全 文 ：真 菌 学 报 7 (1 ): 5 6一 1 6, 1 9 8 8
A ct 。 荆份` 。 10 9沁。 夕n ,’c 。
木耳 和毛木耳 的极 性研 究 *
罗 信 昌
(华中农业大学 , 武汉、
摘要 从木耳 ( A o ic “ la) .ia ” 爪 ul a) 和毛木耳 (爪 oP vlt 喻人“ ) 的同一子实体弹射 、 分离
30 个单抱子并发育成单核菌丝体 , 各自分成 3 组 , 以 10 x 10 方式进行单核体两两配对 。 取两
配对单核体交结处菌丝体块到新的平板上继续发育并插人无菌的盖玻片让其菌丝爬上 。 后利
用双苯并咪哩 ( H o c hs t 3 3 2 5 8 ) 染色 , 在萤光显微镜下逐块检查配对后菌丝体细胞中核的数
目。 如果出现双核 ,再加以检查锁状联合以验证 , 则为配对亲和 。 不亲和者仍为单核 。 根据配
对行为进行不亲和因子分配决定其交配型 。 检测结果表明 , 木耳和毛木耳担抱子的性别是由
一对遗传因子 A . 二 所控制 。 属典型性二极性 ( b i oP l a r ) 异宗结合 。
关键词 极性 ; 萤光染色 ; 遗传因子 ; 交配型 ;木耳 ; 毛木耳
食用真菌的极性研究 , 在遗传和育种上有着重要的意义 。 过去研究极性惯常 用在一
般光学显微镜下观察单核体菌丝配对后有否锁状联合或是否结实的方法 来 确 定 其亲 和
性 。 这对锁状联合明显一类的高等担子菌如平菇 ( lP 。“ r o z “ ; o : t r e a t“ ` ) 、 香菇 ( L e ” it n “ `
“ od 。 ) 等是行之有效的。 但工作量大 ,花费的时间长 。 而对锁状联合不甚明显一类的食
用真菌如木耳 、毛木耳等就受到局限 。 萤光染色法 , 观察细胞核的数 目 ;加之检查锁状联
合以验证 ,比上法快速而准确 。
国际上对木耳和毛木耳的极性研究仅有 少 数 的报 导 且 无 定 论 ( B ur en t , 1 93 ;7
D u n e a n
,
19 7 2 ; R a p e r , 19 7 8 )
。 国内未见有研究报导 。
材 料 和 方 法
(一 ) 供试菌株 : 用于本研究的木耳和毛木耳子实体于 19 8 , 年 5 月从木耳产区— 湖北省房县采得 。
(二 ) 培养基 : 培养单核体和双核体菌丝所使用的培养基均为 C Y M 培养基 ( co m lP o t o y e as t o x t r ac t
m
e d i u m )
: 蛋白陈 2 9 , 酵母膏 2 9 , M g s O ; · 7 H Zo · 0 . 5 9 , K H : p o ; 0 . 4 6 9 , K ZH p o ; 1 9 , 葡萄糖 2 0 9 , 琼脂
2 0 9 , 蒸馏水 l 0 0 0m l。
(三 ) 生物染料 : 双苯并咪哇 H o e C h s ` 3 3 2 5 8 ( b i s b e n z i m i d e , ) A ld r i e h e h e m i e a l C o · 进 口 。 称取
H oe
: hs t 3 3 2 , 8 若干重 ,加入少量的热水 ( 50 ℃ 的重蒸水 )溶解 。 然后定容成 5 0拜g / m l 的母液 , 低温保存
备用 。 使用时 用磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液配制成最终浓度为 5雌 / m l 、 p H 为 7 . 4 的染色液 。
(四 ) 抱子弹射及单抱子分离 : 干耳片用清水浸泡 2刁 hr , 清洗 3一 4 次 ,再用无菌水漂洗 1一次 。
用镊子取出洗净的耳片 ,放在滤纸片上吸去多余的水分 , 后将耳片悬挂在一三角瓶内 ,进行抱子弹射 , 收
集抱子 (杨新美 1 9 7 2 ) (图 1 ) 。 采用 “稀释分离法” 分离单抱 。 用无菌水稀释收集的抱子 , 配制成每个低
1 9 8 6
一 12一 2 2 收稿 。
* 本项研究是中国科学院资助课题
本项研究是在杨新美教授指导下 , 英国温室作物研究所 D A w “ “ d 博士和 T lE l i o t 先生帮助下进行的 。
在此深表谢意 。
DOI : 10. 13346 /j . mycosystema . 1988. 01. 009
1 期 罗信昌 : 木耳和毛木耳的极性研究
倍视野中约有 10 个担抱子的悬浮液 , 然后涂平板 , 置 25 ℃ 温度条件下培养 5 天 。 待见到针头大菌落
后 ,在双目扩大镜下挑出单抱菌丝 , 经 H o eC h o 3 3 25 8 染色 ,在萤光显微镜下检查 , 确证为单核菌丝体 。
(五 ) 配对组合 : 木耳和毛木耳各 30 个单抱 , 以 10 个为 1组 , 各自分为 3 组进行 1 0 X 10
~ 一 一1
一 , 一 2
图 1 担抱子的弹射分 离
l
· 小块耳片 2 . 三角瓶 ( , o m l )
F 19
·
1 D i s c h a r g i n g i 、 o l a t i o n o f b a s i d i o s p o r e s :
t
·
p o : t i
,
) n o 士 a f r u i t bo d y 2 . e o n i e a l f l a s k ( s o m l )
- -一 1一 一 一 一一 2
一一产一 3
图 2 配对后菌丝体的培养
1
. 盖玻片 2 . 配对后的菌丝块 3 . 培养皿
F 19
.
2 I n c u b a t i o n o f m y e e l i u m a f t e r m a t i n g
1
.
c o v e r g l a s s 2
.
F u n g a l d i e s a f t e r m a t i n g 3
.
P亡 t r i 一d i吕h
( 六 ) 核的染色及不亲和因子分配 : 待两配对菌丝体交结后 , 取交结处菌丝块到新的平板上继续培
养并插入无菌的盖玻片让菌丝爬上 (图 2 ) 。 从培养皿里取出带有菌丝体的盖玻片放在一载玻片上 , 滴一
滴 H oe c hs t 3 3 2 5 8 染液 ,染色约 1分钟 ,置萤光显微镜下检查 。 配对亲和的菌丝体明显地观察到每个细
胞中呈现双核 ,极少为多核 。 不亲和者仍为单核 (图版 I )。 最后根据单核体的配对行为 , 进行不亲和因
子分配 ,结合锁状联合的观察确定其极性 (图 3刊 , 表 1一 2 ) 。
结 果 及 讨 论
用核的萤光染色法检测配对后菌丝体细胞中细胞核的数目 , 结合观察其锁状联合鉴
别木耳和毛木耳担抱子的配对行为 ,木耳 60 对可亲和占 1 3 对 (异常现象除外 )配对数的
45 务 ; 毛木耳 62 对可亲和 占 135 对配对数的 朽 多。 根据不亲和因子的统计其结果表明 ,
5 8 真 菌 学 报 7 卷
\ \ 1 2 3 。 ` 6 7 5 9 , 。
1 \ \ + 一 十 - - 一 十\ \ + 十 一 十 + + 十 -
\ \ 1 1 12 13 14 15 16 17 1 8 19 2 0
1 \ \ 一 十 + + 十 一 十 一 +
1 1 3 4 6 7 8 9
11 2 5 10
2 1 2 2 2 3 2 4 2 , 2 6 2 7 2 8 2 9 3 0
2 1 一 一 十 一 一 一 一 一 一
2 2 一 十 + + 一 一 一 一
2 3 十 + + 一 一 一 一
2 4 一 一 一 十 十 十
2 , 一 一 + + 十
2 6 一 十 + +
2 7 _ 一 _
2 8 一 _
2 9 一
3 0
a Z a ,
1 1 1 5 2 2 2 4
a 1 十 一 一 +
2 一 十 + 一
注 : 十 = 亲和 一 = 不亲和
N o t e : + = C
o m P a t i b l e
一 = I n e o m P a t i b l e
1 2 2 2 3 2 8 2 9 3 0
11 2 4 2 5 2 6
2 1 , 2 7
, 可能为突变体 2 1 , 2 7 C a n b e m u t a n t
图 3 木耳单核体不亲和类的划分
F i g 3 A s s o r t i n g o f m
o n o k a r y o n s o f A “ r ic “ l` 犷 i a a u r i e 泛多l a i n t o
i n e o m P a t i b il i t v e l a s s e s
它们的交配型是由一对遗传因子 A一 所控制 。 均属二极性异宗结合 。 研究木耳得到 的
结果与 B ur en t ( 19 3 7) 对其极性研究的结果相一致 。 但对毛木耳所得到的研究结 果与
D un ca
。 ( 1 9 7 2 ) 的结论— 毛木耳的配对型由双因子 A . a , B . b 所控制 ,却不相同。
月
1
’期 罗信昌 : 木耳和毛木耳的极性研究 5夕
P
i
P
:
司J |||||\ \ l
+十
2 3
4
5
6
/
8
9
1 0
\ 十 十 + + 一 十
十, \ _
+十\ _ _ _
\ \ 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 19 2 0
l’ \一 十 一 十 十 一 十\ \ 一 + 一 十 十 一 十\ \ + 一 + + 一 +
\ \ 一 十 十 一 +
\ \ 一 十 -
十
\ +ù+\+十一\\ 一
1 1 6 9 10 2 4 5 7 1 1 1 12 19 1 3 1 5 16
11 3 8 11 1 4 17 18 2 0
\ \ 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 2 8 2 9 3 0
21 \ \ 十 - - 一 十 + 一 十 P : P ,
1 1 1 4 2 1 2 2
P
i
1 十 一 一 十
3 一 + + 一
注 ; + 二亲和 一 ” 不亲和
N o t e : + 二 C o m P a t i b l e
一 二 I n g o m P a t i b l e
1 2 2 2 7 2 8 3 0
11 2 1 2 3 2 4 9 , 2 6 2 9
图 4 毛木耳单核体不亲和类的划分
F i g
.
4 A s s o r t i n g o f m o n o k a r y o n s o f A“ , i c “ l a , i a 户0 1夕t r ic h a i n t o i n e o m p a t i bi l i t y c l a s s e s
木耳单抱 2 1 、 27 号 , 在配对试验中出现异常现象 (见图 4 ) , 这可能是由于它们发生
突变或试验差错所致 。
生物染料 H o e o hs t 3 3 2 5 8 对真菌核特异性的萤光染色技术 , 结合检查锁状联合应用
于食用担子菌的极性测定是一个快速 、 可靠的方法 。 特别是对那些锁状联合不甚明显或
异宗结合带有单核结实的一类食用担子菌尤为适用 。
真 菌 学 报 7 卷幻
衰 l 根据配对行为分配不亲和因子( 木耳 )
T a b工e z . As : ig n 亩e n t o f i n o o m p a t i b i l i t y f a e t o r s a e e o r d i n g t o m a r i n g
b e h a v i o r ( A
.
a 。 , , i c o l 。 )
卜n a l a 2
表 2 根据配对行为分配不亲和因子 (毛木耳 )
T a b l e 2 A s s i g n m e n t o f i n e o m P a t i b i l i t y f a e t o r s a e e o r d i n g t o m a t i n g
b e h a v i o r ( 刀 , ` r i e “ l a厅 a P o l夕t ,介无a )
5 e c t i o n P
l
P
2
A
_
1 6 9 1 0 2 4 5 7
S e x u a l t y P e
3 8
14 17 18 2 0
1 1 1 2 1 9 1 3 1 5 16
挑起同一担子上的 4 个担抱子做极性试验其结果会更为精确 , 说服力更强 。 本研究
中 ,配对后菌丝体细胞中呈现双核的均观察到锁状联合 , 几乎没有发现双核菌丝体不具锁
状联合的 。
单核单倍体到双核单倍体 , 及双核单倍体到单核 2 倍体的核行为过程有待进一步研
究 。 核外是否是木耳和毛木耳的性场所值得探究 。
L IT E R A T U R E C I T E D
A l e x o p o u l o s C J ( 19 5 2 ) s
e p t o b a s i d i o c e a e
,
in I n t r o d u e t o r y M y e o l o g y 3 5 8一 3 59
B u r n e t t H L ( 1 9 3 7 ) S
t u d i e s i n th o s e x u a li t y o f t h o h e t e r o b a s id i a e
.
M夕c o l o g i “ 29 : 6 2 9一 6 4 ,
C h a n g s T
,
Q u i m i o T H ( 1 9 82 ) G
e n e t i e s a n d b r e e d i n g o f c u l t i v a t e d m u s h r o o m s ; T a x o n o m y a
: ,
d
b a s i d i o e a r P d e v e l o Pm e n t o f A 之一,该c “ l a ,该a m u s h r o o m s . i n T r o P ; e a l M u s h r o o m s B i o l o g i e a l N a t u r e
a n d C u l t iv a t i o n M e t h o d s 2 3一了2 , 3 83一 4 2 5
D u n c a n E G ( 1 9 7 2 ) M i
e r o e v o l u t i o n i n 注 , , , i c o l a r i a 户0 1夕了r i c 人a . M夕c o l o g i a 4 : 3 8 2一 3 89
E Il i o t t T J ( 19 72 ) S
e x a n d s i n g l e s P o r e
.
M
o s方, 0 0 。 · S c f s : 1 1一 1 8
K a n g a t h a r a l i n g a m N
,
F e r g u s o n MW ( 19 8 4 ) A
s i m p l e a n d r a P i d t e e h n i q u e f o r f l u o r e s e e n c e
5 t a i n i n g o f f u n g a l n u c l e i
·
C “ r M i c r o b i o l 10 : 9 9一 1 0 4
R a p e r C A ( 1 9 7 8 ) s
e x u a l i t y a o d b r e e d i n g
.
in T h e B i o l o g y a n d C u l t i v a t i o n o f E d i b l e M
u s h r o o m s
e d i t e d b y 5 T c h a n g a n d W A H a y e s
·
5 3一 1 1 7 , A c a d e m i e p r e s s
杨新美 ( 1 9 7 2 ) 《黑木耳香菇栽培技术 》 26 一 27 页 湖北出版社
飞J .,`1,ó冉、ér月`LIrJ
4哎了ù卜一r lLrr卫
1.fJ .J钾了ǎ乃ù.L加l`
1 期 罗信昌 : 木耳和毛木耳的极性研究 6 l
S T U D I E S O N T H E S E X U A L I t 丫 6 F A U R I C U L A R I A
A U R I C U L A A N D A 一P O L Y T R I C H A
L u o X 工N e 一e H ^ 啪
( H “ a z 人。 , 了 才。 , i c , z, u r a z u , 萝。 er ,介, , 牙 ,盛咖 )
A B s T R A e T B
a s i d io s p o r e 。 w e r 。 。 。 zze e t e d b y d i s e h a r g i n宫’ s p 。毖e s f r o m : h。 , a m e b a s 、d io c a r p
o f 才。 r i c o za , i。 az, r i c o l a 。 n d 而 ir c o l a ; i。 户 0 1夕: r , c人“ s e p a r a t e l y . s吨 Io s p o r e s f r o m e a e h s p e e ; e 、
w e
r e o bt a i n e d w i t h d i l u t i o n m e t h o d
.
M o n o s p o
r e e u l t u r e s o f 血 e卜印己e i e s w e r e i g o l a t e d b y p i e k -
i n g u p s i n g l e s p o r e i n d i v i d u a l l y u n d e r d is s e c t i n g m i e
r o s e o p o
. , 仆 i r t y m o n o s p o r e c u l t u r e , i , 1
。 a e h s p e c i e s w e r e d i v i d e d i n t o th r e e g r o u p s a n d t e s t e d by p a i r i n g 淤 et n 砂 et n . N u m be r of
n u c l e i p e r e e l l o f m y e e l i a f o r a l l m a t i n g s w e r e e s t im a t e d u s i n g f李, o r es c如 ` e ; ra i城 n g w i t h th e
s P
e e i f i e f u n g a l n u c l e a r s t a i n H oe
e h s t 3 32三8 . I f 亡h e t w o m o n o s Po er ` 诚 t少 es w e翠 e om aP ri b l e ,
t w o n u e l e i w o u l d a p p e a r i n o n e e e l l w i th e la m p e o n n e c t i o n
,
w h e r e a s th e r e w o u ld be o n l y o n e
n u c l e u s p e r e e l l f o r i n e om p
a t i bl e m a t i n g s
.
M a t i n g t y p e w
a s d e t e r m i n e d by a s isg
n
me nt
o f i n e o m
-
Pa t i b l e f a e t o r a e c o r d i n g t o m a t i n g b eh a v i o r b e t w e e n m o n o e a r y o n e o l o苗e s . hT e P r o P o r t i o n o f
t l , e c o m p a t i bl e p a i r in g s i n t h e t o t a l m a t i n g p a i r i n 郎 w er 41% f o r 才
·
a o r若c衅a · 、彻磷留% f o r
A
.
P口l y汀 ic h .a
T h。 r e s u zt。 。 f p a i r i n g , h o w e d th a t t h。 m a : i n g t y p e 。 o f b o t h 汉 . 。 u r i c “ z。 。 n己 A . 户J J夕` r i c 、 a
a r e e o n t r o t l e d b y a s i n g l e fa c r o r a n d the
r e f o r e b e l o n g t o bi Po l a r ty p e
.
乙
K E Y WO R D S s
e x u a l i t y ; F l u o r e s e e n e e 、 t a i n i n g ; H e r e d i t a r y f a c r o r ; M a tin g
.
t y Pe ; A “ -
r i c u l a r i a a “ r i c u l a ,. A“ r i c “ l a r i a P o l y t r i c h a