全 文 ：湖北中医杂志 2015 年 10 月第 37 卷第 10 期
Hubei Journal of TCM OCT． 2015． Vol． 37，No． 10
冷水七皂苷提取工艺研究
徐天玲1，张建超1，袁林2，吴峰政3
(1．湖北中医药大学，湖北 武汉 430065;2．风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室，湖北 恩施 445000;3．武汉理
工大学，湖北 武汉 430070)
关键词:冷水七;三萜皂苷;提取工艺
中图分类号:Ｒ283 文献标识码:A 文章编号 1000 － 0704(2015)10 － 0073 － 02
土家族药冷水七(Impatiens pritzellii Hook． f． var． hupehensis
Hook． f．)为凤仙花科凤仙花属植物，是鄂西土家族常用民族药，
药用部位为冷水七根茎，其性味辛、甘、凉，毒性小，具有祛风除
湿，散瘀消肿、镇痛止血，清热解毒之功效。用于风湿疼痛、四肢
麻木、关节肿大、急性脘腹疼痛、食积腹胀泄泻、月经不调、经来
腹痛、肠炎痢疾等症［1 － 3］。由于其对多种疾病都表现出良好的
治疗效果，因此，有关土家族药冷水七的研究已经受到科研工作
者的关注并做了大量的工作，并通过化学成分研究确定该活性
部位主要含有三萜皂苷类化合物［4 － 5］。因此冷水七三萜皂苷类
成分的提取工艺研究十分必要。本文考察不同浓度的乙醇，不
同的提取时间，不同的提取温度，提取得到冷水七皂苷的量，以
此确定最佳提取条件，为冷水七的开发利用提供依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
日本岛津 CS － 930 双波长薄层扫描仪、DHE － 9070A 型电
热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);Ｒ － 1001N型旋转
蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司);SHB －Ⅲ型循环水式多用
真空泵(郑州长城科工贸有限公司);ZF － 6 型三用紫外线分析
仪(上海嘉鹏科技有限公司)，平头进样针(SCANNEＲ3 点样用，
宁波市镇海玻璃仪器厂)，预制硅胶 G 薄层板(青岛海浪硅胶干
燥剂厂)，其他试剂为分析纯。
1． 2 试药
实验用冷水七药材(购于湖北民族学院附属医院，由湖北中
医药大学卢金清教授鉴定为凤仙花科植物冷水七 Impatiens prit-
zellii Hook． f． var． hupehen sis Hook． f． 的根茎)。地榆皂苷Ⅰ(批
号:101209，购于成都瑞芬思生物科技有限公司)。
1． 3 色谱条件
展开剂 乙酸乙酯 －甲酸 －水(7:2:2);显色剂:10%硫酸乙
醇;测定波长 370nm，狭缝 0． 4mm × 0． 4mm;灵敏度中等。
2 方法与结果
2． 1 供试品溶液的制备及测定
取 5g冷水七粉末(40 目)，精密称定，置 200mL 的烧瓶中，
加 50%乙醇溶液 50mL加热回流提取 3 次，每次 1h，滤过，滤液
回收乙醇至粘稠状，加入 20mL水混溶，用 20mL的正丁醇提取 3
次，分取正丁醇层，蒸干，残渣加醋酸乙酯使溶解，定量转移至
5mL量瓶中，并用醋酸乙酯稀释到刻度，摇匀，即得样品溶液。
精密吸取样品溶液 5μL，与对照品溶液 5μL 点于同一硅胶 G 薄
层板上，以醋酸乙酯 －甲酸 －水(7:2:2)为展开剂，展开，晾干，
喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点清晰。显色后立
即用相同大小玻璃板覆盖并封边，扫描，在色谱条件下测定。
2． 2 标准曲线的绘制
精密称取地榆皂苷Ⅰ对照品 5． 12mg，加醋酸乙酯制成每
1 mL含 0． 51mg对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液 2，4，6，
8，10μL分别点于同一硅胶 G薄层板上，依上述条件展开，显色，
依法扫描测定各斑点积分值。以点样量为横坐标，以测得的峰
面积为纵坐标，得地榆皂苷回归方程为 Y = 6597X + 57，r = 0．
9995;表明本品在 1． 02μg － 5． 10μg间线性关系良好。
2． 3 精密度实验
分别对仪器精密度、板内精密度、板问精密度进行了考察。
结果如下。
2． 3． 1 仪器精密度:精密吸取对照品溶液 5μL，照上述色谱条
件操作，重复扫描 5 次，分别记录峰面积积分值，ＲSD为3． 52%。
结果表明仪器精密度良好。
2． 3． 2 板内精密度:精密吸取对照品溶液 5μL，分别在同一薄
层板上平行点 5 个点，照上述色谱条件测定，分别记录峰面积积
分值，ＲSD分别为 2． 97%。结果表明板内精密度良好。
2． 3． 3 板间精密度:将对照品溶液 5μL 点于 5 块不同薄层板
上，照上述色谱条件测定，分别记录峰面积积分值，ＲSD 分别为
3． 61%。结果表明板间精密度良好。
2． 4 稳定性实验
以同一薄层板的同一斑点，依法每隔 30min 测定 1 次。结
—37—
湖北中医杂志 2015 年 10 月第 37 卷第 10 期
果表明，样品的 5 个斑点在 2． 5h内稳定，ＲSD均小于 5%。结果
表明该操作在 2． 5h内完成，稳定性较好。
2． 5 重复性实验
取同批样品 5 份，按含量测定项下方法操作，样品的 5 个斑
点的含量 ＲSD均小于 5% 。
2． 6 回收率实验
取 5g冷水七粉末(40 目)，精密称定，置 200mL 的烧瓶中，
分别精密加入一定量对照品，混匀，照“供试品溶液”项下制备，
精密吸取对照品溶液 5μL 与供试品溶液 5μL 点于同一薄层板
上，照上述色谱条件测定，结果见表 1。
表 1 回收率实验结果
试验号
称样量
(g)
添加地榆
皂苷Ⅰ量
(mg)
测得地榆
皂苷Ⅰ量
(mg)
回收率
(%)
平均回
收率(%)
ＲSD(%)
1 5． 1421 3． 42 3． 28 95． 9
2 5． 3162 3． 23 3． 08 95． 4
3 4． 8564 3． 53 362 102． 5
4 5． 3127 3． 27 3． 16 96． 6
5 4． 9134 3． 38 3． 32 98． 2
97． 7 2． 94
2． 7 样品测定
取 3 批药材(批号:131201，140106，140201)，按供试品制备
方法项下，制备 3 份样品，精密吸取供试品溶液 5μL，对照品溶
液 5μL分别点于同一薄层板上，依法展开，显色，扫描测定，结果
见表 2。
表 2 样品测定结果
含量(mg /g)
斑点
1 2 3
1 0． 462 0． 472 0． 482
2 0． 574 0． 539 0． 607
3 0． 764 0． 721 0． 792
4 0． 902 0． 882 0． 935
5 0． 490 0． 468 0． 523
3 提取工艺过程分析
3． 1 乙醇浓度的选择
分别精密称取 5． 0g 冷水七粉末(40 目)4 份置 200mL 烧瓶
中，分别加 30%、50%、60%、95%的乙醇溶液 50mL，80℃水浴中
回流提取 1h，依 2． 1 供试品制备方法处理，扫描测定，50%的乙
醇提取得到的三萜皂苷含量最高。
3． 2 提取时间的选择
分别精密称取 5． 0g 冷水七粉末(40 目)4 份置 200mL 烧瓶
中，加入 50%的乙醇 50mL，分别提取 0． 5h、1h、1． 5h、2h。实验结
果表明，提取 1h三萜皂苷可以提取完全。
3． 3 提取温度的选择
分别精密称取 5． 0g 冷水七粉末(40 目)3 份置 200mL 烧瓶
中，加入 50%的乙醇 50mL，在 60℃，80℃，沸水浴中分别提取
1h。实验结果表明，80℃提取三萜皂苷含量最高。
4 讨论
(1)曾采用高效液相色谱法，检测波长为 205nm，甲醇和乙
腈作流动相梯度洗脱，但末端吸收干扰较多。故采用薄层色谱
法分离后显色再进行定量分析，以确定最佳工艺提取条件。
(2)薄层层析条件的选择:曾用氯仿 －甲醇 －正丁醇 －醋酸
乙酯(3:4:2:8)，乙酸乙酯 －甲酸 －水 = (7:3:3)为展开剂，但
斑点不能完全分开，且斑点拖尾严重，展开结果不是很理想，后
改用醋酸乙酯 －甲酸 －水 = (7:2:2)为展开剂，斑点清晰，分离
效果好。
在铺硅胶 G板时，应使用浓度为 0． 2% CMC － Na为粘合剂，
加热至显色的时间也要严格控制，CMC － Na 浓度过高或加热显
色时间过长，薄层板易碳化，产生背景污染。
(3)薄层扫描条件的选择:通过对斑点的光谱扫描(200 －
700nm)，最大吸收为 370nm，因此确定薄层扫描波长为 370 nm。
(4)冷水七中三萜皂苷的最佳提取条件为:50%浓度的乙醇
在 80℃水浴中提取 3 次，每次 1h，冷水七中三萜皂苷类成分提取
率高。
参考文献:
［1］ 阳辉，刘万红．冷水七总皂苷对小鼠疼痛的影响［J］．湖北民族学院
学报(医学版)，2009，26(4) :23 － 24．
［2］ 文德鉴，艾明仙，李德清．土家族药冷水七抗炎作用有效部位的筛
选研究［J］．湖北民族学院学报(医学版)，2007，24(2) :13 － 14．
［3］ 周雪峰，唐斓 ，张鹏． 冷水七单体皂苷抗炎镇痛和免疫活性研究
［J］．中药药理与临床，2008;24(1):27 － 28．
［4］ 赵晓亚，孙汉董，吴继洲．冷水七根茎的化学成分研究［J］． 中国中
药杂志，2005，30(8):584 － 585．
［5］ 中国药典一部［S］． 2010．
(收稿日期:2015 －05 －28 编辑:任婕)
—47—