
收稿日期: 2001- 04- 14
作者简介: 林衍铨 ( 1963- ) , 男 , 助理研究员 , 主要从事食 (药 ) 用菌开发研究。
摘 要: 对太阳菇及姬松茸菌株进行常规的栽培试验 , 发现太阳菇菌丝生长及子实体发育与姬松茸存在一定的差
异 , 太阳菇在形态上与姬松茸也存在差别 ; 太阳菇氨基酸总量及必需氨基酸含量均比姬松茸高。 经酯酶同工酶
( RAGE) 分析 , 太阳菇的 RAGE与姬松茸存在差异 , 有一条特征酶带 ( Rf 0. 92)。
关键词: 太阳菇 ; 姬松茸 ; 酯酶同工酶
中图分类号: S 646. 11 文献标识码: A
Cultivation comparison and esterase isozyme analysis of Agaricus sylvat icus
and Agaricus blazil
L IN Yan-quan1 , L I Kai-ben1 , L IN Xing-sheng1 , HU ANG Jian-cheng2 , CHEN Ti-qiang1 ,
YU Ying-rui1 , HU Run-fang2
( 1. Institute of Plant Protection, Fujian Academy of Agricultural Sciences , Fuzhou, Fujian 350013, China;
2. I nstitute of Cultivation and Rotation, Fujian Academy of A gricultural Sciences ,Fuzhou, Fujian 350013,China)
Abstract: Th e r esults o f cultiv a tion experiment showed tha t some differ ences ex isted in mycelia l g row th and
fruitbody development. The mo rpholog ical v a ria tion w as also found betw een Agaricus sylvaticus and Agaricus
blazei by their cultiv ation. To tal amino acids content and essential amino acids content of Agaricus sy lvaticus w ere
high er than those o f A garicus blazei . By RAGE analysis, esterase iso zyme zymog ram o f Agaricus sy lvaticus
differed fr om Agaricus blazei with an ex tr a zymog ram ( Rf 0. 92) .
Key words: Agaricus sylvaticus; A garicus blazei; RAGE
90年代初以来 ,日本对姬松茸的药效进行了详
细的研究 , 结果表明 , 姬松茸所含的多糖、 类固醇
及食物纤维具有抗肿瘤、 抑制肿瘤和提高人体免疫
功能之功效 , 临床试验功效比其它药用菌更优
异 [1, 2 ]。由于姬松茸奇特的药效 , 促使其栽培发展迅
速 ,且创造了良好的经济效益。但从 1997年底开始 ,
姬松茸的价格大幅度下调 , 严重影响菇农的生产积
极性和姬松茸的创汇能力。 研究开发适应新的市场
需求的蘑菇属创汇品种是食用菌生产持续发展的迫
切要求。太阳菇 (林地蘑菇 ) Agaricus sylvat icus ,与
姬松茸 (巴西蘑菇 ) Agaricus blazei Murrill同隶属
于伞菌目、蘑菇科、蘑菇属 ,原产巴西。我们于 1997
年引进该菌株 , 希望通过与姬松茸的栽培与生理比
较研究 , 为太阳菇的进一步开发奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 供试菌株
太阳菇菌株 As; 姬松茸菌株 Y82、 N2、 A1129、
Ab、 A0611、 Ax。
1. 2 碳源试验
用 ( N H4 ) 2 SO4 2 g、 KH2 PO4 1 g、 MgSO4 0. 5
g、 琼脂 20 g、 水 1 000 m l配成基础培养基 , 分别
加入 2%的葡萄糖、蔗糖、 麦芽糖、 淀粉、甲基纤维
素为碳源。
1. 3 氮源试验
用葡萄糖 20 g 、 KH2 PO4 1 g、 MgSO4 0. 5 g、
琼脂 20 g 、 水 1 000 m l为基础培养基。 分别加入
0. 2%的 KNO3、 ( N H4 ) 2 SO4、 尿素、 蛋白胨、 酵母
福建农业学报 16( 2): 32~ 35, 2001
Fujian Journal of A gricultural Sciences 文章编号: 1008- 0384 ( 2001) 02- 0032- 04
膏、 豆饼粉、 麸皮等氮源。
1. 4 菌丝体培养特征观察
分别在 PDA、 PSA、 胡萝卜素、 玉米粉培养基
和粪草培养料上接入太阳菇斜面母种 , 25℃培养 ,观
察太阳菇菌丝体在不同培养基、 培养料上的生长特
征。
1. 5 温度试验
设 15℃、 20℃、 25℃、 30℃、 35℃ 5个梯级。以
姬松茸 Y82为对照。
1. 6 床栽试验
以姬松茸 Y82为对照 , 春秋两季床栽 [3 ]。统一
栽培管理水平。
1. 7 氨基酸成分测定
用日立 835- 50型氨基酸分析仪分别测定太阳
菇 As和姬松茸 Y82的总氨基酸含量及必需氨基酸
含量 [4 ]。
1. 8 RAGE电泳
参照文献 [5 ]的方法 , 将太阳菇菌株 As及姬
松茸菌株 Y82、 N 2、 A1129、 Ab、 A0611、 Ax的斜
面菌种 ,接种于液体培养基中 (液体培养基配方为:
马铃薯 200 g, 葡萄糖 20 g , 水 1 000 m l) , 于 25℃
恒温摇床中培养 ( 150 r· min- 1 ) , 取液体培养基培
养 10 d的菌丝 , 过滤 , 蒸馏水冲洗 , 滤纸吸干 , 加
2倍量 ( W /V ) pH 7. 5的磷酸缓冲液 , 研磨至糊状 ,
12 000 r· min- 1离心 15 min, 取上清液于 4℃贮存
备用。采用垂直平板聚丙烯凝胶电泳 ( O SPAGE)。
分离胶浓度 7. 0% 、 pH 8. 9; 浓缩胶浓度 2. 5%、 pH
6. 7。电极缓冲液用 Tris-Gly缓冲液 , pH 6. 7,点样
量 100μl。在 4℃条件下电泳 ,稳流 ,浓缩胶 15 mA、
分离胶 30 m A,约 3 h, 以溴酚蓝为前沿指示剂。酯
酶染色液: 丙酮 5 ml, 1-萘酯乙酸 0. 05 g , 2- 萘
酯乙酸 0. 05 g, 固兰 RR盐 0. 1 g , 0. 1 mol· L- 1、
pH 6. 5的磷酸缓冲液 300 m l。 37℃染色 20 min,染
色后用蒸馏水进行漂洗 , 随后进行描图、 拍照。
2 结果与分析
2. 1 太阳菇的菌丝生长特性及子实体形态特征
2. 1. 1 不同碳、氮源对太阳菇菌丝长速的影响 由
表 1可见 , 5种碳源太阳菇菌丝均能利用 ,以淀粉利
用最好 , 其次是麦芽糖、 蔗糖、 甲基纤维素 , 长速
最慢的是葡萄糖。太阳菇本身是否含有淀粉酶 , 尚
待进一步研究。 氮源中除尿素不能被利用外 , 其余
6种氮源均能被太阳菇利用 , 生长最好的是
( N H4 ) 2 SO4 , 其次是豆饼粉 , 最慢的是麸皮和
KNO3。
表 1 不同碳、氮源对太阳菇菌丝长速的影响
Table 1 Ef fect of dif f erent carbon and nitrogen resources on mycelial growth of Agaricus sylvat icus
不同碳源菌丝日均长速 ( mm· d- 1 ) 不同氮源菌丝日均长速 ( mm· d- 1 )
葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 淀粉 甲基纤维素 硫酸铵 硝酸钾 尿素 蛋白胨 酵母膏 豆饼粉 麸皮
2. 90 3. 08 3. 11 3. 71 2. 97 3. 26 1. 94 0. 00 2. 46 2. 37 2. 89 1. 94
2. 1. 2 菌丝体培养特征 常温 ( 25℃ )下 , 太阳菇
菌丝体在 PDA、 PSA、 胡萝卜素、 玉米粉以及粪草
等培养料上均能正常生长。 在斜面培养基上先长基
内菌丝 , 后长气生菌丝 , 前者生长缓慢 , 细密灰白
色 ; 后者生长速度快 , 旺盛 , 白色 ,爬壁能力强 , 老
化呈黄褐色。在粪草培养料上菌丝生长浓密洁白 ,粗
壮有力 , 长速快 , 但菌丝末端不均匀 , 不整齐 , 显
出枝状。在斜面和原种的培养基上培养 , 未见到菌
丝纽结和直接结实现象。
2. 1. 3 子实体形态特征 子实体单生少丛生 ,个大
肥胖。 菌盖初为半球形 , 成熟时菌盖中央上凸 , 边
缘颜色逐渐变浅 , 边缘呈灰白色。菌肉白色 , 质脆 ,
菌盖直径 4~ 8 cm、中央部肉厚 0. 9~ 1. 2 cm ,菌柄
中生 ,纺缍形 ,中实质密 ,最宽处直径 3. 8~ 5. 8 cm,
柄长 4~ 7 cm,鲜菇朵重一般为 35~ 70 g ,最重的可
达 100 g以上。
2. 2 不同温度对太阳菇与姬松茸菌丝体生长发育
的影响
试验结果 (表 2)表明 , 太阳菇菌丝在 30℃时生
长最快 , 且长势强 , 粗壮 , 爬壁性好。 而姬松茸菌
丝生长最佳温度则为 25℃。
2. 3 太阳菇与姬松茸栽培特性比较
试验结果 (表 3)表明 ,在与姬松茸相同的栽培
管理条件下 , 太阳菇能正常出菇 , 可见 , 太阳菇与
33第 2期 林衍铨等: 太阳菇与姬松茸栽培比较及酯酶同工酶分析
姬松茸一样属草腐菌 , 能在牛粪、 稻草及各种作物
秸秆培养料上生长。太阳菇栽培需要较高的温度和
湿润环境及良好的通气条件 , 子实体原基发生及生
长发育所需温度相对较高 ( 17~ 27℃ ) ,而空气相对
湿度较低 ( 80%~ 85% ) , 否则易引起烂菇、 死菇。
2. 4 氨基酸含量
太阳菇 As总氨基酸含量及必需氨基酸含量分
别比姬松茸 Y82高 9. 18%和 11. 25% , 必需氨基酸
占氨基酸总量之比增加 2. 52个百分点 (表 4)。
2. 5 酯酶同工酶分析
酯酶同工酶分析结果 (图 1) , 太阳菇、 姬松茸
酯酶同工酶酶谱结构基本相同 , 但太阳菇菌株 As
有一条特征酶带 ( Rf 0. 92)。参试 6个姬松茸不同菌
株酶带基本相同。
表 2 不同温度对太阳菇和姬松茸菌丝体生长发育的影响
Table 2 Ef fect of dif ferent temperature on mycelial
growth of Agaricus sylvaticus (As) and
Agaricus blaze i(Y82)
菌 种 不同温度下菌丝日均长速 ( mm· d
- 1 )
15℃ 20℃ 25℃ 30℃ 35℃
太阳菇 As 1. 04 1. 68 4. 24 6. 28 4. 58
姬松茸 Y82 2. 26 5. 20 6. 19 5. 20 2. 58
表 3 太阳菇与姬松茸栽培特性比较
Table 3 Comparison of cultivation properties between Agaricus sylvaticus (As) and Agaricus blaze i(Y82)
菌种 覆土后 春季出菇 秋季出菇 子实体发育温度 子实体发育湿度
太阳菇 As 菌丝不爬或少爬土 ,菌丝纽结在土层下发生 比 CK迟 10 d 比 CK早 7 d 17~ 27℃ 80% ~ 85%
姬松茸 Y82( CK) 菌丝爬土能力强 ,菌丝纽结在土层中发生 正常 正常 19~ 23℃ 90% ~ 95%
表 4 太阳菇与姬松茸的氨基酸含量比较
Table 4 Comparison of amino ac id content between Agaricus sylvaticus (As) and Agaricus blazei(Y82)
菌 种 天冬氨酸 苏氨酸 丝氨酸 谷氨酸 脯氨酸 甘氨酸 丙氨酸 胱氨酸 缬氨酸 异亮氨酸 蛋氨酸
姬松茸 Y82 2. 213 1. 141 1. 111 3. 569 0. 294 1. 172 1. 636 0. 244 1. 339 0. 919 2. 266
太阳菇 As 2. 111 1. 181 1. 037 3. 385 0. 892 1. 073 1. 633 0. 292 1. 341 0. 906 2. 942
菌 种 亮氨酸 酪氨酸 赖氨酸 苯丙氨酸 色氨酸 组氨酸 精氨酸 氨基酸总量 必需氨基酸 必需氨基酸占氨基酸总量 (% )
姬松茸 Y82 1. 757 0. 452 1. 016 1. 315 0. 385 0. 525 1. 693 23. 047 10. 834 47. 01
太阳菇 As 1. 699 0. 638 1. 640 1. 415 0. 411 0. 535 2. 032 25. 163 12. 053 49. 53
注:表中数据为每 100 mg干品含量 ( mg)。
图 1 太阳菇与姬松茸的酯酶同工酶酶谱
Fig. 1 Esterase isoenzyme zymogram of Agaricus sylvaticus and Agaricus blazei
34 福建农业学报 第 16卷
3 讨 论
3. 1 太阳菇在子实体阶段 ,要求培养料的温度和通
气量均比姬松茸大 ,而空气相对湿度则比姬松茸低 ,
湿度和通气是一对矛盾 ,所以管理上要求更加精细。
3. 2 与蘑菇、姬松茸不同 ,太阳菇覆土后没有明显
的爬土现象 , 因此 , 在喷第 1次出菇水时 , 要特别
掌握好时机 , 在菌丝形成纽结后 4~ 5 d即应喷第 1
次出菇水 , 一旦错过时机 , 将严重影响太阳菇的产
量。
3. 3 栽培试验结果表明 ,太阳菇春季出菇比姬松茸
迟 10 d,秋季出菇则早 7 d,说明太阳菇属中高温型
菇。 其子实体最适宜的生境条件尚待进一步研究。
参考文献:
[1 ] 水野· 卓 , 伊藤均 . なゼ姬マツタクほ 效くのカ [M ] . 东京:
创树社 , 1987.
[2 ]岩出亥之助 ,伊藤均 . 奇迹の姬マツタク [M ]. 东京: 地球社 ,
1982.
[3 ] 江枝和 , 朱丹 , 杨佩玉 , 等 . 姬松茸生物学特性研究 [ J] . 食
用菌学报 , 1996, 4 ( 1): 5- 12.
[4 ] 杨佩玉 , 江枝和 , 朱丹 , 等 . 姬松茸若干特性研究 [ J] . 福建
省农科院学报 , 1994, 9 ( 4): 55- 59.
[5 ] 杨新美 . 食用菌研究法 [M ]. 北京: 中国农业出版社 , 1998.
188- 189.
35第 2期 林衍铨等: 太阳菇与姬松茸栽培比较及酯酶同工酶分析