全 文 ：收稿日期:2006 - 01 - 03基金项目:苏州市科技厅资助项目 (EA132031);苏州大学青年教师研究基金(Q3132532)。
作者简介:游本刚(1977 -), 男 ,江苏人 , 讲师通讯作者:唐丽华(1952 -), 女 , 山东人 , 副教授 , 硕士生导师 ,从事药物新剂型研究。 E -m ail: tang lihua@
suda. edu. cn
紫外分光光度法测定珍珠菜中总黄酮含量
游本刚 ,唐丽华* ,刘　扬
(苏州大学药学院 , 江苏 苏州 215007)
摘　要　目的:建立珍珠菜提取液中总黄酮的含量测定方法。方法:采用紫外分光光度法 ,通过紫外可见扫描确定
最大吸收波长 , 以芦丁为对照品制定标准曲线 , 并进行样品溶液稳定性试验和方法回收率与精密度试验。结果:最
大吸收波长为 405 nm ,标准曲线线性范围为 4. 014 ～ 32. 112μg /m L, r=0. 999 9。样品液经 A l3+络合后在 0. 5 ～ 2. 5
h内稳定性较好 , 平均加样回收率为 102. 00%±1. 64%, RSD为 1.61%, 日内 、日间精密度 RSD小于 2%, 符合要求。
结论:该方法简单方便 、准确可靠 ,可以用来测定珍珠菜中总黄酮的含量。
关键词　珍珠菜;总黄酮;紫外分光光度法
中图分类号:R248. 1 　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006 -9690(2007)01 - 0043 -03
Determ ination of Total Flavones in Lysimach ia clethroide
Duby by UV Spectrophotom etry
You Bengang, Tang Lihua, Liu Yang
(School of Pharmaceu tica l Science, SooChow University, Suzhou 215007, Ch ina)
Abstract　Objec tive:To establish the me thod for in vitro assay of to ta l flavones in Lysimach ia clethroide
Duby. M ethods:UV spec tropho tometry me thod w as developed to de term ine the content o f to tal flavones.
M ax w ave leng th w as fixed on by vio let - visib le light scan, and standard curve w as e stab lished using ru tin
as a standard compound. Furthermore, stability of samp les, recovery ofme thod and precision of instrumen t
w ere all investigated. Results:The max w ave leng th w as 405 nm , and the linear range o f standard curve
w as 4. 014 - 32. 112μg /mL, r=0. 999 9. Samples w ere stab le in 0. 5 - 2. 5 h after reacted w ith A l3+.
The average recove ry w as 102. 00% ±1. 64%,RSD 1. 61%, and all o fRSD s o f precision w ere less than
2%. Conc lusion:Theme thod is simple, effective and feasib le, and can be used to de term ine the conten t
of tota l flavones in Lysimachia clethroide Duby.
Key words　Lysimachia clethroide Duby;tota l flavones;UV spectropho tometry
　　珍珠菜 (Lysimach ia clethroide Duby)为报春花科
植物虎尾珍珠菜的根或全草 ,味苦 、辛 ,性平 ,具清热
利湿 ,活血散淤 ,解毒消痈之功效 [ 1] 。文献报道珍
珠菜中含有多种黄酮与皂苷 ,其中从全草得到的黄
酮苷具有良好的抗肿瘤作用 [ 2 - 4] 。基于有人曾成功
从珍珠菜中分离得到芦丁等黄酮类成分[ 5] ,本文以
芦丁作为对照品 ,利用黄酮类化合物的 3, 5羟基与
A l
3+生成络合物 , 在可见光区有最大吸收的特
点[ 6 -7] ,采用紫外分光光度法测定珍珠菜中总黄酮
的含量 ,并对方法学进行了研究。
1　仪器与试剂
UV -2401PC紫外 -可见分光光度计 (日本岛
津制作所 ),电子分析天平 (S tarorious), DZ - 900回
转振荡器 (太仓市实验设备厂),调温电热器 (上海
电理仪器厂 ),旋转蒸发器 (上海申生科技有限公
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第 26卷第 1期
2007年 2月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源Ch ineseW ild P lant R esources　　　　　　　　　　 　Vo.l 26 No. 1Feb. 2007
司 );芦丁标准品 (中国药品生物制品鉴定所), 95%
乙醇(分析纯 ,上海振兴化工一厂 ),无水三氯化铝
(分析纯 ,上海金山区兴塔美兴化工厂 ),珍珠菜药
材 (苏州雷允上药材采购站 )。
2　实验方法
2. 1　样品溶液的制备
采用加热回流法 ,取珍珠菜经粉碎的药材适量 ,
依次加入加 12、10、8倍量的 80%乙醇 ,加热回流提
取 3次 ,每次 1. 5 h,合并提取液 ,过滤 。滤液减压回
收溶剂并浓缩至 2mL /g药材 ,浓缩液加 2倍量水稀
释 ,静置 、抽滤除去不溶性物质 ,滤液再次浓缩后即
得珍珠菜样品溶液 ,冷藏保存备用。
2. 2　对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品 20. 07mg于 100 mL容量
瓶中 ,以 95%乙醇溶解 ,定容 ,配成 200. 7μg /mL的
标准品溶液 ,冷藏保存备用 。
2. 3　最大吸收波长的确定
分别取 2份对照品溶液适量 ,稀释至一定浓度 ,
一份加 10%A lC l3溶液 1 mL,另一份不加 ,均以 95%
乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,在 200 ～ 600 nm波长范围内
进行紫外可见扫描 ,结果见图 1;分别取珍珠菜提取
液两份 ,同上操作进行紫外可见扫描 ,结果见图 2。
图 1　对照品芦丁的紫外可见扫描图
图 2　珍珠菜提取液的紫外可见扫描图
2. 4　标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 0. 5, 1. 0, 1. 5, 2. 0 , 2. 5,
3. 0, 3. 5, 4. 0mL于 25mL容量瓶中 ,分别加入 10%
A lC l3溶液 1mL,以 95%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,于
紫外分光光度计下测定其吸收度 ,以吸收度 A对浓
度 C作最小二乘法回归 ,得标准曲线方程为:C =
38. 672A+0. 075, r=0. 999 9(n =5),线性范围为
4. 014 ～ 32. 112 μg /mL。
2. 5　样品溶液稳定性试验
方法一:取一定量的样品液于 25mL容量瓶中 ,
加 1mL 10% A lC l3 ,以 95%乙醇定容至刻度 , 30m in
后开始计时 , 分别在 0、2、 4、6、8、12 h测定其吸收
度 ,计算 RSD值;方法二:将同一样品液分别在 0、2、
4、6、8、12 h取一定量于 25 mL容量瓶中 ,加 1 mL
10% A lC l3 ,以 95%乙醇定容至刻度 , 30 m in后测定
其吸收度并计算 RSD值 ,结果见表 1。
表 1　样品溶液稳定性试验
时间 /h 0 2 4 6 8 12 RSD /%
方法一 0. 762 0. 776 0. 786 0. 796 0. 809 0. 831 3. 09
方法二 0. 732 0. 723 0. 729 0. 729 0. 727 0. 730 0. 42
　　实验发现 ,在对照品或样品溶液中加入 A lC l3
后 ,约 30 m in后溶液的吸收度值才趋于恒定 ,这可
能是由于黄酮与 A lC l3的充分络合需要一定的时
间。由上表可知 ,样品液中加入 A lC l3后 ,随着时间
的延长稳定性有所降低 ,不利于总黄酮的含量测定。
进一步实验发现 ,加入 A lC l3后 0. 5 ～ 2. 5 h内样品液
稳定性较好 ,所以本实验中进行珍珠菜提取液的总黄
酮含量测定时 ,均在络合后 0. 5 ～ 2. 5 h内完成。
2. 6　方法回收率与精密度试验
2. 6. 1　加样回收率试验
表 2　加样回收率试验
序号
样品总
黄酮
量 /m g
加入
对照品
量 /m g
测得
量 /mg
回收
率 /%
平均回收率
/%
RSD
/%
1 10. 35 8. 33 8. 53 102. 40
2 10. 35 8. 33 8. 36 100. 36 101. 72±1. 18 1. 16
3 10. 35 8. 33 8. 53 102. 40
4 10. 35 10. 41 10. 66 102. 40
5 10. 35 10. 41 10. 83 104. 03 102. 37±1. 68 1. 64
6 10. 35 10. 41 10. 48 100. 67
7 10. 35 12. 50 13. 01 104. 08
8 10. 35 12. 50 12. 46 99. 68 101. 76±2. 21 2. 17
9 10. 35 12. 50 12. 69 101. 52
　　精密称取已知总黄酮含量的珍珠菜药材适量 ,
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 26卷
分别加入 80%、100%和 120%总黄酮量的对照品溶
液 ,按 2. 1节方法操作 ,测定提取液中总黄酮浓度并
计算回收率 ,结果见表 2。
　　由表 2可知 , 平均加样回收率为 102. 00% ±
1.64%, RSD为 1. 61%,符合规定 ,表明此方法可用
于样品液中总黄酮的含量测定 。
2. 6. 2　精密度试验
分别取低 (4. 22 μg /mL)、中 (16. 88μg /mL)、
高 (33. 76 μg /mL)3个浓度的芦丁对照品溶液 , 1
天内重复测定 5次 ,计算日内相对标准偏差;每天测
定 1次 ,连续测定 5天 ,计算日间相对标准偏差 ,结
果见表 3。
表 3　仪器精密度试验
浓度
/m L- 1
日内
平均浓度
/mg m L- 1 RSD /%
日间
平均浓度
/mg mL - 1 RSD /%
4. 22 4. 14±0. 05 1. 22 4. 28±0. 05 1. 18
16. 88 16. 94±0. 04 0. 23 17. 18±0. 18 1. 04
33. 76 33. 82±0. 02 0. 06 34. 45±0. 43 1. 26
　　由上表可见 ,日内 、日间精密度均符合要求 。
2. 7　含量测定结果
按 2. 1节方法 ,制备 3批珍珠菜样品溶液 ,分别
取适量样品溶液于 25mL容量瓶中 ,加入 10%A lC l3
溶液 1mL,以 95%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,于紫外分
光光度计下测定其吸收度 。将测定结果代入 2. 4节
下标准曲线方程 ,计算出总黄酮平均含量为 9. 07
mg /g。
表 4　珍珠菜总黄酮含量测定结果
批次 总黄酮含量 /mg g - 1 平均含量 /m g /g
1 9. 024
2 9. 116 9. 074
3 9. 082
3　讨　论
自然界约有 3 000种黄酮类化合物 ,其经典概
念是指基本母核为 2 -苯基色原酮的一类化合物 ,
大部分与糖结合成苷 。 UV是鉴定黄酮类化合物的
一种重要技术 ,目前被广泛应用来测定中药中的总
黄酮 。黄酮类化合物多具有 3, 4, 5羟基 ,可与许多
金属试剂反应生成有色络合物 ,根据此特点可以利
用 UV来测定总黄酮的含量 [ 6 -9] ,但也有不加络合
剂直接测定的[ 10] 。文献报道[ 7, 8]珍珠菜中的总黄
酮大多含有 3, 5羟基 ,可以与 A l3 +生成络合物。由
图 1、2可见 ,芦丁与珍珠菜总黄酮提取液在 370 nm
左右均有最大吸收 ,络合后在 400 nm左右均有最大
吸收 ,为避免非黄酮类成分在 370 nm波长下对总黄
酮吸收产生干扰 ,所以我们选择采用络合显色法测
定珍珠菜提取液中总黄酮的含量 。
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第 1期　　　　　　　　　　　　　 　游本刚 ,等:紫外分光光度法测定珍珠菜中总黄酮含量