免费文献传递   相关文献

宽叶独行菜不同极性部位对鼠胃肠动力及MTL和GAS的影响



全 文 :湖 北 农 业 科 学 2016 年
宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)属十字花
科多年生草本植物,又称大辣辣、止痢草,在中国主
要产于内蒙古、西藏、青海等地,世界各地均有分
布,生在村旁、田边、山坡及盐化草甸,海拔 1 800~
4 250 m;全草入药,有清热燥湿作用,治菌痢、肠炎[1]。
试验用宽叶独行菜不同极性部位提取物比较其对
收稿日期:2016-06-14
基金项目:青海省应用基础研究计划项目(2012-Z-714);青海省自然科学基金项目(2016-ZJ-911)
作者简介:孙士浩(1989-),男,河南许昌人,在读硕士研究生,研究方向为应用植物学,(电话)18397117092(电子信箱)501192880@qq.com;
通信作者,马建滨(1965-),男,青海西宁人,教授,(电子信箱)mjb_117@163.com;都玉蓉(1968-),女,青海西宁人,教授,(电子信箱)
916436338@qq.com。
第 55 卷第 8 期
2016年 4 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol. 55 No.7
Apr.,2016
2
1
1
Jan
18 期
9
Vol. 5 No.18
Sep
宽叶独行菜不同极性部位对鼠胃肠动力及MTL和
GAS的影响
孙士浩 1,都玉蓉 1,祁得胜1,林鹏程 2,马建滨 1
(1.青海师范大学生命与地理科学学院,西宁 810008;2.青海民族大学药学院,西宁 810007)
摘要:为明确宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.)提取物中促胃肠动力的有效部位,在小鼠腹腔注射硫酸
阿托品的方法制造胃肠动力障碍模型,测定胃内色素残留率和小肠推进比,并检测血浆胃动素(MTL)和
血浆胃泌素(GAS)的含量。结果表明,正丁醇部位对小鼠胃内色素残留率的影响与模型对照组比较有显著
差异,水提取部位、乙酸乙酯部位有极显著差异;水提取部位对小肠推进比的影响与模型对照组比较有
显著差异,乙酸乙酯部位有极显著差异;水提取部位、正丁醇部位对小鼠 MTL 含量影响与模型对照组比
较有显著差异,乙酸乙酯部位有极显著差异,乙酸乙酯部位对小鼠 GAS 含量的影响与模型对照组比较有
显著差异。 初步判断乙酸乙酯部位为宽叶独行菜促胃肠动力的有效部位,其作用机制还有待进一步研究。
关键词:宽叶独行菜(Lepidium latifolium L.);极性部位;胃肠动力;血浆胃动素(MTL);血浆胃泌素(GAS)
中图分类号:S567.23+9;R915 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2016)18-4790-03
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.039
Effect of Different Polar Fractions of Lepidium latifolium L. On Mice Gastrointestinal
Motility, MTL and GAS
SUN Shi-hao1,DU Yu-rong1,QI De-sheng1,LIN Peng-cheng2,MA Jian-bin1
(1. School of Life and Geographical Sciences, Qinghai Normal University, Xining 810008, China;
2.College for Pharmacy,Qinghai University for Nationalities,Xining 810007,China)
Abstract: To determine the effective fractions of promoting gastrointes tinal motility from the extracts of Lepidium latifolium
L., the model of gastrointestinal motility disorder was produced by the intraperitoneal injection of atropine sulfate in the
mice, then the rate of gastric pigment residues and the intestinal propulsion ratio were determined by injecting positive drugs
and tested drugs into stomach of the model mice, and the contents of MTL and GAS in plasma were detected. The results
showed that, compared with the model group, the effect on the residual rate of gastric pigment in mice from n-butanol
fraction showed significant differences, and the effect from fractions of water extraction and ethyl acetate showed extremely
significant differences. Compared with the model group, the effect on the intestinal propulsion ratio from the water extraction
fraction showed significant differences, and the effect from the ethyl acetate fraction showed extremely significant differences.
Compared with the model group, the effect on MTL content of plasma in mice from fractions of water extraction and n-
butanol showed significant differences, and the effect of ethyl acetate fraction showed extremely significant differences.
Compared with the model group, the effect on GAS content of plasma from the ethyl acetate fraction showed significant
differences. With the preliminary judgment, the ethyl acetate fraction from Lepidium latifolium L. was the effective fraction of
promoting gastrointestinal motility, and its mechanism of action remained to be further studied.
Key words: Lepidium latifolium L.; polar fractions; gastrointestinal motility; MTL; GAS
第 18 期
小鼠胃排空、肠推进的作用,并观察其对血浆胃动
素、胃泌素的影响,旨在为宽叶独行菜进一步的研
究与开发提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
昆明种小鼠 70 只,体重(20±2) g,雌雄兼用,试
验动物生产许可证号为 SC×K(青)2005-0001,由青
海省地方病预防控制所动物中心提供;宽叶独行菜
采自青海省格尔木市大格勒乡。
药品和试剂:蓝色葡聚糖 2000(西宁宝信生物
科技有限公司);多潘立酮片(吗丁啉)(西安杨森制
药有限公司生产,批次:H109100003);肝素钠(山东
东营爱博生物制品有限公司生产,批号:12100613);
大鼠胃动素(MTL)ELISA 检测试剂盒(96 T)、大鼠
胃泌素(GAS)ELISA 检测试剂盒(96 T)(上海雅浦
生物科技有限公司)。
仪器:RE-52B 型旋转蒸发器,上海亚荣生化仪
器厂;高速离心机,上海医分仪器制造有限公司;752
型紫外可见分光光度计,上海菁华科技仪器有限公
司;YP15KN 型电子天平, 上海精密科学有限公司;
离心沉淀机,上海医分仪器制造有限公司;酶标仪
Xmark Microplate Spectrophotometer,上海研域实验
室设备有限公司;HW-1000超级恒温水浴锅, 成都
泰盟软件有限公司;高精度微量加样器(0.5~10 μL、
2~20 μL、20~200 μL),大龙医疗设备有限公司。
1.2 方法
1.2.1 宽叶独行菜不同极性部位的制备 将宽叶
独行菜全草阴干并粉碎后, 用水提取 2 次 (料液比
1∶12,80 ℃,1 h),合并提取液,减压浓缩后得到黑褐
色黏稠的浸膏,此为水提取部位。 取水提取部位浸
膏溶于适量纯水中,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁
醇各萃取 2 次,合并同一部位滤液,减压浓缩,得
到浸膏分别为石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇
部位。
由于宽叶独行菜的半数致死量为 LD50=500 g/kg[2],
且通过预试验的结果得出 1 / 20LD50即给予 20 g 小
鼠 0.5 g / d生药为最佳给药剂量,故将所得各部位浸
膏配制成 1 mL 含 1.67 g 生药材的溶液,放置 4 ℃冰
箱保存备用。
1.2.2 动物分组与给药 将 70 只小鼠随机分为 7
组,每组 10 只,雌雄各半,分别为空白对照组(生理
盐水)、模型对照组(阿托品)、阳性对照组(阿托品+
吗丁啉)、受试药物组Ⅰ(阿托品+水提取部位)、受
试药物组Ⅱ(阿托品+石油醚部位)、受试药物组Ⅲ
(阿托品+乙酸乙酯部位)、受试药物组Ⅳ(阿托品+
正丁醇部位)。
小鼠适应性喂养 7 d 后称重并开始灌胃给药,
由试验动物与人的体表面积比等效剂量换算表 [3]进
行换算,阳性对照组给吗丁啉混悬液(0.8 mg / mL),
受试药物组Ⅰ给水提取部位溶液 (283 mg / mL),受
试药物组Ⅱ给石油醚部位溶液(7 mg / mL),受试药
物组Ⅲ给乙酸乙酯部位溶液(4.3 mg / mL),受试药物
组Ⅳ给正丁醇部位溶液(5 mg / mL),空白组和模型
组给生理盐水,均按 0.3 mL / 20 g 灌胃,灌胃前将各
部位药物水浴加热至 37 ℃并混匀, 每天灌胃 1 次,
连续 5 d 后禁食不禁水 24 h。 于第七天正常灌胃药
物后,对除空白组外的各组小鼠均腹腔注射硫酸阿
托品(0.02 mg / 20 g),空白组腹腔注射等体积的生理
盐水 [4],20 min 后对所有小鼠均灌服 0.3 mL 蓝色葡
聚糖 2000淀粉糊状物,30 min后脱颈处死小鼠。 取
主动脉血 0.5 mL,注入含肝素钠的离心管中,混匀,
4 ℃,3 000 r / min 离心 30 min,取上清液,置-20 ℃下
保存;之后剖开腹腔,结扎胃贲门和幽门后,迅速从
贲门处至回肠末端分离胃肠, 取出后放于实验台
上,剪掉全胃并将所有肠段自然拉直铺平。 用 4 mL
纯水将胃内残留物充分洗于 10 mL 离心管中,以
4 000 r / min 离心 20 min, 取上清液在波长 620 nm
处测其吸光度 ,求其各组平均值 ;另取 3 支离心
管均放入 0.3 mL 葡聚糖蓝 2 000 淀粉糊状物,加入
4 mL 纯水后相同条件下离心,取上清液测定的吸光
度, 将 3 支离心管的吸光度的平均值作为标准值,
胃内色素残留率=(各试验组胃内色素残留物吸光
度平均值/标准值)×100%。 同时,量取自幽门切迹至
蓝色葡聚糖 2000 淀粉糊状物到达处为蓝色葡聚糖
2000 推进距离,测量自幽门切迹至回盲部的距离为
小肠全长小肠推进比=(蓝色葡聚糖 2000 推进距离/
小肠全长)×100%[5]。 取待测血浆,严格按照 ELISA
试剂盒说明操作,检测血浆 MLT及 GAS含量。 结果
均用 x±s 表示,数据用 SPSS18.0 软件中的 LSD-t 检
验进行处理,以 α=0.05为检验水平。
2 结果与分析
2.1 宽叶独行菜不同极性部位对胃排空、肠推进的
影响
在对小鼠胃内色素相对残留率的比较中,与空
白对照组比较,模型组有显著差异(P<0.05);与模型
对照组比较,石油醚部位无明显效果,阳性对照、水
提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯部位均有显著差
异(P<0.05),其中,阳性对照、水提取部位、乙酸乙酯
部位的胃内色素残留率达到极显著水平(P<0.01);
与阳性对照组相比,乙酸乙酯部位与水提取部位差
孙士浩等:宽叶独行菜不同极性部位对鼠胃肠动力及 MTL 和 GAS 的影响 4791
湖 北 农 业 科 学 2016 年
异不显著(P>0.05),正丁醇部位差异显著(P<0.05),
石油醚部位差异极显著(P<0.01)。
在小肠推进比的比较中, 与空白对照组比较,
模型组有显著差异(P<0.05);与模型组比较,石油醚
部位无明显效果,阳性对照、水提取部位、乙酸乙酯
部位均有显著差异(P<0.05),其中,乙酸乙酯部位达
到极显著水平(P<0.01);与阳性对照组相比,乙酸乙
酯部位差异不显著(P>0.05),水提取部位差异显著
(P<0.05),石油醚部位差异极显著(P<0.01),如表 1
所示。
2.2 宽叶独行菜不同极性部位对胃肠激素的影响
在血浆胃动素(MTL)含量的比较中,与空白对
照组比较,模型组有显著差异(P<0.05);与模型组比
较,阳性对照、水提取部位、正丁醇部位、乙酸乙酯
部位均有显著差异(P<0.05),其中,乙酸乙酯部位达
到极显著水平(P<0.01);与阳性对照组相比,乙酸乙
酯部位差异不显著(P>0.05),水提取部位和正丁醇
部位差异显著(P<0.05),石油醚部位差异极显著(P<
0.01)。
在血浆胃泌素(GAS)含量的比较中,与空白对
照组比较,模型组有显著差异(P<0.05);与模型组比
较,乙酸乙酯部位有显著差异(P<0.05);与阳性对照
组相比,乙酸乙酯部位有显著差异(P<0.05),其余各
部位组有极显著差异(P<0.01),如表 2所示。
3 讨论
近年来,人们的饮食结构及生活规律发生了显
著的改变,致使胃肠动力障碍性疾病成为消化系统
中发病率最高的疾病之一,严重影响人们的身体健
康和生活质量。 目前就胃肠动力障碍性疾病的发病
机制没有统一的认识,尽管在部分领域有一定的研
究进展,但不能说明胃肠动力障碍性疾病确切的发
病机制[6]。
机体的胃排空与肠推进率是反映胃肠运动综
合功能的一项重要指标,也是最为直观和有效的研
究方法 [7];MTL 被公认为启动胃肠收缩活动的脑肠
肽,在消化间期呈周期性释放,通过作用于肠道神经
系统中的胃动素神经元,触发胃肠道消化间期移行
性复合运动(Migrating motor complex,MMC)Ⅲ相的
发生,引起胃大幅度的收缩和小肠节律性的蠕动[8];
GAS主要由胃窦部 G细胞分泌,有松弛幽门括约肌、
促进胃肠运动的作用 [9];功能性消化不良(FD)患者
血浆 MTL 浓度明显低于正常人、 血浆 GAS 水平变
化明显,一般认为胃肠激素水平的变化可能是 FD型
胃肠运动功能障碍的原因[10]。
阿托品是一种 M 胆碱受体阻断剂,其通过抑制
乙酰胆碱的释放降低胃肠道平滑肌的兴奋性,从而
降低平滑肌蠕动的幅度和频率[11]。 本研究采用腹腔
注射阿托品造胃肠动力障碍模型,并以小鼠胃排空
与肠推进率、血浆 MTL、GAS 水平为考察指标,旨在
筛选宽叶独行菜提取物中促胃肠动力作用的有效
部位。 试验结果表明,模型组在胃排空、肠推进及
MTL、GAS方面与空白组比较均有显著差异,说明阿
托品致胃肠动力障碍模型建立成功。 其提取物中水
提取部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均能使小鼠
胃排空加快,且水提取部位和乙酸乙酯部位效果最
为显著,在小肠推进速率方面,乙酸乙酯部位可显
著增强小鼠小肠推进率,故推测乙酸乙酯部位促胃
肠运动的作用机理可能是通过对抗阿托品对 M 胆
碱受体的阻断, 增加胃肠道乙酰胆碱分泌来实现
的,其确切作用机制需进一步研究证实;小鼠血浆
胃动素(MTL)和胃泌素(GAS)的水平,初步确定了
乙酸乙酯部位在胃肠激素方面具有良好的改善作
用,其对胃肠动力的促进作用可能与其可提高 MTL
水平有关。 关于宽叶独行菜的国内外最新文献中,
大多研究其化学成分和抗寒、抗盐等特性 [12,13],对该
属植物在药用方面的文献也仅限于中药典籍记载
表 1 宽叶独行菜不同极性部位对小鼠胃排空、
肠推进比的影响(x±s)
组别
空白对照组
模型对照组
阳性对照组
水提取部位组
正丁醇部位组
乙酸乙酯部位组
石油醚部位组
数量

10
10
10
10
10
10
10
剂量
mL
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
胃内色素残留率
%
79.71±6.86△
91.23±5.67*▲▲
54.90±16.10△△
66.82±12.13△△
78.29±12.65△▲
60.05±9.71△△
90.08±13.33▲▲
小肠推进比
%
38.33±6.17△
27.07±4.66*▲▲
68.58±13.56△△
46.45±8.22△▲
35.92±5.45▲▲
57.72±11.21△△
28.62±3.94▲▲
注:空白对照组与模型组相比,*P<0.05;**P<0.01;与模型对照组相
比,△P<0.05,△△P<0.01;与阳性对照组相比,▲P<0.05,▲▲P<0.01。 表 2同。
表 2 宽叶独行菜不同极性部位对小鼠血浆
MIL 和 GAS 的影响(x±s)
组别
空白对照组
模型对照组
阳性对照组
水提取部位组
正丁醇部位组
乙酸乙酯部位组
石油醚部位组
数量

10
10
10
10
10
10
10
剂量
mL
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
MTL
ng/mL
89.28±11.99
69.52±10.67*▲▲
125.07±18.16△△
92.42±13.21△▲
89.31±10.93△▲
110.84±17.47△△
67.71±13.47▲▲
GAS
ng/mL
81.47±12.03
67.33±8.99*▲▲
119.25±13.76△△
77.82±5.91▲▲
76.52±8.51▲▲
97.59±11.27△▲
69.35±3.17▲▲
(下转第 4801页)
4792
第 18 期
和少量研究报道,其促进胃肠运动及治疗胃肠动力
障碍性疾病方面的研究还未见报道,因此,本研究
结果为能充分利用这一资源,开发促胃肠动力中药
新药奠定了良好的前期基础,其药效成分和药理机
制还需进一步研究和探讨。
参考文献:
[1] 中国科学院中国植物志编委会.中国植物志(第 33 卷)[M].北京:
科学技术出版社,1978.
[2] 张晓峰,胡伯林.宽叶独行菜的化学成分研究[J].西北植物学报,
1994,14(4):329-333.
[3] 陈 奇 .中药药理研究方法学[M].第三版 .北京:人民卫生出版
社,2011.
[4] 郭金秀,王醊恩,刘孟安.中药胃肠舒对阿托品致胃肠动力障碍
小鼠胃肠运动的影响[J].时珍国医国药,2010,21(2):264-265.
[5] 朱 伟,张 丹,李 志,等.紫苏叶梗对小鼠胃排空和小肠推进
功能的影响[J].陕西中医,2011,32(8):1081-1083.
[6] 王瑞菊,赵文军,王 锦.胃肠动力障碍性疾病发病机制及中西
医治疗研究进展[J].亚太传统医药,2014,10(12):50-52.
[7] 李永渝,裴德恺,高静涛,等 .胃排空、肠推进实验方法的改进
——酚红定量测定法[J].中国药理学通报,1985(1):15-18.
[8] 姚 泰.生理学[M].第五版.北京:人民卫生出版社,2002.
[9] 李涯松,单兆伟,沈 洪,等 .和胃胶囊促胃动力作用的临床研
究[J].中国中西医结合杂志,2001,21(7):498.
[10] 杨凤江,郝 悦,李小丽,等.功能性消化不良患者血浆胃肠激
素水平的变化[J].武警医学,2003,14(10):614-615.
[11] 李 端,殷 明.药理学[M].北京:人民卫生出版社,2003.
[12] SINHA V B,GROVER A,SINGH S,et al. Overexpression of
ran gene from Lepidium latifolium L. (LlaRan) renders trans-
genic tobacco plants hypersensitive to cold stress [J].Mol Biol
Rep,2014,41(9):5989-5996.
[13] REYNOLDS L K,BOYER K E. Perennial pepperweed (Lepid-
ium latifolium):Properties of invaded tidal marshes[J].Invasive
Plant Science,2010,4(3):130.
(上接第 4792页)
表 3 不同混酸提取对维生素 C 测定结果的影响
(单位:mg/100 g)
处理
2%草酸-2%盐酸
2%草酸-8%磷酸
2%草酸-2%醋酸
2%盐酸-8%磷酸
2%盐酸-2%醋酸
2%醋酸-8%磷酸
猕猴桃
80.74±0.51c
83.69±0.10a
82.87±0.02b
54.33±0.05f
68.46±0.05e
70.96±0.08d
柿子椒
117.81±0.60c
120.03±0.10a
119.05±0.05b
100.70±0.13f
101.87±0.05e
113.81±0.45d
柿子椒
69.64±0.35c
72.11±0.44a
71.16±0.09b
56.26±0.08e
67.56±0.07d
68.40±0.51d
2,6-二氯酚靛酚法碘量法
猕猴桃
48.57±0.41c
50.42±0.12a
49.36±0.05b
32.60±0.04f
42.59±0.10e
44.57±0.16d
注:同列数据后字母不同表示不同酸的测定结果差异显著(P<
0.05)。
2.3 不同酸提取测定结果的相关性分析
除盐酸外, 混合酸的提取效果并不好于单酸。
相关性分析结果(表 4)表明,除 8%磷酸外,2%草
酸、2%盐酸和 2%醋酸之间相关性均达到显著水平,
即这 3种单酸的提取效果较为一致。 2%草酸-8%磷
酸的混合酸处理与 2%草酸和 2%盐酸显著相关,但
与 8%磷酸和 2%醋酸相关不显著。
3 结论与讨论
提取酸的种类和浓度均影响维生素 C 的测定
结果。 张淑民等[8]研究表明 3%醋酸处理效果最好,
本试验扩大了浓度梯度,并得出醋酸的较佳提取浓
度为 2%。 与醋酸相同, 草酸和盐酸均在较低浓度
(2%)时提取效果较好,磷酸则在高浓度(8%)时达
到最佳提取效果, 其中草酸和醋酸测定结果较高,
且显著相关,表明滴定法测定维生素 C 含量时可选
择草酸或醋酸进行提取。 用 2%草酸-10%盐酸的混
酸提取维生素 C,其测定结果与 2%草酸、4%醋酸
并无显著差异[6],本试验中混酸的测定结果以 2%草
酸-8%磷酸最高, 虽与 2%草酸和 2%盐酸显著相
关,但在数值上低于单酸,可见混酸提取效果并不
优于单酸。
参考文献:
[1] 宋秀丽,葛海龙.维生素 C 片中维生素 C 测定方法比较[J].太远
师范学院学报(自然科学版),2013,12(4):132-137.
[2] 石东里,姚志刚,申保忠.枣品种抗坏血酸含量的测定与比较[J].
滨州师专学报,2003,19(2):90-92.
[3] 李瑞国,郑 权.4 种常见蔬菜维生素 C 含量测定[J].西南农业
学报,2011,24(1):198-201.
[4] 万学闪,刘文革,阎志红,等.无籽西瓜果实不同部位维生素 C 和
番茄红素含量测定[J].中国瓜菜,2009(3):4-9.
[5] 孙 鹏,王 宁,孙先锋.两种方法对苹果中维生素 C 含量测定
的比较[J].湖北农业科学,2011,50(16):3386-3388.
[6] 武 文,詹秀环,宣亚文.碘量法测定蔬菜中维生素 C 的含量[J].
安徽农业科学,2009,37(21):9845-9846.
[7] 王秀奇,秦淑媛,高天慧,等.基础生物化学实验[M].北京:高等
教育出版社,2010.195-199.
[8] 张淑民,冯双庆.果品蔬菜中维生素 C 测定方法的研究[J].北京
农业大学学报,1983,9(2):51-59.
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
表 4 不同酸提取测定结果的相关系数
处理
8%磷酸
2%盐酸
2%醋酸
2%草酸-8%磷酸
2%草酸
0.924 75
0.075 3
0.998 22**
0.001 8
0.981 52*
0.018 5
0.979 31*
0.020 7
8%磷酸
0.941 38
0.058 6
0.973 96*
0.026 0
0.842 14
0.157 9
2%盐酸
0.985 34*
0.014 7
0.965 50*
0.034 5
2%醋酸
0.941 23
0.058 8
注:* 表示 0.05 水平上相关显著,** 表示 0.01 水平上相关显著。
参数
相关系数
P
相关系数
P
相关系数
P
相关系数
P
徐新娟等:不同酸提取对维生素 C 测定结果的影响 4801