全 文 ：!!#
张泽生，王玉本，黄! 闯，王! 翠
（天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 !#$%）
摘& 要：目的：研究襄荷乙醇提取物（’()*+,) -. /01203’* 40-2+ 5-6’，7/5）的体外抗氧化作用。方法：用 $8乙醇制备襄
荷提取物，以 9: 作为阳性对照，测定 7/5的总还原力及清除 ;<<= 自由基的能力，并用荧光化学发光法测定了 7/5
对活性氧自由基（> ?@ ·、·>=、=@>@）的清除能力。结果：7/5 的总还原力为 #AB% C BA#42 9: D 2，在实验浓度范围
内，对 ;<<=·、·>=、> ?@ ·、=@>@ 的清除率分别达到了 %8、E#8、%%8、%B8。结论：7/5具有明显的体外抗氧化活
性，但其抗氧化能力小于 9:。
关键词：襄荷，抗氧化活性，清除自由基，体外
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（F0+1G01 H10I’*60)J -. K,0’1,’ L F’,M1-N-2J，F0+1G01 !#$%，:M01+）
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中图分类号：FK@BAB& & & & 文献标识码：O& & & & 文 章 编 号：B@?!E（@B）B@?@P@?!
收稿日期：@Q?B@?@#
作者简介：张泽生（BQ$E?），男，博士（后），教授，博士生导师，研究方
向：天然产物的开发与应用。
& & 襄荷（ R01203’* 40-2+ 5-6’）又名阳荷（《黔志》）、
山姜、观音花（《浙江中药资源名录》），为姜科姜属多
年生草本植物，原产于中国南部，有特殊的芳香，驱
虫效果明显，病虫害很少，极少使用农药，是理想的
绿色食品。据李时珍《本草纲目》所载，襄荷具有活
血调经，镇咳祛痰，消肿解毒，消积健胃等药用功效，
是兼药理保健功能为一体的纯天然膳食纤维食品，
对便秘、糖尿病等有着特殊功效。近年研究表明我
国果蔬及中草药是非常有潜力的天然抗氧化资源，
对果蔬抗氧化性研究更是层出不穷。襄荷作为一种
绿色健康食品具有很大的开发价值。目前我国对襄
荷的研究多集中在栽培、组织培养、快速繁殖和食用
资源等方面，对其生物活性方面的研究甚少。本文
以乙醇为溶剂从襄荷中提取大部分生物活性物质，
并对其体外抗氧化作用进行研究，以期为襄荷在营
养保健及药用方面的开发应用提供理论依据。
9! 材料与方法
9:9! 材料与仪器
襄荷& 产自湖北十堰郧县，经鉴定为襄荷果实
部分；邻苯三酚、碳酸钠、碳酸氢钠、无水硫酸铜、磷
酸氢二钠、磷酸二氢钠、抗坏血酸等 & 均为分析纯；
;<<=·（BAB?二苯基?@?苦肼基自由基）& 购于德国
SNTU+ 公司；鲁米诺（! ? V401-WM)M+NMJX*+R0X’，QP8）
& 美国 V:5>K >5YVZ[:K产品。
H9 4010?B@# 紫外 D可见分光光度计 & 日本岛
津；荧光化学发光分析仪（SNT-*-6U+1 V6,’1) S\），恒
温水浴锅，植物粉碎机，电子天平等。
9:;! 实验方法
BA@AB& 襄荷醇提物的制备& 将新鲜的襄荷用清水洗
净，冷冻干燥后磨成细粉，用 $8乙醇以 B ]B$ 的料
液比在 P^浸提 @M，将粗提液抽滤，$^下减压浓
缩，冷冻干燥，得到深棕色粉状物质，即襄荷醇提物，
#^保存备用。
BA@A@& 总还原力的测定& 标准曲线的制作：参考 \’’
的方法［B］，将标准样品 9: 配制成浓度为 B$、!%A$、%$、
B$、!!2 D 4\的溶液，取 B4\ 样液于试管中，依次
加入 A@4-N D \的
@401后迅速冷却，加入 B8三氯乙酸（F:V）溶液
@A$4\，然后以 $* D 401 的转速离心 B401，取
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2010.12.098
!#$
!#$%上清液，依次加入 !#$% 蒸馏水，&$% ’&(的
三氯化铁溶液，充分混匀，静置 &’$)* 后，于 +’’*$
处测吸光度值，根据吸光值对 ,- 浓度做标准曲线。
样品总还原力的测定：按以上步骤测定 ./0 的
总还原力。结果以每克样品所含的 ,- 当量表示，记
为 $1 ,- 2 1。
&!34 5667·清除率的测定4 按照文献［!］的方法
测定 ./0对 5667·的清除率，以 ,- 做阳性对照。
&!84 ·97 清除率的测定［3］4 采用鲁米诺化学发
光法测定 ./0 及阳性对照 ,- 对 :;*<=* 型反应产生
的·97的清除作用。具体步骤：向发光池中依次加
入 !$$=> 2 % 的抗坏血酸溶液 8’!%，!$$=> 2 % 的
-?@98 溶液 +’!%，A7+B 的磷酸缓冲液 #’!%，不同浓
度的供试液 !’!%，最后加入 &’$$=> 2 % 的鲁米诺溶
液 &#!%，立即启动反应，记录每 CD 内发光强度的积
分，至出现峰值（-6&），以去离子水为空白测 -6’。清
除率按下式计算：
清除率（(）E（-6’F-6&）2 -6’ G &’’(
&!#4 9 F! ·清除率的测定
［8］4 采用邻苯三酚—鲁米
诺化学发光体系测定 ./0及阳性对照 ,- 对 9
F
! ·的
清除率。具体步骤：向发光池中分别加入不同浓度
的供试液 #’!%，C$$=> 2 %的邻苯三酚溶液 &’’!%，再
加入 #$$=> 2 % 的鲁米诺溶液 #’!%，立刻启动反应，
测定 CD 内的发光强度 -6&，以去离子水为空白测
-6’。清除率的计算同 &!8。
注：邻苯三酚溶液是由 &’$$=> 2 %的 7->溶液配
制，鲁米诺溶液是用 A7 E &’&C，’&$$=> 2 % 的
HI!-93FHI7-93 缓冲液配制。
&!C4 7!9! 清除率的测定
［#］4 采用 7!9! F鲁米诺F
碳酸缓冲液（ A7J#）体系测定 ./0 及阳性对照 ,-
对 7!9! 的清除率。具体步骤：向发光池中分别加入
不同浓度的供试液 #’!%，A7 J# 的碳酸盐缓冲液
&’’!%，&$$=> 2 % 鲁米诺溶液 #’!%，最后加入 ’&#(
的 7!9! 溶液 #’!%，立刻启动发光反应，测定 &!D 内
的发光强度 -6&，用去离子水做空白对照，测其 -6’。
清除率的计算同 &!8。
&!+4 数据处理 4 所有实验均做 3 次平行，结果用
.K-.%%处理。
! 结果与讨论
!#$ %&’得率
依 &!& 的方法制备 ./0，其得率为：&&C!( L
&&3(（* E 3）。
!#! %&’的总还原力
M;*［C］和 @)NNO?PIQ?［+］认为，抗氧化剂的还原力与
其抗氧化性之间存在联系，还原力越强，抗氧化性越
强。实验根据吸光度值大小对 ,- 做标准曲线，得到
线性回归方程 R E ’’’8&S T ’’+B3（0! E ’JJJ+），计
算得到 ./0的总还原力为（8’&+ L &’8）$1 ,- 2 1。
!#( 对 )**+·的清除效果
5667·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其
孤对电子在 #&+*$ 处有最大吸收，当抗氧化剂存在
时，孤对电子被配对，吸收减弱或消失，通过测定吸收
减弱的程度，可评价抗氧化剂清除 5667·的效果［B］。
./0和 ,- 对 5667·的清除效果如图 &所示。
图 &4 ./0和 ,- 对 5667·的清除作用
由图 & 可知，./0对 5667·的清除作用随着浓
度的增加而增强，当浓度为 &$1 2 $% 时，清除率达到
+’(，显示出较强的清除作用。同等浓度下，./0 对
5667·的清除作用均低于阳性对照 ,-，但随着浓度
的升高，清除效果逐渐接近 ,-。
!#, 对·-+的清除效果
实验分别测定了浓度为 3!#、+#、&#’、3’’、
C’’!1 2 $%的 ./0 和 ,- 对·97 的清除作用，结果
如图 ! 所示。
图 !4 ./0和 ,- 对·97的清除作用
由图 ! 可知，./0 对由 :;*<=* 反应产生的·97
具有很好的清除作用，在 3’U3’’!1 2 $% 的浓度范围
内，随着浓度升高，清除效果显著增强，呈现出很好
的量效关系；当浓度高于 3’’!1 2 $% 时，对·97 的
清除效果趋于稳定，达到 C8(。同等浓度下，./0对
·97的清除效果均低于 ,-。
!#. 对 - /! ·的清除效果
不同浓度的 ./0和 ,- 溶液加入到 9
F
! ·发生体
系后，对 9 F! ·的清除作用如图 3 所示。
图 34 ./0和 ,- 对 9
F
! ·的清除作用
由图 3 可知，./0 对 9 F! ·的清除能力随浓度增
大而增强，当浓度为 8$1 2 $%时，对 9 F! ·的清除率达
到 ++(，显示出较好的清除活性。同等浓度下，./0
对 9 F! ·的清除作用不及 ,-，但随着浓度增大，其清
除效果逐渐接近 ,-。
!#0 对 +!-! 的清除效果
（下转第 !BC 页）
!#$
对黄酮类化合物的得率影响最大；其次是浸提时间
和乙醇体积分数，温度和料液比影响较小。
根据表中 !值大小可确定各因素的最佳组合是
#$#%#&’()，即浸提温度 *+,、乙醇体积分数 -./、
浸提时间 ’0.1、23’ 和料液比 454.+，由于料液比对得
率影响较小，从经济效益的角度考虑，其他条件不
6 6 6表 -6 鸭血糯黄酮类化合物提取多因素正交实验结果
实验号 $ % & ( 总黄酮得率
（78 9 8）
4 4 4 4 4 4 *0)*
’ 4 ’ ’ ’ ’ .0*.
# 4 # # # # #0’)
) 4 ) ) ) ) #0’:
. ’ 4 ’ # ) #04*
* ’ ’ 4 ) # 40’;
- ’ # ) 4 ’ *0’-
: ’ ) # ’ 4 :0’+
; # 4 # ) ’ #0);
4+ # ’ ) # 4 .0’4
44 # # 4 ’ ) :0;-
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4# ) 4 ) ’ # -0-4
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4. ) # ’ ) 4 40-:
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!4 +0)** +0.’4 +0):. +0-*+ +0).’
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!# +0*)’ +0*.# +0-4) +0#.- +0.)4
!) +0*## +0)+- +0.*’ +0’)* +0*’*
< +04-* +0’)* +0’.+ +0.4- +04-)
变，选择料液比为 454++ 来进行实验验证，黄酮类化
合物的得率为 ;0.’78 9 8。
最后得出最优水平组合为：#$#%#&’(’。
! 结论
通过正交实验，以乙醇为提取溶剂，不仅经济、
安全，而且准确有效地优化了鸭血糯黄酮类化合物
的提取条件，得到鸭血糯黄酮类化合物的提取条件
为：浸提温度 *+,、乙醇体积分数 -./、浸提时间
’0.1、23为 ’ 和料液比 454++（8 9 7=），在此条件下黄
酮类化合物的得率为 ;0.’78 9 8。
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提取工艺［>］0中成药，’++)，’*（’）：
$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$
;*?;;0
（上接第 ’:# 页）
6 6 不同浓度的 (@<和 A% 溶液加入到 3’B’ 发生体
系后，对 3’B’ 的清除作用见图 )。
图 )6 (@<和 A% 对 3’B’ 的清除作用
图 ) 显示，(@<能够有效地清除 3’B’，且清除率
随浓度增大而增大，当浓度为 +0’.78 9 7= 时，清除率
达到 .#/；之后随浓度升高清除效果增长缓慢，当浓
度为 478 9 7= 时，清除率达到 -4/。同等浓度下，
(@<的清除效果低于 A%。
! 结论
襄荷醇提物具有较好的还原性及明显的清除自
由基作用。在实验浓度范围内，(@< 对 &CC3·、
·B3、B ?’ ·、3’B’ 的清除率分别达到了 -+/、*)/、
--/、-4/，显示出较强的体外抗氧化作用。虽然其
抗氧化能力低于同等浓度的 A%，但作为一种天然绿
色植物的抗氧化粗提物，可进一步对其中的抗氧化
活性物质进行分离纯化，以期获得更强的抗氧化活
性物质，为襄荷在保健营养及药用方面的进一步开
发利用提供基础。
参考文献
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2ODWI7IGNOS NUUDUU7DGM FK LOVPD DQMONLMU KOF7 UMD7 ^NOZ，WDNRDU，
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