全 文 ：收稿日期:2014-03-24
基金项目:四川省中医药管理局青年项目(2012-E-016)
作者简介:宋芹(1982-)，女，博士，主要从事中药活性物质基础及作用机制研究;Tel:028-84616301，E-mail:sq82802@ hotmail. com。
* 通讯作者:杨伟峰，Tel:010-62835614，E-mail:sunzhuyang@ 126. com。
见血清有效部位的止血作用及机制研究
宋 芹1，刘 芳2，苟小军1，杨伟峰3*
(1. 成都大学生物产业学院，四川 成都 610106;2. 成都中医药大学药学院，四川 成都 611137;3. 中国中
医科学院西苑医院实验研究中心，北京 100091)
摘要 目的:探讨见血清不同提取部位的止血作用及机制。方法:观察见血清乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和水部
位对大鼠凝血四项(APTT、PT、TT、Fib)和血浆 TF、TFPI、vWF、t-PA、PAI-1 含量的影响。结果:见血清各提取部位均
可显著缩短大鼠 PT、APTT，正丁醇部位可显著增加 Fib含量，各提取部位对 TT无显著影响。见血清各提取部位均
能显著降低血浆 TFPI含量，乙醚、乙酸乙酯、水部位可降低血浆中 TF 含量，比较二者抑制率，发现 TFPI 的抑制率
高于 TF。见血清各提取部位均可升高血浆 vWF含量。见血清乙醚、水部位可降低血浆中 t-PA 含量，而正丁醇提
取部位则相反地表现为升高血浆中 t-PA含量。见血清各提取部位均可升高血浆中 PAI-1 含量。结论:见血清可激
活内源性和外源性凝血系统，提高血浆中 vWF、PAI-1 含量，降低血浆 t-PA、TFPI 活性，使机体处于高凝状态，促进
血小板的聚集和粘附，有利于血栓的形成，从而发挥止血、促凝作用，其中正丁醇部位既具有止血作用也具有活血
作用。
关键词 见血清;活性部位;止血机制
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)10-1849-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 10. 037
见血清为兰科羊耳蒜属植物羊耳兰 Liparis ner-
vosa (Thunb. )Lindl. 的干燥全草，具有凉血止血、
清热解毒的功效〔1〕，临床主要应用于外伤出血、妇
女崩漏、手术出血、疮疖肿毒等，由于止血疗效显著，
在中国四川、浙江、贵州等地民间广泛应用，被誉为
“止血奇药”。目前对见血清止血作用的研究报道
较少，课题组前期研究发现见血清提取物能显著缩
短小鼠凝血时间和出血时间〔2〕，本实验进一步对见
血清止血活性部位及作用机制进行了探讨。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级 Wistar 大鼠 50 只，体质量
200 ～ 220 g，雌雄各半，由北京华阜康科技股份有限
责任公司提供，生产许可证号:SCXK(京)2009-
0007。
1. 2 药物与试剂 见血清药材购自四川成都荷花
池中药材市场，经成都大学中药化学实验室陈封政
教授鉴定为兰科羊耳蒜属植物羊耳兰 Liparis nervosa
(Thunb. )Lindl. 的干燥全草;云南白药胶囊，云南
白药集团股份有限公司;活化部分凝血活酶时间
(APTT)、血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间
(TT)、纤维蛋白原含量(Fib)测定试剂盒，上海太阳
生物技术有限公司产品;大鼠血管性假性血友病因
子(vWF)ELISA试剂盒、大鼠组织型纤维溶酶激活
剂(t-PA)ELISA试剂盒、大鼠纤溶酶原激活物抑制
因子-1(PAI-1)ELISA 试剂盒、大鼠组织因子(TF)
ELISA检测试剂盒、大鼠组织因子途径抑制物(TF-
PI)ELISA检测试剂盒均为北京鑫方程生物技术有
限公司产品。
1. 3 主要仪器 COALAD 1000(TECO)全自动血
凝测试仪(德国);Thermo IEC CL31Ｒ Multispeed 台
式离心机(美国);Labsystems Multiskan MS352 型酶
标仪(芬兰);Thermo Labsystems AC8 洗板机(芬
兰)。
2 方法
2. 1 见血清不同活性部位的制备 取见血清药材
粗粉约 200 g加入 2 000 mL 95%乙醇 75 ℃回流提
取 2 次，每次 3 h，趁热过滤，合并 2 次滤液，减压回
收得浸膏。浸膏加适量水分散，分别用等体积乙醚、
乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取 3 次，萃取后的残余物
作为水部位，各萃取部位浸膏 60 ℃减压干燥得各部
位干粉。将乙醚部位干粉放入研钵中，加入适量
0. 5% CMC-Na溶液，研磨均匀，再加入适量蒸馏水
配制成含生药 0. 2 g /mL的悬浊液。乙酸乙酯、正丁
醇及水部位干粉分别加入少量蒸馏水研磨均匀后，
再加入适量蒸馏水配制成含生药量 0. 2 g /mL 的悬
浊液。
2. 2 动物分组及给药 大鼠 80 只，雌雄各半，随
机分为空白对照组、云南白药阳性对照组及见血清
·9481·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 10 期 2014 年 10 月
醇提物乙醚、乙酸乙酯、正丁醇及水部位(高、中、低
剂量)组，每组 10 只。各组大鼠按表 1 剂量灌胃给
予相应药物，1 次 /d，连续 5 d。其中，空白对照组给
予生理盐水灌胃。
2. 3 大鼠凝血四项(PT、APTT、TT、Fib)检测 各
组大鼠于末次给药 1 h后，腹腔内注射 3. 5%水合氯
醛麻醉，腹主动脉取血，血液标本以 3. 8%枸橼酸钠
1∶ 9 抗凝，3 000 r /min离心 10 min，按试剂盒操作说
明书检测各组大鼠凝血四项。
2. 4 大鼠血浆 vWF、t-PA、PAI-1、TF、TFPI 含量的
测定 各组大鼠于末次给药 1 h 后，腹腔内注射
3. 5%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，血液标本以
3. 8%枸橼酸钠 1∶ 9 抗凝，3 000 r /min 离心 10 min，
按 ELISA试剂盒说明书操作分别检测各组大鼠血
浆 vWF、t-PA、PAI-1、TF、TFPI含量。
2. 5 统计学处理 实验数据以 珋x ± s 表示，采用
SPSS 10. 0 统计软件进行统计，组间分析采用 One-
Way ANOVA方差分析，两组间比较采用 t检验。
3 结果
3. 1 见血清各有效部位对大鼠凝血四项的影响
结果如表 1 所示，与空白对照组比较，见血清各有效
部位组及云南白药组大鼠 PT、APTT 均显著缩短(P
＜0. 01);正丁醇部位组及云南白药组大鼠 Fib 含量
显著升高(P ＜ 0. 01)。见血清各有效部位及云南白
药组大鼠 TT水平与空白对照组比较差异均无统计
学意义(P ＞ 0. 05)。
表 1 见血清各有效部位对大鼠凝血四项的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /(g /kg) PT /s APTT /s TT /s Fib /(g /L)
空白对照组 － 15. 26 ± 0. 59 24. 12 ± 1. 44 35. 83 ± 0. 83 2. 13 ± 0. 11
云南白药组 0. 67 13. 99 ± 0. 72＊＊ 21. 33 ± 1. 05＊＊ 35. 36 ± 0. 54 2. 45 ± 0. 34＊＊
乙醚部位组 4 14. 12 ± 0. 62＊＊ 20. 28 ± 0. 33＊＊ 36. 04 ± 1. 14 2. 22 ± 0. 27
乙酸乙酯部位组 4 14. 16 ± 0. 47＊＊ 20. 63 ± 0. 55＊＊ 35. 94 ± 1. 22 2. 12 ± 0. 09
正丁醇部位组 4 13. 63 ± 0. 59＊＊ 20. 21 ± 0. 17＊＊ 34. 89 ± 1. 63 2. 39 ± 0. 30＊＊
水部位低剂量组 2 13. 95 ± 0. 53＊＊ 21. 78 ± 1. 14＊＊ 35. 72 ± 0. 99 2. 24 ± 0. 24
水部位中剂量组 4 13. 77 ± 0. 36＊＊ 20. 67 ± 0. 75＊＊ 34. 83 ± 1. 62 2. 32 ± 0. 16
水部位高剂量组 8 14. 02 ± 0. 41＊＊ 21. 03 ± 0. 74＊＊ 35. 33 ± 0. 95 2. 12 ± 0. 09
注:与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01
3. 2 见血清各有效部位对大鼠血浆 TF、TFPI 含量
的影响 结果如表 2 所示，与空白对照组比较，见血
清乙醚、乙酸乙酯部位组，水部位中、高剂量组及云
南白药组血浆 TF含量显著降低(P ＜ 0. 01);见血清
各有效部位组及云南白药组血浆 TFPI 含量显著降
低(P ＜ 0. 01)。见血清水部位的作用呈现一定量效
关系。
表 2 见血清各有效部位对大鼠血浆 TF、TFPI含量及变化率的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 /(g /kg) TF /(ng /L) TF变化率 /% TFPI /(ng /L) TFPI变化率 /%
空白对照组 － 211. 26 ± 12. 90 － 74. 06 ± 5. 99 －
云南白药组 0. 67 177. 13 ± 11. 16＊＊ － 16. 16 15. 59 ± 3. 91＊＊ － 78. 95
乙醚部位组 4 174. 92 ± 12. 34＊＊ － 17. 20 16. 84 ± 1. 13＊＊ － 77. 26
乙酸乙酯部位组 4 184. 57 ± 17. 16＊＊ － 12. 63 16. 33 ± 0. 83＊＊ － 77. 95
正丁醇部位组 4 212. 48 ± 7. 28 0. 58 12. 13 ± 1. 84＊＊ － 83. 62
水部位低剂量组 2 216. 12 ± 15. 49 2. 30 20. 82 ± 1. 30＊＊ － 71. 89
水部位中剂量组 4 180. 49 ± 6. 61＊＊ － 14. 56 18. 35 ± 1. 40＊＊ － 75. 22
水部位高剂量组 8 162. 78 ± 9. 91＊＊ － 22. 94 14. 66 ± 1. 80＊＊ － 80. 21
注:与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01
3. 3 见血清各有效部位对大鼠血浆 vWF含量的影
响 结果如图 1 所示，与空白对照组比较，见血清各
有效部位组及云南白药组大鼠血浆 vWF 的含量均
显著升高(P ＜ 0. 01)。见血清水部位的作用呈现一
定量效关系。
3. 4 见血清各有效部位对大鼠血浆 t-PA含量的影
响 结果如图 2 所示，与空白对照组比较，见血清乙
醚部位组，水部位中、高剂量组及云南白药组大鼠血
浆 t-PA含量显著降低(P ＜ 0. 05)，正丁醇部位组大
鼠血浆 t-PA 含量显著升高(P ＜ 0. 05)。见血清水
部位的作用呈现一定量效关系。
3. 5 见血清各有效部位对大鼠血浆 PAI-1 含量的
影响 结果如图 3 所示，与空白对照组比较，见血清
各有效部位组大鼠血浆 PAI-1 含量均显著升高(P
·0581· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 10 期 2014 年 10 月
＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01)。见血清水部位的作用呈现一
定量效关系。
图 1 见血清各有效部位对大鼠血浆 vWF含量的影响
A. 空白对照组 B. 云南白药组 C. 乙醚部位组 D. 乙酸
乙酯部位组 E. 正丁醇部位组 F. 水部位低剂量组 G.
水部位中剂量组 H. 水部位高剂量组
注:与空白对照组比较，＊＊P ＜ 0. 01
图 2 见血清各有效部位对大鼠血浆 t-PA含量的影响
A. 空白对照组 B. 云南白药组 C. 乙醚部位组 D. 乙酸
乙酯部位组 E. 正丁醇部位组 F. 水部位低剂量组 G.
水部位中剂量组 H. 水部位高剂量组
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05
图 3 见血清各有效部位对大鼠血浆 PAI-1 含量的影响
A. 空白对照组 B. 云南白药组 C. 乙醚部位组 D. 乙酸
乙酯部位组 E. 正丁醇部位组 F. 水部位低剂量组 G.
水部位中剂量组 H. 水部位高剂量组
注:与空白对照组比较，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01
4 讨论
生理性止血过程主要包括血管挛缩、血小板血
栓和纤维蛋白凝块的形成与维持三个时相。首先是
受损伤局部及附近血管的挛缩;其次是血小板活化、
黏附、聚集于血管破损处，形成松软的止血栓堵塞伤
口实现初步止血;与此同时，血浆中的凝血系统被激
活，在局部迅速出现血浆凝固，以纤维蛋白网加固血
栓达到二期有效止血。通常凝血系统激活的同时，
也有抗凝与纤维蛋白溶解系统的激活，可抑制凝血
过程防止止血凝块不断增大，确保正常的血液循环。
血液凝固是由一系列凝血因子参与的、复杂的
蛋白质酶解过程，这一过程包括内源性凝血和外源
性凝血过程。APTT、PT、TT、Fib 四项指标是血栓与
止血的实验室筛选指标，其中，APTT 反映了内源途
径凝血因子凝血因子(Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ)的活性，TT 是检
测纤溶功能的指标，Fib 是肝脏内合成的一种糖蛋
白，血浆中的 FIB 必须达到一定浓度时才能保证止
血功能，PT则能反映外源性凝血系统的活性。
组织因子(TF)即凝血Ⅲ因子是外源性凝血途
径最主要的启动子。体内凝血过程的始动和病理性
血栓形成的关键是组织因子(TF)途径的启动〔3-5〕。
TFPI是 TF 内源性抑制因子，TF 对凝血因子的激活
过程受到 TFPI 的调控〔6〕。TF 途径被过度激活和 /
或 TFPI活性降低均可引起高凝状态，从而使机体更
易形成血栓〔7〕。
本实验结果表明见血清各提取部位均表现出缩
短 PT、APTT的作用，提示药物可提高血浆凝血酶原
浓度，促进凝血酶原向凝血酶的转化，提高活化凝血
酶血浆含量，其中以正丁醇部位作用较为显著。此
外，正丁醇提取部位还可通过提高血浆 Fib 含量加
速凝血过程。同时见血清对血浆 TF、TFPI 含量均
有降低作用，且其对 TFPI 的抑制作用强于对 TF 的
抑制作用，结合凝血四项的结果，推测见血清对外源
性凝血系统的干预作用是主要通过降低血浆 TFPI
活性，使机体处于高凝状态，有利于血栓的形成而起
到止血的作用，其中正丁醇部位止血作用显著。
vWF由血管内皮细胞合成和分泌，血浆中 vWF
是初期止血中支持血小板黏附的重要因素，参与凝
血和血小板黏附过程〔8〕。
t-PA和 PAI-1 是纤溶系统中重要的生理活性物
质。t-PA为纤溶系统的生理性激活剂，它能使纤溶
酶原转化为纤溶酶而降解和消除纤维蛋白块，而
PAI-1 为 t-PA的抑制物，因此二者间的平衡对维持
血液纤溶系统功能正常非常重要〔9，10〕。
本实验结果表明见血清可提高血浆中 vWF 含
量，从而促进血小板的聚集和黏附，发挥止血作用。
其中乙醚、乙酸乙酯、水部位能显著提高血浆中
·1581·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 10 期 2014 年 10 月
vWF含量的作用。乙醚、乙酸乙酯、水部位还能降
低血浆中 t-PA 含量、升高 PAI-1 含量。见血清正丁
醇提取部位中的某些成分也可通过升高血浆 t-PA
含量，达到促进纤溶、防止血栓形成，从而产生抗凝
血作用，但其具体的有效成分目前尚不清楚。
中药对机体的干预作用多表现为双向调节效
应，“活血止血”、“止血不留瘀”是部分中药止血方
药的显著特点之一。同时中药在采用不同提取方法
时由于所含有效成分不同也会表现出不同甚至相反
的药理作用。本实验结果表明见血清不同提取部位
对内、外源性凝血途径干预效应及强弱程度的不同，
对血浆 TF /TFPI 含量、vWF 含量、t-PA /PAI-1 含量
影响程度和趋势的不同，尤其以正丁醇提取部位表
现突出。推测正丁醇提取部位中可能含有某些成分
既有止血作用又具有抗凝血作用，可能具有“止血
而不留瘀”的功效。
参 考 文 献
［1］四川省食品药品监督管理局 . 四川省中药材标准［S］．
成都:四川科学技术出版社，2010.
［2］宋芹，赵琦，苟小军，等 . 见血清止血作用研究［J］． 成
都大学学报(自然科学版)，2013，32(1) :27-28.
［3］ LazarusＲA，Olivero AG，Eigenbrot C，et al . Inhibitors of
Tissue Factor. Factor Ⅶ a for anticoagulant therapy［J］．
Current Medicinal Chemistry，2004，11:2275-2290.
［4］ Pawlinski Ｒ，Pedersen B，Erlich J，et al. Ｒole of tissue fac-
tor in haemostasis，thrombosis，angiogenesis and inflamma-
tion:lessons from low tissue factor mice［J］． Thromb Haem-
ost，2004，92:444-450.
［5］ Mackman N. Ｒole of tissue factor in hemostasis and throm-
bosis［J］． Blood Cells，Molecules and Diseases，2006，36:
104-107.
［6］贺石林 . 组织因子途径及其临床意义［J］．中国实用内
科杂志，1997，17(9):556-558.
［7］ Corti Ｒ，Hutter Ｒ，Badimon JJ，et al. Evolving concepts in
the triad of atherosclerosis，inflammation and thrombosis
［J］． Journal of Thrombosis and Thrombolysis，2004，17:35-
44.
［8］Meredith IT，Anderson TJ，Uehata A，et al. Ｒole of endothe-
lium in ischemic coronary syndromes［J］． The American
Journal of Cardiology，1993，72:27-32.
［9］ Kohler HP，Grant PJ. Plasminogen-activator inhibitor type 1
and coronary artery disease［J］． The New England Journal
of Medicine，2000，342:1792-1801.
［10］ Ｒand JH，Wu XX，Potter BJ，et al. Co-localization of von
Willebrand factor and type Ⅵ collagen in human vascular
subendothelium［J］． American Journal of Pathology，
1993，142:843-850.
收稿日期:2014-01-23
作者简介:何新荣(1981-)，男，在读硕士研究生，主管中药师，主要从事医院中药学研究;Tel:010-66937426，E-mail:hexinrong666 @
163. com。
川芎含药血清对雪旺氏细胞促增殖作用及其机理研究
何新荣1，古 今1，韩亚亮1，孙 艳1，刘青莲2，杨 智3
(1. 中国人民解放军总医院药品保障中心中药房，北京 100853;2. 蚌埠医学院，安徽 蚌埠 233030;3. 海
南医学院药学院，海南 海口 570100)
摘要 目的:观察川芎含药血清对体外培养的雪旺氏细胞(SCs)增殖及 LNGFＲ、BDNF 和 CNTF 表达的影响，
探讨其促进周围神经再生的可能机制。方法:SD 大鼠随机分为川芎组和空白组。川芎组分别灌胃不同剂量
(1. 25、2. 5、5. 0、10. 0 g /kg)川芎水煎液，空白组给予等体积蒸馏水，1 w 后经股动脉采血制备血清。选取出生 3 d
的 SD乳大鼠双侧坐骨神经制备 SCs，将纯化的 SCs分为川芎含药血清组和空白血清组，MTT法测定不同时间各组
光密度 D(λ)值;48 h后应用 ＲT-PCＲ法检测 LNGFＲ、BDNF和 CNTF mＲNA表达水平。结果:川芎 2. 5、5. 0、10. 0 g /
kg组血清培养的 SCs在培养 1 d后 D(λ)值均大于空白血清组(P ＜ 0. 05 或 P ＜ 0. 01);与空白血清组比较，川芎含
药血清组 LNGFＲ mＲNA 表达显著升高(P ＜ 0. 01)、BDNF 和 CNTF mＲNA 表达显著降低(P ＜ 0. 01)。结论:2. 5 ～
10. 0 g /kg川芎含药血清可有效促进新生大鼠 SCs 增殖，其机制可能与上调 LNGFＲ 和下调 BDNF、CNTF mＲNA 的
表达有关。
关键词 川芎;SCs;增殖;含药血清;MTT法;LNGFＲ;BDNF;CNTF
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)10-1852-05
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 10. 038
·2581· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 10 期 2014 年 10 月