全 文 ：文章编号:1001-4829(2010)01-0149-04
　　收稿日期:2009-04-14
　　基金项目:云南省自然科学基金(2008CD185);云南省科技创新强
省项目(2009AB003);科技部科技人员服务企业行动专项
(2009GJE30039);美国大自然保护协会中国项目部老君山项目部资
助项目 (AP/LIJANG/IAEP103106, AP/LIJANG/IAEP111006, AP/
KUNMING/KIB103107, AP/KUNMING/KIB111009);丽江市科技局资
助项目(LK2 00701)
作者简介:王泽清(1975-),男 ,主要从事食用菌育种研究及管
理工作 , E-mail:ynzhaoqi@qq.com。
粗腿羊肚菌菌丝栽培条件研究
王泽清 ,徐中志
(云南省农业科学院高山经济植物研究所 ,云南 丽江　674100)
摘　要:对产自云南丽江的粗腿羊肚菌(Morchelacrassipes)人工栽培时不同碳源 、不同氮源 、不同温度及不同酸碱度进行了初步研
究。结果表明:粗腿羊肚菌菌丝能利用多种碳 、氮源 ,其中以可溶性淀粉和麦芽糖作为最佳碳源 , 以硝酸钾或硝酸铵作为最佳氮
源;菌丝生长的最适 pH值为 6～ 7.5,最适温度为 18～ 25℃。
关键词:粗腿羊肚菌;菌丝;营养;培养条件
中图分类号:S646.7　　　文献标识码:A
StudyonCultivationConditionofMyceliaofMorchelacrassipes
WANGZe-qing, XUZhong-zhi
(InstituteofAlpineEconomicPlants, YunnanAcademyofAgriculturalSciences, YunnanLijiang674100, China)
Abstract:Thispapermainlystudiedtheefectsofoptimalcarbonsources, nitrogensources, temperatureandpHonmyceliagrowthofM.
crasipes, pickedupfromLijiangcounty, Yunnanprovince.TheresultshowsthatthemyceliaofM.crassipesmayabsorbalotsofcarbonand
nitrogensources.Buttheoptimalcarbonsourcewasstarchandmaltose, andtheoptimalnitrogensourcewasKNO3 andNH4NO3 , theopti-
malpHwas6-7.5, theoptimaltemperaturewas18-25℃.
Keywords:Morchelacrassipes;Mycelia;Nutrition;Cultivationcondition
　　粗腿羊肚菌 [ Morchelacrasipes(Vent.)Pers.]
隶属于子囊菌亚门(Ascomycotina),盘菌纲 (Disco-
mycetes), 盘菌目 (Pezizales), 羊肚菌科 (Morchel-
laceae),羊肚菌属(Morchela)[ 1] 。子囊果中等至大
型 ,菌盖近圆锥形至圆球形 , 长 4 ～ 8 cm, 宽 3 ～ 7
cm,表面有许多不规则形凹坑 ,凹坑大 、较深 ,淡黄
色至黄褐色 ,棱纹窄 、颜色较凹坑浅;柄长 5 ～ 13
cm,粗 3 ～ 8 cm,基部膨大 ,有凹沟 ,淡黄色。子囊果
味道鲜美 ,具有益肠胃 、助消化 、化痰理气 、补肾壮
阳 、提高人体免疫力等功效 。目前 ,国内外对羊肚菌
(M.esculenta)[ 2 ～ 13] 、黑脉羊肚菌 (M.angusticeps)
[ 14] 、尖顶羊肚菌(M.conica)[ 15 ～ 16]的栽培条件已进
行了广泛的研究 ,但对粗腿羊肚菌栽培条件的研究
较少 。为了开发利用这一宝贵资源 ,我们对其菌丝
的栽培条件进行了研究 ,现报道如下。
1　材料与方法
1.1　供试菌株
供试菌株由云南省农业科学院高山所赵琪先生
友情馈赠(菌株编号:M2001)。
1.2　母种培养基
改良 PDA培养基:马铃薯 200 g,葡萄糖 20 g,
蛋白胨 2 g,磷酸二氢钾 0.05g,硫酸镁 0.05g,磷酸
氢二钾 0.05g,硝酸钾 1.5g,琼脂 18g。加蒸馏水 1
000 mL, pH自然 , 121 ℃灭菌 20 min。
改良 CYM培养基:蛋白胨 2g,酵母浸膏 4 g,葡
萄糖 20g,硫酸镁 0.5g,磷酸氢二钾 0.48 g,磷酸二
氢钾 0.5 g,硝酸钾 1.5 g,琼脂 18 g。加蒸馏水 1
000 mL, pH自然 , 121 ℃灭菌 20 min。
1.3　方法
1.3.1　最适碳源试验　基础培养基:硝酸铵 1.8g,
MgSO4 0.5g,琼脂 18 g, VB1 10mg, H2O1000mL。
在基础培养基中每升分别加入 20 g可溶性淀
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2010年 23卷 1期
Vol.23　　No.1　　　　　　　　　　　　　　
西　南　农　业　学　报
SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences
粉 、麦芽糖 、蔗糖 、葡萄糖 、果糖 、乳糖 、甘露醇作为不
同碳源 ,将 pH值调到 6.0,装入 250 mL三角瓶 ,每
瓶装 200 mL,灭菌 20 min,以基础培养基为对照 ,制
成平板培养基 ,接种 (接种块用 6 mm的打孔器获
取)后置于 24 ℃恒温培养箱中进行暗培养 ,观察碳
源对粗腿羊肚菌菌丝生长的影响 ,接种后第 3天开
始测量菌丝生长速度 ,以后每 12 h测量 1次菌丝生
长速度 ,并做菌丝生长状况的记录。每个处理 5个
重复 ,取其平均值 ,作为数据分析的依据。
1.3.2　最适氮源试验　基础培养基:MgSO4 0.5 g,
K2HPO4 0.5 g,可溶性淀粉 20 g,琼脂 18 g, VB1 10
mg, H2O1000 mL。
以酵母膏 、蛋白胨 、牛肉膏 、硫酸铵 、硝酸铵 、硝
酸钾 、硝酸钠 、尿素作为不同氮源加入基础培养基
中 ,每升分别加 2 g,将 pH值调到 6.0,装入 250 mL
三角瓶 ,每瓶装 200 mL,灭菌 20 min,以基础培养基
为对照 。接种及观察步骤同 1.3.1。
1.3.3　碳氮比试验　培养基物质:酵母膏 2 g, Mg-
SO4 0.5 g, KH2PO4 2.5 g, K2HPO4 0.5 g,琼脂 20 g,
VB1 10 mg, H2O1000 mL。
以葡萄糖作碳源 ,硝酸铵为氮源 。葡萄糖每升
中加 20 g,调节硝酸铵的使用量 ,使培养基中碳素和
氮素物质的量比分别为 5∶1, 10∶1, 20∶1, 30∶1, 40∶1,
50∶1, 100∶1。接种及观察步骤同 1.3.1。
1.3.4　最适 pH值试验　培养基物质:葡萄糖 10
g,硝酸铵 2 g, MgSO4 0.5 g, KH2PO4 0.5 g, K2HPO4
0.5g;VB1 10mg, H2O1000mL。
用基础培养基配方配制 100 mL培养基 ,放入
200mL的三角瓶中 ,加温将琼脂条煮溶 ,补足蒸发
的水分后用盐酸与氢氧化钠调节酸碱度 ,使 pH值
分别为 4 , 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5,
10 , 10.5, 11.0,制成平板培养基 ,接种后其余操作同
碳源试验 。
1.3.5　最适温度试验　培养基:葡萄糖 20 g,蛋白
胨 2 g,麦粒 100 g, MgSO4 0.05 g, KH2PO4 0.05 g,
K2HPO4 0.05 g,琼脂 20g, VB1 10 mg, H2O1000 mL。
100 g麦粒加水 1000 mL沸腾后文火煮 30 ～ 45
min,用 3层纱布过滤 ,加上琼脂条搅拌溶化再过滤
定容 ,加入其它成分 ,装瓶 、灭菌 ,制成平板培养基 ,
接种后分别放入 4、10、15、18、20、22、25、28、30、33、
35 ℃的恒温培养进行暗培养 ,每个温度梯度控制在
±0.5℃,其余操作步骤同碳源试验。
1.4　菌丝生长速度的测定
菌丝平均生长速度(mm/12 h)=所测得的菌落
半径 /菌丝生长天数
2　结果与分析
2.1　不同碳源对菌丝生长的影响
粗腿羊肚菌的菌丝在不同碳源培养基和无碳源
培养基(对照)中都能生长 ,但生长速度存在明显差
异 (表 1)。菌丝在以可溶性淀粉和麦芽糖为碳源
的培养基中 ,菌丝 12 h生长长度为 5.7 mm,菌落完
整 ,菌丝浓密 、健壮 、气生菌丝多;其次是葡萄糖 、蔗
糖;果糖和乳糖再次之。在甘露醇和无碳源(对照)
培养基中 ,菌丝均生长较慢 ,并且菌丝稀少。由菌丝
生长速度和长势可知 ,可溶性淀粉是粗腿羊肚菌菌
丝生长的最好碳源 ,麦芽糖次之 ,葡萄糖 、蔗糖一般 ,
甘露醇不宜作羊肚菌菌丝生长的碳源。
2.2　不同氮源对菌丝生长的影响
粗腿羊肚菌的菌丝在不同氮源培养基及无氮源
(对照)培养基中都可以生长 ,说明粗腿羊肚菌菌丝
对氮源要求不严格 ,可利用多种氮源来维持生长 ,但
不同氮源存在显著差异 。在以硝酸铵为氮源的培养
基上菌丝生长速度最快 ,可达 10.5 mm/12 h,但菌
表 1　不同碳源对粗腿羊肚菌菌丝生长速度的影响
Table1　EfectofdiferentcarbonsourcesonthegrowthofM.crasipesmycelia
碳源
Csources
菌丝形态
Characters
菌丝色泽
Colors
菌丝密度
Density
平均生长速度(mm)
Averagerate
生长时间(h)
Growthhours
可溶性淀粉 Starch 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 灰白 +++ 5.7 72
麦芽糖 Maltose 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 灰白 +++ 5.6 72
蔗糖 Sucrose 菌落完整 ,贴生、气生菌丝较多 灰白 +++ 3.6 72
葡萄糖 Glucose 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 暗灰白 +++ 4.0 72
果糖 Fructose 菌落较完整 ,贴生 、气生菌丝少 灰白 ++ 3.1 72
D-乳糖 D-Lactose 菌落较完整 ,贴生 灰白 ++ 2.9 72
甘露醇Mannose 菌落不完整 ,贴生 灰白 + 2.5 72
CK 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 灰白 +++ 3.9 72
　　注:菌丝密度 “ +++”、“ ++”、“ +”分别表示密 、较密 、稀少 ,下同。
150 西　南　农　业　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　23卷
表 2　不同氮源对粗腿羊肚菌菌丝生长速度的影响
Table2　EffectofdiferentnitrogrnsourcesonthegrowthofM.crassipesmycelia
碳源
Csources
菌丝形态
Characters
菌丝色泽
Colors
菌丝密度
Density
平均生长速度(mm)
Averagerate
生长时间(h)
Growthhours
酵母膏 Yeastpowder 菌落完整 ,贴生、气生菌丝少 灰白 ++ 5.7 72
蛋白胨 Peptone 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 灰白 ++ 5.6 72
牛肉膏 Beef 菌落完整 ,贴生、气生菌丝较多 灰白 ++ 5.8 72
硫酸铵(NH4)2SO4 菌落不完整 ,贴生 、无气生菌丝 灰白 + 4.0 72
硝酸铵 NH4NO3 菌落较完整 ,贴生 、气生菌丝多 灰白 +++ 10.05 72
硝酸钾 KNO3 菌落较完整 ,贴生 灰白 +++ 8.30 72
硝酸钠 NaNO3 菌落不完整 ,贴生 灰白 ++ 6.5 72
尿素 Urea 菌落不完整 ,贴生 、无气生菌丝 灰白 + 0.5 72
CK 菌落完整 ,贴生、气生菌丝多 灰白 +++ 5.3 72
落较稀;其次为硝酸钾作氮源 ,菌丝生长速度虽然稍
慢(8.3 mm/12 h),但菌丝密度大 ,长势较好;再次
为酵母膏 、蛋白胨和牛肉膏 ,但这三者对粗腿羊肚菌
的菌丝生长影响不显著。由此可见 ,硝酸铵和硝酸
钾是粗腿羊肚菌菌丝生长的较好氮源 ,而尿素和硫
酸铵是较差的氮源(表 2)。
2.3　不同碳氮比对菌丝生长的影响
粗腿羊肚菌置于 7种碳氮比培养基中 ,比较不
同碳氮比对粗腿羊肚菌菌丝生长的影响 ,结果如图
1所示 ,尽管 7种碳氮比条件下均可以使粗腿羊肚
菌菌丝生长 ,但碳氮比为 20∶1 ～ 30∶1时 ,羊肚菌菌
丝生长量最快 ,分别为 10.6 mm/12 h和 11.5 mm/d。
所以 ,适宜粗腿羊肚菌菌丝生长的碳氮比为 20∶1 ～
30∶1,最佳碳氮比为 25∶1。
2.4　不同 pH值对菌丝生长的影响
图 2显示了菌丝在 15个 pH值条件下的生长
情况。在 pH值为 4 ～ 11时菌丝均能生长 , pH值为
6 ～ 7.5时菌丝生长速度最快。
图 1　不同碳氮比对粗腿羊肚菌菌丝生长速度的影响
Fig.1　Efectofdifferentratesofcarbonandnitrogrnonthegrowthof
M.crasipesmycelia
图 2　不同 PH对粗腿羊肚菌菌丝生长速度的影响
Fig.2　EfectofdifferentpHonthegrowthofM.crassipesmycelia
2.5　不同温度对羊肚菌菌丝生长的影响
在综合 PDA培养基上 ,采用 8种不同的培养温
度对粗腿羊肚菌菌丝进行培养 ,结果表明 ,粗腿羊肚
菌菌丝在 4 ～ 30 ℃都能生长 ,但生长速度和长势有
很大差异 。在 4 ～ 25 ℃菌丝生长速度 、长势随温度
图 3　不同温度对粗腿羊肚菌菌丝生长速度的影响
Fig.3　EfectofdiferenttemperatureonthegrowthofM.crasipes
mycelia
1511期 　　　　　　王泽清等:粗腿羊肚菌菌丝栽培条件研究
升高而加快;25 ～ 35 ℃菌丝生长速度 、长势随温度
升高而减弱 。其中 20 ～ 25℃时生长速度最快 ,长势
最好 ,菌丝的日均长速最快为 10.8 mm/12h。因此 ,
粗腿羊肚菌菌丝生长的最适温度为 20 ～ 25 ℃。
3　结　论
　　本试验结果表明:粗腿羊肚菌菌丝对营养元素
要求不具有专一性 ,当菌丝利用可溶性淀粉或麦芽
糖作为碳源 、硝酸钾或硝酸铵作氮源时 ,其生长速度
达到最大值;此外 ,粗腿羊肚菌菌丝对温度适应范围
较广 ,在 0 ～ 33℃均能生长 ,在 4 ～ 25℃菌丝随温度
升高而生长速度加快 ,但在 25 ～ 33℃则随温度升高
菌丝生长速度明显减慢;菌丝培养的适宜 pH值为 6
～ 7.5。
致　谢:云南省农业科学院高山所赵琪先生提供研
究菌种和初稿修改 ,特此致谢。
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(责任编辑　谢晓慧)
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