全 文 ：收稿日期: 2002- 06- 25
珍珠菜提取物抗肿瘤作用的初步研究
徐向毅　唐丽华　梁中琴　顾振纶
(苏州大学医学院　苏州中药研究所 , 江苏 苏州 215007)
摘　要　观察灌服珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )的抑制作用 ,用相同方法跟踪珍珠菜的抗肿瘤有效部位。用紫外
分光光度法 ,观察了珍珠菜提取物对环磷酰胺造成骨髓抑制的保护作用 ;采用 M TT法观察不同浓度珍珠菜提取物
对人白血病 HL-60及 K 562细胞的体外抑制作用。 结果表明珍珠菜浸膏 ( 4 000 mg /kg· d)、石油醚部位 ( 200 mg /
kg· d)、氯仿部位 ( 200 mg /kg· d)、乙酸乙酯 ( 200 mg /kg· d)部位、正丁醇部位 ( 200 mg /kg· d)及水溶性部位 ( 200
mg /kg· d)对小鼠肉瘤 ( S180 )抑瘤率分别为 52. 74% , 16. 51% , 28. 41% , 42. 17% , 48. 21% , 25. 24% ;小鼠灌服环磷
酰胺 ( 25 mg /kg· d)能引起骨髓抑制而使骨髓中 DNA含量下降 ,如同时灌服珍珠菜浸膏 ( 2 000 mg /kg· d)则可使
小鼠骨髓 DN A含量恢复至接近正常水平 ;珍珠菜总黄酮提取物 ( 210μg /m L )、乙酸乙酯部位 ( 180μg /mL )、正丁醇
部位 ( 210μg /mL )作用 48h对 HL-60细胞的抑制率分别为 35. 66% , 45. 85% , 42. 36% ; IC50分别为 92. 85, 164. 93,
402. 61μg /mL;对 K562细胞抑制率为 59. 94% , 70. 34% , 77. 98% ; IC50分别为 17. 64, 52. 53, 64. 70μg /mL。 因此 ,
珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180)有显著的抑制作用 ,且其抗肿瘤有效部位可能在乙酸乙酯及正丁醇部分。 珍珠菜
对环磷酰胺引起的骨髓抑制亦有一定的保护作用 ,对 HL-60及 K562细胞增殖有明显的抑制作用。
关键词　珍珠菜 ;小鼠肉瘤 ; HL-60; K562;环磷酰胺 ;骨髓抑制 ; M T T法
The Primary Studies on the Anti-tumor Effect of the Extracts of Lysmachia clethroides
Xu Xiangyi, Tang Lihua, Liang Zhongqin, Gu Zheng lun
( Depa rt ment o f Pha rmacolog y , Suzhou Univ er sity , School o f Medicine, Suzhou 215007)
Abstract　 To estimate the anti-tumo r activi ty of the ex t racts of Lysimachia clethroides Duby in
v ivo and vitro, and to find the ef fectiv e ex t racts of the w hole herb. Transplanted mouse tumo r
Sarcoma-180, model of bone marrow suppression caused by CTX and MT T assay w ere used. The
resul ts show ed that the inhibi tion rates of six ex t racts of Lysimachia clethroides Duby against
Sarcoma-180 w ere 52. 74% , 16. 51% , 28. 41% , 42. 17% , 48. 21% , 25. 24% respectiv ely. The
inhibi to ry ef fect of CTX on DN A content in bone mar row can be reduced by the ex t ract of w ho le
herb. The inhibi tion ra tes of th ree ex tracts of Lysimachia clethroides Duby against HL-60 and
K562 cell line were 5. 66% , 45. 85% , 42. 36% and 59. 94% , 70. 34% , 77. 98% respectiv ely , and
the IC50 w ere 92. 85, 164. 93, 402. 61μg /mL and 17. 64、 52. 53、 64. 70μg /m L respectiv ely. The
Lysimachia clethroides Duby has a certain anti-tumor o r ef fect and can reduce the to xici ty of
CTX.
Key words　 Lysimachia clethroides; Mouse tumo r S180 ; HL-60; K562; CTX; Bone mar row
suppression; M T T method
　 　珍 珠 菜 为报 春 花 科 植物 虎 尾 珍珠 菜
( Lysimachia clethroides Duby)的根或全草 ,在我国
东北、华北、华东、中南、西南及河北、陕西等地均有
分布 ,其味苦、辛 ,性平 ,具清热利湿 ,活血散瘀、解毒
消痈之功效 [1 ]。 文献报道珍珠菜中含多种黄酮甙与
皂甙 [2～ 4 ] ,其中从珍珠菜全草中得到的黄酮甙具有
良好的抗肿瘤作用 ,对大鼠 W256、 L1-皮下型、小鼠肉
瘤 S180、小鼠宫颈癌 ( U14 )、肝癌腹水型 ( HAC)转实
体 ( HSC)、艾氏腹水型 ( EAC)转实体 ( ESC) [5 ]以及
小鼠 L615白血病 [ 6]均有明显的抑制作用。作者观察
第 22卷第 2期
2003年 4月 　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源Chinese Wild Plant Resources　　　　　　　　　　　 Vo l. 22 No. 2April 2003
了珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )的影响及对人早
幼粒细胞白血病细胞 HL-60及人红白血病细胞
K562的体外抑制效应 ,以及其对小鼠肉瘤 ( S180 )的抑
制作用 ,并初步跟踪其抗肿瘤有效部位。
1　实验材料
1. 1　药物
珍珠菜粗浸膏 ( 1 g浸膏相当于生药 3 g ) 4℃保
存 ;珍珠菜提取物包括:珍珠菜石油醚部位、氯仿部
位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水溶性部位及总黄
酮提取物 ,以上药物均在苏州大学医学院药理学实
验室提取。
1. 2　瘤株
小鼠肉瘤 S180 ,引自中国科学院上海药物研究
所。
1. 3　细胞株
HL-60、 K562细胞由中国科学院上海细胞生物所
提供 ,用含 10%灭活新生小牛血清的 RPM I 1640
( GIBCO )培养基在 37℃ , 5% CO2条件下培养 ,取
对数生长期细胞用于实验。
1. 4　动物
昆明种小鼠 ,雌雄兼用 ,体重 18～ 22 g ,同批实
验使用的动物性别相同 ,由苏州大学医学院实验动
物中心提供 [动物合格证号: 苏动 (环 ) 98008苏动
(质 ) 98018]。
1. 5　试剂与仪器
环磷酰胺 ( CTX) ,南通制药厂 ,批号 010623-1;
RPM I M edium 1640, GIBCO;新生小牛血清 ,杭州
四季青 ; 其余试剂均为分析纯 ; CO2 培养箱 ,
N APCO;倒置显微镜 ;紫外分光光度计 , 752 C型 ,
上海第三分析仪器厂。　
2　实验方法
2. 1　样品制备
2. 1. 1　体内实验药物制备
珍珠菜粗浸膏事前用蒸馏水稀释成 50、 100、
200 mg /m L 3种浓度的混悬液。 珍珠菜石油醚部
位、氯仿部位 (自制 )用 0. 5% CMC-Na分别配成 10
、 20 mg /mL 2种浓度的混悬液 ,珍珠菜乙酸乙酯部
位、正丁醇部位、水溶性部位用蒸馏水分别配成 10、
20 mg /m L 2种浓度混悬液。
2. 1. 2　体外实验药物制备
将珍珠菜总黄酮提取物、乙酸乙酯部位及正丁
醇部位分别用蒸馏水配成浓度为 2. 1、 1. 8、
2. 1 mg /mL液 ,经 0. 2μm微孔滤膜过滤 , 4℃保存备
用。
2. 2　体内抑瘤实验
实验用同一性别小鼠 ,设对照组、珍珠菜浸膏
组、石油醚部位组、氯仿部位组、乙酸乙酯部位组、正
丁醇部位组、水溶性部位组、 CTX组、珍珠菜浸膏和
CTX合用组。取 S180小鼠腹水 , 1∶ 3稀释后接种于
小鼠右侧腋下 ,接种后随机分组 ,第 2天灌胃给药 ,
各组给药体积均为每 10 g体重 0. 2 mL,对照组与
予相同体积的蒸馏水。 给药 10 d后处死小鼠 ,取瘤
称重。按下式计算抑瘤率:抑瘤率 (% )= [ (对照组平
均瘤重 - 给药组平均瘤重 ) /对照组平均瘤重 ]×
100% 。 两药合用疗效是否增强 ,按 Burgi修正公
式 [7 ]: q= E ( A+ B ) / [EA+ ( 1- EA ) EB ] ,计算 q
值 ,其中 E ( A+ B )为两药合用疗效发生率 ; EA和
EB分别为 A药和 B药单用的疗效发生率 ; q= 0. 85
～ 1. 15,表于两药作用单纯相加 ; q> 1. 15,表示两药
有协同作用 ; q < 0. 85,表示两药作用拮抗。
2. 3　小鼠股骨骨髓 DNA含量测定 [8 ]及有核细胞
计数的方法
取小鼠右侧股骨 ,除净软组织 ,用 0. 005 mol /L
CaCl2 10 m L将合物骨髓冲入离心管中 ,置 4℃冰箱
30 min, 2 500 r /min离心 15 min,弃上清 ,将沉淀物
加 0. 2 mol /L HClO4 5 mL充分混匀 , 90℃加热
15 min,冷却过滤 ,滤液在 260 nm处测定紫外吸收
值 ( 1OD260= 50( g /mL双链 DNA) [ 9 ]。
另小鼠左侧股骨 ,除净软组织。 用 3%醋酸
10 mL冲出骨髓细胞 ,在血细胞计数盘上计数。所得
之数乘以 2. 5× 104即为一根股骨中的骨髓有核细
胞数。
2. 4　体外抑瘤实验方法
2. 4. 1　细胞培养
HL-60、 K562细胞用含 10%灭活新生小牛血清
的 RPM I 1640( GIBCO)培养基在 37℃ , 5% CO2条
件下培养 ,取对数生长期细胞用于实验。
2. 4. 2　细胞增殖抑制实验
采用 M T T法 , HL-60及 K562细胞用 RPM I
1640培养液稀释 ,调整密度为 2× 105个 /m L,接种
32　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 22卷
于 96孔板中 ,每孔 90μL,每孔加药 10μL,对照组每
孔加 10μl RPM I 1640培养液 ,对照组与药物组均设
6个平行孔。将 96孔板置 5% CO2培养箱 ( 37℃ )培
养 48 h,加入 5 mg /mL M TT 10μL,继续培养 4 h
后 ,用 10%酸化 SDS 100μL中止反应 ,用 DG-3022
酶联免疫测定仪于 570 nm处测定 OD值。接下式计
算抑制率: 抑制率 (% )= [ ( 1-用药组平均 OD值 /对
照组平均 OD值 ) ]× 100% 。
2. 5　统计方法
实验数据以 x 表示 ,两样本均数比较采用 t检
验。
3　实验结果
3. 1　体内抑瘤实验
珍珠菜粗浸膏、乙酸乙酯部位及正丁醇部位能
明显抑制小鼠 S180肉瘤的增殖 ,抑瘤率均在 30%以
上 ,与对照组相比 ,差异显著或非常显著 (P < 0. 05,
P < 0. 01)而石油醚部位、氯仿部位及水溶性部位的
抑瘤作用不明显。由此提示 ,珍珠菜的抗肿瘤有效部
位可能在乙酸乙酯及正丁醇部位。珍珠菜与 CTX
联合应用抑瘤作用并不相加 ,提示珍珠菜与 CTX
无协同作用。结果见表 1～ 表 3。
表 1　珍珠菜浸膏对小鼠肉瘤 ( S180 )的抑制作用
次数 组别 动物数 (只 ) 给药量 ( mg /kg· d) 平均瘤重 x 抑瘤率 %
小剂量组 8 1000 1. 12± 0. 43 31. 68*
第 中剂量组 8 2000 0. 94± 0. 40 42. 33* *
1 大剂量组 8 4000 0. 78± 0. 32 52. 44* *
次 CTX组 8 25 0. 72± 0. 44 55. 65* *
模型组 10 0 1. 63± 0. 56 -
小剂量组 8 1000 0. 99± 0. 53 36. 20*
第 中剂量组 8 2000 0. 87± 0. 41 44. 04* *
2 大剂量组 8 4000 0. 63± 0. 37 59. 10* *
次 CTX组 8 25 0. 59± 0. 45 62. 17* *
模型组 10 0 1. 55± 0. 36 -
小剂量组 8 1000 1. 02± 0. 62 33. 71
第 中剂量组 8 2000 0. 92± 0. 42 40. 07*
3 大剂量组 8 4000 0. 72± 0. 49 52. 74* *
次 CTX组 8 25 0. 60± 0. 27 61. 26* *
模型组 10 0 1. 54± 0. 61 -
　　注: * P < 0. 05,* * P < 0. 01,与对照组相比
表 2　珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )的抑制作用
组别 给药量
( mg /kg· d)
平均瘤重
x
抑瘤率
%
石油醚部位 400 1. 30± 0. 39 16. 51
200 1. 33± 0. 47 14. 39
氯仿部位 400 1. 11± 0. 49 28. 41
200 1. 04± 0. 33 33. 26*
乙酸乙酯部位 400 0. 90± 0. 41 42. 17*
200 1. 02± 0. 33 34. 32*
正丁醇部位 400 0. 80± 0. 29 48. 21* *
200 0. 87± 0. 20 43. 98*
水溶性部位 400 1. 16± 0. 51 25. 24
200 1. 35± 0. 48 13. 35
CTX组 25 0. 62± 0. 22 60. 08* *
模型组 0 1. 55± 0. 66 -
　　注: * P < 0. 05,* * P < 0. 01,与对照组相比 ;除模型组
动物数为 10只外 ,其余处理动物数均为 8只。
表 3　珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )的抑制作用
珍珠菜粗浸膏
2 000mg /kg
CTX
25mg /kg
珍珠菜粗浸
膏+ CTX q值
I R (% ) 42. 33 55. 65 52. 51 0. 71
44. 04 62. 17 57. 47 0. 73
40. 07 61. 26 58. 01 0. 76
平均 42. 15 59. 69 56. 00 0. 73
3. 2　珍珠菜提取物保护 CTX所致骨髓抑制实验
CTX可引起骨髓有核细胞和 DNA含量明显
减少 ,呈明显的骨髓抑制作用 ,而珍珠菜提取物则能
有效地保护 CTX所致的骨髓抑制作用 (表 4)。
33第 2期　　　　 　　　　　　　　　　徐向毅等: 珍珠菜提取物抗肿瘤作用的初步研究　　　　　　　　　　　　　　　　
　表 4　珍珠菜提取物对 CTX所致骨髓抑制的保护作用
组　　别 有核细胞数
(× 106 /股骨 )
DNA含量
(μg /股骨 )
正常对照组 12. 28± 2. 19 310. 58± 69. 77
肿瘤模型组 11. 93± 2. 64 285. 25± 46. 73
CTX组 7. 10± 1. 79* * # # 189. 83± 22. 45* * # #
珍珠菜+ CTX组 12. 03± 2. 47△△ 272. 75± 65. 42△△
　　注: * * P < 0. 01,与正常对照组比较 ;# # P < 0. 01,与
肿瘤模型组比较 ;△△ P < 0. 01,与 CTX组比较
3. 3　体外抑瘤实验
珍珠菜提取物在体外能明显抑制 HL-60及
K562细胞的增殖 ,其中又以 K562细胞较为敏感 ,
结果见表 5。
表 5　珍珠菜提取物对 HL-60、 K562细胞增殖的抑制率
药物 浓度μg /m L
抑制率 (% , ) x
HL-60 K562
总 210. 0 35. 66± 9. 60 59. 94± 2. 51
黄 105. 0 61. 39± 2. 88 71. 71± 4. 58
酮 50. 3 64. 87± 19. 53 66. 97± 24. 31
提 25. 1 54. 42± 8. 18 57. 95± 31. 88
取 12. 6 14. 75± 4. 32 48. 01± 1. 92
物 6. 3 - 32. 87± 3. 45
IC50 92. 88μg /mL 17. 64μg /m L
乙 180. 0 45. 85± 2. 20 70. 34± 1. 61
酸 90. 0 44. 77± 5. 25 70. 18± 3. 11
乙 45. 0 12. 87± 7. 37 46. 64± 8. 11
酯 22. 5 - 27. 22± 5. 40
部 11. 25 - 19. 57± 1. 42
位 5. 6 - 14. 53± 3. 64
IC50 164. 93μg /m L 52. 53μg /m L
正 210. 0 42. 36± 3. 32 77. 98± 1. 42
丁 105. 0 30. 03± 6. 41 57. 18± 19. 32
醇 50. 3 24. 93± 10. 51 46. 63± 4. 28
部 25. 1 - 19. 27± 5. 47
位 12. 6 - 21. 11± 2. 22
6. 3 - 18. 35± 3. 85
IC50 402. 61μg /m L 64. 70μg /m L
4　讨论
珍珠菜提取物对小鼠肉瘤 ( S180 )具有明显的体
内抑瘤作用 ,且 3次实验重复性好 ,抑瘤率均在
30%以上 ,与对照组相比 ,差异显著或非常显著
( P < 0. 05, P < 0. 01)。 通过相同实验方法将珍珠菜
提取物分成 5个部位给药 ,初步确定珍珠菜的抗肿
瘤有效部位可能为乙酸乙酯及正丁醇部位。 珍珠菜
提取物与 CTX合用 ,并不能增强 CTX的抑瘤作
用 ,但对 CTX所致的骨髓抑制有一定的保护作用。
用 M TT法测得珍珠菜提取物对 HL-60及 K562
细胞具有明显的增殖抑制作用 ,在相同浓度下 , K562
细胞更为敏感。如排除实验误差等因素 ,其抑瘤效果
呈剂量依赖趋势。
诱导肿瘤细胞凋亡研究是目前抗肿瘤药物研究
的热点 ,多种抗肿瘤药物 ,包括临床上常用的肿瘤化
学药物在一定剂量范围内都可引起的肿瘤细胞凋
亡。另外 ,研究药物对肿瘤细胞端粒酶、 DNA拓扑异
构酶的影响以及药物对肿瘤细胞周期的调控作用 ,
亦是寻找有效抗肿瘤药物的方法 ,而珍珠菜提取物
的抗肿瘤作用具体机制有待于进一步研究。
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34　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 22卷