全 文 ：第 44 卷第 2 期
2015 年 2 月
应 用 化 工
Applied Chemical Industry
Vol． 44 No． 2
Feb． 2015
收稿日期:2014-11-14 修改稿日期:2014-12-29
基金项目:国家自然科学基金项目(81202492)
作者简介:梁春辉(1975 －)，女，陕西西安人，西安市儿童医院副主任药师，主要从事中药有效成分提取分离的研究。电
话:13379267263，E － mail:1140917672@ qq． com
高效液相色谱法分析青荚叶中豆甾醇的含量
梁春辉1，张寒2，李雪宁3
(1．西安市儿童医院，陕西 西安 710003;2．西安医学院 药学院，陕西 西安 710021;3．兴平 408 医院，陕西 咸阳 713100)
摘 要:采用反相高效液相色谱法(ＲP-HPLC)测定青荚叶中豆甾醇的含量，色谱柱为 Thermo C18柱(250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 ∶水(97∶ 3) ，流速 1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长 210 nm。结果表明，豆甾醇进
样量在 0． 216 ～ 2． 16 μg，其峰面积与浓度呈良好的线性关系(Ｒ2 = 0． 999 5) ，回收率为 97． 79%。方法专属性强，准
确可靠，可用于青荚叶中豆甾醇的含量测定。
关键词:青荚叶;豆甾醇;含量测定;反相高效液相色谱法
中图分类号:TQ 464． 2 文献标识码:A 文章编号:1671 － 3206(2015)02 － 0369 － 02
Determinating stigmasterol of Helwingia by HPLC
LIANG Chun-hui1，ZHANG Han2，LI Xue-ning3
(1． Children’s Hospital of Xi’an，Xi’an 710003，China;
2． Xi’an Medical University Scientific Ｒesearch Center and College of Pharmacy，Xi’an 710021，China;
3． 408 Hospital of Xingping，Xianyang 713100，China)
Abstract:Using reversed-phase high performance liquid chromatography(ＲP-HPLC)to determine the
content of stigmasterol in Helwingia，the chromatographic column was Thermo C18 column (250 mm ×
4． 6 mm，5 μm) ，the mobile phase of methanol∶ water (97 ∶ 3) ，flow rate of 1． 0 mL /min，the injection vol-
ume was 20 μL，the detection wavelength was 210 nm． Ｒesults showed that stigmasterol sample volume in
0． 216 ～ 2． 16 μg range，there was a good linear relationship between the peak area and concentration (Ｒ2
= 0． 999 5) ，the recovery rate was 97． 79% ． This method is specific，accurate and reliable，and can be
used for content determination of stigmasterol in Helwingia．
Key words:Helwingia;stigmasterol;content determination;HPLC
青荚叶［Helwingia japonica(Thunb) ］为山茱萸
科(Cornaceae)青荚叶属(Helwingia Willd)植物，又
名叶上花、叶上果，全株入药。其根味辛，微甘，性
平，能驱风除湿，祛瘀活血。可治胃痛、痢疾、便血、
子宫脱出等病症。其叶入药，可治小儿高烧，外用治
烧烫伤、毒咬伤，也有清热解毒、消肿止痛的功效。
其干燥茎髓入药，药名小通草，具有清热利尿、下乳
等作用［1］。
青荚叶的化学成分有 β-谷甾醇、棕榈酸甘油
酯、桂皮酸、6α-H-4-烯-3-酮-豆甾醇、6α-H-4-烯-3-
酮-豆甾醇［2］等。药理实验表明，β-谷甾醇、豆甾醇
具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作
用［3］。分析方法有薄层扫描法、气相色谱法、高效
液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-ELSD 法
等［4-5］。
本文采用 ＲP-HPLC测定青荚叶中豆甾醇含量，
豆甾醇与相邻组分分离度良好，方法的重复性、稳定
性、精密度、加样回收率均符合有关规定，可用于该
药材的质量控制。
1 实验部分
1． 1 材料与仪器
豆甾醇对照品(上海金穗生物科技有限公司，
批号:JS90510);甲醇，色谱纯;水为娃哈哈纯净水;
氯仿等均为分析纯;青荚叶，两批采自秦岭太白山，
两批购自西安万寿路药材批发市场，经西安医学院
生药教研室张寒老师鉴定为山茱萸科青荚叶。
Agilent1260 高效液相色谱仪，Thermo C18色谱
柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，紫外检测器;KQ-300B
超声波清洗器;GＲ-202 分析天平。
1． 2 溶液配制
1． 2． 1 豆甾醇对照品溶液的配制 精密称定豆甾
醇对照品 13． 5 mg，置 25 mL 容量瓶中，用甲醇 ∶ 氯
仿(1 ∶ 1)溶解并定容，制成 0． 54 mg /mL的豆甾醇对
DOI:10.16581/j.cnki.issn1671-3206.2015.02.011
应用化工 第 44 卷
照品溶液。
1． 2． 2 豆甾醇供试品溶液的配制 精密称取青荚
叶药材 3 份，置 500 mL圆底烧瓶中，加入 100 mL甲
醇 ∶氯仿(1 ∶ 1)，浸泡 1 h，65 ℃水浴回流提取 1 h，
倒出提取液，再加 100 mL 甲醇 ∶ 氯仿(1 ∶ 1) ，65 ℃
水浴回流提取 1 h。倒出提取液，合并两次提取液，
放冷，抽滤，旋转蒸发仪蒸干。加甲醇 ∶ 氯仿(1 ∶ 1)
溶解，移至 25 mL容量瓶中，用甲醇 ∶ 氯仿(1 ∶ 1)定
容，得供试品溶液。
1． 3 色谱条件
色谱柱为 Thermo C18柱(250 mm × 4． 6 mm，
5 μm)，流 动 相 为 甲 醇 ∶ 水 (97 ∶ 3) ，流 速
1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长 210 nm［6］，理
论塔板数为 2 000 以上，豆甾醇峰的分离度符合要
求。
2 结果与讨论
2． 1 青荚叶中豆甾醇含量测定
分别取对照品溶液和供试品溶液 5 mL，用
0． 45 μm有机微孔滤膜过滤至微量离心管中，精密
吸取 20 μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。结果
见图 1、图 2。由图 1、图 2 可知，供试品中豆甾醇与
对照品色谱峰保留时间一致，达到基线分离。
图 1 豆甾醇对照品液相色谱图
Fig． 1 Stigmasterol control liquid chromatogram
图 2 青荚叶供试品液相色谱图
Fig． 2 Helwingia sample liquid chromatogram
2． 2 线性关系考察
精密量取对照品溶液 0． 1，0． 2，0． 4，0． 8，
1． 0 mL至 5 mL容量瓶中，用甲醇 ∶氯仿(1 ∶ 1)定容，
摇匀。分别进样 20 μL测定。以对照品进样浓度为
横坐标(X) ，峰面积积分值为纵坐标(Y) ，分别绘制
标准曲线，得豆甾醇回归方程 y =6 252． 2x － 1． 176 7，
Ｒ2 = 0． 999 5(n = 5)。结果表明，豆甾醇进样量在
0． 216 ～ 2． 16 μg范围内，线性关系良好。
2． 3 重复性
精密量取豆甾醇对照品溶液 6 份，各 20 μL，分
别进样，测定峰面积，每份样品重复 3 次，结果豆甾
醇含量平均峰面积为 3 321． 37，ＲSD =1． 43%。
2． 4 加样回收率
精密称取青荚叶样品 3 份，精密量取 1 mL对照
品溶液，分别加入到 3 份样品中，进行提取制样，进
行测定，计算加样回收率。结果平均加样回收率为
97． 79%，ＲSD为 3． 107%。
2． 5 样品含量测定
取供试品溶液，用 0． 45 μL 微孔滤膜过滤后进
样测定，结果见表 1。
表 1 样品测定结果
Table 1 Samples for the determination of results
样品序号 豆甾醇含量 /(mg·g － 1)
购自万寿路样品 1 0． 742
购自万寿路样品 2 0． 751
采自太白山样品 3 0． 728
采自太白山样品 4 0． 719
2． 6 稳定性
精密量取豆甾醇对照品溶液，分别在 0，2，4，8，
12，24 h各进样 20 μL，分别测定它们的峰面积，测
得豆甾醇含量的 ＲSD = 0． 97%，表明供试品溶液在
24 h 内稳定。
2． 7 流动相选择
本实验曾采用甲醇-水比例 90 ∶ 10，96 ∶ 4，97 ∶ 3
为流动相，流速 1． 0 mL /min，结果表明以甲醇-水
(97 ∶ 3)为流动相时豆甾醇的峰形及出峰时间
(24 min)最佳。此条件下，方法的可靠性、准确性和
重复性好，适用于青荚叶药材中豆甾醇的含量测定。
3 结论
采用反相高效液相色谱法(ＲP-HPLC)测定青
荚叶中豆甾醇的含量，色谱柱为 Thermo C18 柱
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ，流动相为甲醇 ∶ 水(97
∶ 3) ，流速1． 0 mL /min，进样量 20 μL，检测波长
210 nm。结果表明，豆甾醇进样量在 0． 216 ～
2． 16 μg 范围内，其峰面积与浓度呈良好的线性关
系(Ｒ2 = 0． 999 5) ，回收率为 97． 79%。该法灵敏、
简单易行，专属性、重复性、回收率均符合要求。可
作为青荚叶中豆甾醇的含量测定方法。
(下转第 385 页)
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第 2 期 宋瑞娟等:一种含有 CF2S桥键的液晶单体化合物的合成
应是形成碳-碳键的最有效的手段之一。Fe、Ni、Cu、
Pd等过渡金属盐均能催化此反应。其中，高效的
Pd催化剂受到人们的广泛关注。经过比较二(三苯
基膦)二氯化钯和四(三苯基膦)钯的催化效果，最
终选定了二(三苯基膦)二氯化钯作为该反应的催
化剂。
表 1 格氏试剂偶联反应催化剂的选择
Table 1 The catalyst of Griganrd reagent
cross-coupling reaction
催化剂 产率 /%
二(三苯基膦)二氯化钯 72． 1
四(三苯基膦)钯 63． 4
2． 2 化合物(3)重结晶条件的选择
在粗品(3)的纯化过程中，尝试了乙醇、正庚烷
∶乙醇(体积比 1∶ 5)、石油醚∶乙醇(体积比 1∶ 3)、石
油醚∶乙醇(体积比 1∶ 4)作为重结晶溶剂，按 1 g 产
品∶ 1 mL溶剂比例重结晶 3 次后 GC 主含量见表 2。
经比较，石油醚∶乙醇(体积比 1∶ 4)作为重结晶溶剂
可获得最高的 GC主含量。故在本实验中选择石油
醚∶乙醇(体积比 1∶ 4)作为重结晶溶剂。
表 2 化合物(3)重结晶条件的选择
Table 2 The recrystallization conditions of
compound (3)
溶剂 GC主含量 /%
乙醇 96． 03
正庚烷∶乙醇(体积比 1∶ 5) 96． 82
石油醚∶乙醇(体积比 1∶ 3) 97． 44
石油醚∶乙醇(体积比 1∶ 4) 98． 21
3 结论
以 3，5-二氟溴苯为原料，经过与对戊基溴苯格
氏试剂偶联，再与二氟二溴甲烷作用，引入二氟溴甲
基，最后与 3，4-二氟苯硫酚发生亲核取代反应，得
到最终具有—CF2S—桥键的液晶分子 3，5-二氟-4-
［二氟(3，4-二氟苯硫基)甲基］-4’-戊基-1，1’-联
苯。三步总收率为 14． 0%。该分子的制备方法简
便，最终产物的液晶性能需进一步测定。
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