全 文 ：食用菌学报 2007.14(3):41 ～ 43
收稿日期:2007-07-04原稿;2007-08-30 修改稿
基金项目:国家自然基金项目“外生菌根菌资源及分子标记研究”(编号 30270864)的部分研究内容;东华大学新世
纪教育教学改革工程第 3 期教改项目(序号 046)的部分研究内容
作者简介:曹张军(1975-), 男 , 2004年毕业于西北农林科技大学植物病理学专业 ,博士 , 主要从事微生物分子生物
学方面的教学与科研工作 ,发表主笔论文 6 篇。
文章编号:1005-9873(2007)03-0041-03
一个适合松茸菌丝生长的加富培养基
曹张军1 , 张兴群1 , 吕小鹰1 , 林晓民2
(1 东华大学化工学院 , 上海 201620; 2 河南科技大学林学院 ,河南洛阳 471003)
摘 要:本研究根据微测量法测量菌丝生长直径及长度指标确定了一个适合松茸(Tricholoma matsutake)菌
丝培养的培养基 , 培养基配方(g/ L):去皮马铃薯(煮出液)100 , 葡萄糖 15 , 酵母浸膏 3 , D-异亮氨酸 0.15 ,
(NH 4)2H PO4 0.25 , KH2PO 4 0.5 , CaCl2 0.05 , NaCl 0.03 , 麦芽糖 0.05 ,M gSO4·7H2O 0.5 , MnSO 4 0.2 , 维生
素 B1 0.0001 , 琼脂 30 , 1% FeCl3 1.2 mL , pH 值 4.5
关键词:松茸;菌丝培养;加富培养基
中图分类号:S646.190.4 文献标识码:A
松茸(Tricholama matsutake)属伞菌目
(Agaricales), 口蘑科(Tricho lomataceae), 口蘑
属(Tricholoma), 是一种的珍稀名贵食用菌 ,被
誉为“菌中之王” ,有很高的食用 、药用和经济价
值。松茸在日本 、欧洲被视为食用菌中的珍玉 ,
具有强身 、益肠胃 、止痛 、理气化痰 、驱虫的作用 ,
还具有医治糖尿病 、抗癌等特殊功效 ,松茸子实
体热水提取物对小白鼠肉瘤 180 和艾氏癌的抑
制率分别达到 91.8%和 70%。由于松茸特殊的
生物学特性 ,其菌丝体的生长速度比其他种类要
慢得多 ,在人工培养基上培养子实体是不可能
的。为确定其适宜的培养条件 ,国内外展开了大
量的研究 ,为驯化松茸打下了一定的基础 。本文
针对松茸菌丝的生长要求 ,在参考目前常用松茸
培养基的基础上 ,对作为松茸菌丝培养基的主要
营养构成成分和营养添加成分的碳源及氨基酸
进行了优化 ,找出了对其菌丝生长起到促进作用
的合适用量。
1 材料与方法
1.1 供试菌株
本实验所用的松茸菌种(AY728276)为河南
科技大学惠赠 ,分离自云南松树林松茸子实体 ,
并通过了 rDNA 分子鉴定。
1.2 培养基改良
1.2.1 改良 MMN 培养基
改良 MMN 培养基(/L):去皮马铃薯(煮出
液)100 g;KH2 PO4 0.5 g;NH4 H 2 PO 4 0.25 g;
MgSO 4·7H2O 0.5 g;CaCl2·2H2O 0.05 g;MnSO4
0.2 g;麦芽糖 0.05 g;NaCl 0.03 g;1%的 FeCl3
1.2 mL;琼脂30 g;维生素 B1 0.0001 g 。
1.2.2 葡萄糖适宜添加浓度
在 MMN 培养基的基础上 ,在培养基中加入
D-异亮氨酸(0.15g/ L)[ 1] ,再分别添加 0.15g/ L
和 25g/ L 的葡萄糖 , pH 4.5 ,试验葡萄糖适宜添
加浓度。
1.2.3 培养 pH 对松茸菌落影响
以上述优化培养基为基础 ,参考文献[ 1] 对
不同松茸菌珠的最适 pH ,选取 pH4.5及 6.5 试
验其对供试菌株生长的影响 。
1.3 培养及结果统计
接种后于 24 ℃恒温培养箱中黑暗培养 ,第 4
天开始观察松茸菌丝体的生长情况 ,之后每天进
行观察记录 ,15天后结束。由于松茸菌丝体生长
缓慢 ,而菌丝直径可直接反映菌丝的长势 ,因此
在培养过程中于显微镜下观察测量并记录菌丝
直径[ 2] 。每个处理重复 7次 ,每个重复测 10个数
据取平均值。
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2007.03.015
食 用 菌 学 报 第 14 卷
2 结果与分析
2.1 不同营养条件的培养结果
松茸生长极其缓慢 ,在观测时间内 ,菌落的
生长量不足以用菌落直径等指标来衡量 ,因此本
实验采用了在显微镜下测量菌丝直径及菌丝的
生长量来反映松茸菌丝的生长情况。不同葡萄
糖添加量的 15天培养结果测量数据见表 1。
表 1 葡萄糖浓度对松茸的生长状况影响
Table 1 Effect of glucose on the growth of T.matsutakemycelium
葡萄糖浓度
Concentra tion
菌丝长度(mm)
Mycelial g row th rate
t值
t Value
菌丝直径(μm)
Hyphal diameter
t值
t Value
Contr ol1)
15g/ L 10.54±0.30
25g/ L 8.15±0.30
1.99
1.64±0.02
1.88±0.02
8.0
1)Contr ol为改良 MMN 培养基 Control:Grow n on MMN medium
从表 1 可以看出 , 当葡萄糖添加浓度为
15 g/L时 ,菌丝体的生长长度大于 25 g/L ,且差
异达到极显著[ t(1.99)
萄糖浓度 15 g/L ,但差异不显著[ t(8.0)>t 0.05
(4.30)>t0.01(3.25)] 。因此可知 ,不同葡萄糖添
加浓度主要影响松茸菌丝的生长速度 ,而对菌丝
直径的影响相对较小 ,综上 ,在葡萄糖添加浓
度为 15 g/ L 时菌丝生长 好于葡萄糖浓度
为25 g/L 。
以 MMN 培养基作为菌丝培养的对照 ,在实
验阶段内菌丝生长不明显 ,可见在相同条件下 ,
加富培养基明显优于常用的 MMN培养基 。
2.2 不同 pH的培养结果
培养基 pH 为 4.5时 ,松茸菌丝体生长旺盛 ,
菌丝为乳白色 ,向各个方向生长 ,由稀疏的菌丝
体生长形成致密的球形菌落(图 1A)。培养基
pH 值为 6.5时 ,松茸菌丝体生长迅速 ,但松茸表
面出现褐化现象(图 1B)。
由此笔者认为 ,在其他生长因子相同时 , 培
养基pH 值为 4.5时菌丝生长优于 pH 值 6.5 ,供
试菌株更适宜在低 pH 环境下生长 。
图 1 pH对菌落生长影响
Fig.1 Ef fect of medium pH on T.matsutake colony morphology A.pH 4.5 , B pH 6.5
3 结论
通过试验 ,供试的松茸菌株的菌丝适宜培养
基配方为(/ L):去皮马铃薯(煮出液)100 g ,葡萄
糖 15 g , 酵母浸膏 3 g , D-异亮氨酸 0.15 g ,
NH 4H 2PO4 0.25 g ,KH2 PO 4 0.5 g ,CaCl20.05 g ,
NaCl 0.03 g , 麦芽糖 0.05 g , MgSO 4 ·7H 2 O
0.5 g , MnSO4 0.2 g ,维生素 B1 0.0001 g ,琼脂
30 g , 1%的 FeC l3 1.2 mL ,pH 值 4.5
在本研究中 ,松茸菌丝在人工培养条件下生
长特别缓慢 ,目前在国内外已经有多个实验室时
行松茸的人工培养研究 ,傅伟杰[ 3] ,许广波[ 4] 实
验结果得到松茸快速生长结果 , 而曾东方[ 5] ,
Kaw agishi
[ 1] 等研究也得出松茸在人工培养时生
长特别慢的结论 ,这是由于菌株之间的差异还是
由其它原因造成 ,有待于进一步研究。
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第 3 期 曹张军 ,等:一个适合松茸菌丝生长的加富培养基
参考文献
[ 1] KAWAGISH I H , HAM AJIMA K , TAKANAMI R,
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mushroom Tricholoma matsutake by D-isoleucine
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[ 2] 赵 斌 , 何绍江.微生物学实验[ M] .北京:科学出版
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[ 3] 傅伟杰 , 魏铁铮 ,许广波 , 等.松茸纯培养母种适宜培
养基的筛选[ J] .中国学术期刊文摘(科技快报),
2000 , 8:6.
[ 4] 许广波 , 傅伟杰 ,张明杰.长白山区松口蘑的生态习性
及驯化栽培.延边大学农学学报 , 1999 , 21(2):
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[ 5] 曾东方.珍稀共生食用菌松口蘑的人工驯化.中国
生物工程杂志 , 2002 , 22(6):24-27.
[本文编辑] 曹 晖
An Enr iched Culture Medium for the Growth of
Tricholoma matsutake Mycelium
CAO Zh angjun
1 , ZHANG Xingqun1 , LU Xiaoying1 , LIN Xiaomin2
(1College of Chemistry and Chemical Engineer ing , Donghua University , Shanghai 201620 , China;
2Depar tment of Hor ticulture and Landscape Architec tur e ,Henan Unive rsity of Science and
Technology , Luoyang ,Henan 471003 , China)
Abstract:An enr iched culture medium for Tricholoma matsutake mycelium containing(/ L):potato extr act
100 g , dextrose 15 g , yeast extr act 3 g , D- isoleucine 0.15 g , (NH4)2HPO4 0.25 g , KH2PO3 0.5 g , CaCl2
0.05 g , NaCl 0.03 g , maltose 0.05 g , MgSO4·7H2O 0.5 g , MnSO4 0.2 g , vitam in B1 0.0001 g , agar 30 g ,
1% FeCl3 1.2 mL , pH 4.5 , has been developed using mycelial growth r ate and hyph al diame ter as growth
determinants.
Key words:Tricholoma matsutake;Mycelium culture;Enr iched medium
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