全 文 ：图 2　JTBSD对 STZ所致 DM大鼠的肾脏细胞因子 TGF-β 1 的影响
(免疫组化染色 , 100×)
3　讨论
BUN和 SCr都是机体蛋白质代谢产物 , 它们的浓度取决于
氮的分解和肾的排泄功能 ,在摄入食物及体内分解代谢比较稳定
的情况下 , 其浓度的多少取决于肾的排泄能力。因此 , 血清肌酐
和尿素氮浓度在一定程度上可反映肾小球的滤过功能 [ 2] 。 DN
时 , 原有的肾脏功能遭到破坏 , BUN、SCr和 CCr上升 , 双肾滤过
率逐渐下降。 TGF-β 是一种多向性 、多效性和多功能的细胞因
子。在哺乳动物中存在三种形式的 TGF-β , 分别为 TGF-β 1、
TGF-β 2、TGF-β 3 , 其中 TGF-β 1所占比例最高(>90%),活性
也最强 , 是起主要作用的 TGF-β 因子 [ 3 , 4] 。 TGF-β 与其受体
(TβR)结合后 , 通过细胞膜上的 Smad蛋白可将 TGF-β 信号从
细胞表面传至细胞核内 , 从而调节靶基因的转录 [ 5] 。 TGF-β 1
在 DN进展中发挥着重要的作用 ,其介导肾脏病变的机制有如下
几点:①TGF-β1刺激 ECM积聚;②抑制细胞增殖 、促进细胞肥
大;③促进细胞凋亡;④改变细胞表型;⑤与其他细胞因子的相互
作用。本实验表明JTBSD能明显降低 DM大鼠的 BUN、SCr、CCr,
能够使 DM大鼠肾组织系膜基质增生减轻 、肾小球硬化明显减
轻 、血管水肿减轻 , 使 DM大鼠肾组织中 TGF-β
1
表达明显减
少。 JTBSD对 DM大鼠肾脏具有明显的保护作用 , 其作用机制可
能与防止肾脏功能改变 、减轻大鼠肾脏组织病理改变 、抑制肾脏
细胞因子 TGF-β1的表达有关。
参考文献:
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收稿日期:2009-10-13;　修订日期:2010-03-10
基金项目:湖北省教育厅科技研究计划优秀中青年人才项目资助
(Q20082901)
作者简介:王发松(1969-),男(土家族), 湖北巴东人, 现任湖北民族学院
副教授 , 硕士研究生导师 , 博士学位 ,主要从事天然药物化学与制备工程
研究工作.
长萼小连翘中金丝桃素的含量测定
王发松 1 ,李云和 2
(1.生物资源保护与利用湖北省重点实验室(湖北民族学院),湖北 恩施　445000;
2.中山大学肿瘤防治中心 ,广东 广州　510060)
摘要:目的 建立利用 HPLC法测定长萼小连翘 Hypericumerectumssp.longisepalum中金丝桃素含量的方法。方法 Supel-
cosilODS色谱柱(4.6mm×250 mm, 5μm),流动相为甲醇∶乙腈∶水∶0.3%磷酸 =45 ∶50∶4.5∶0.5(三乙胺调 pH
值至 6.0),检测波长 590 nm,流速 1 ml/min, 线性范围 4.38 ～ 44.7μg/ml。结果 相同生境下的长萼小连翘中金丝桃素含
量约为贯叶连翘中的 3.6倍;长萼小连翘中金丝桃素的含量随着海拔高度的升高呈逐渐下降趋势;金丝桃素在长萼小连
翘各部位中以花和幼果中含量最高 ,可高达 0.774% ～ 1.136%, 在叶中的含量也可高达 0.4%左右 , 但在根和茎中含量极
低。结论 长萼小连翘中金丝桃素含量明显高于贯叶连翘 , 其可能成为一种金丝桃素新优植物资源。
关键词:长萼小连翘;　金丝桃素;　高效液相色谱法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.08.025
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)08-1906-02
　　长萼小连翘 Hypericumerectumssp.longisepalum系藤黄科金
丝桃属植物 [ 1] 。金丝桃素(hypericin)是金丝桃属植物中具有抗
艾滋病病毒等多种逆转录病毒 、抗抑郁和抗肿瘤等生理活性的成
分 [ 2] , 也是该属植物的特征成分之一。 其不同纯度产品广泛应
用于抗抑郁食品补充剂 、神经保健剂 、动物抗病毒饲料添加剂等 ,
同时又是抗艾滋病病毒(HIV病毒)新药的热点化合物 [ 3 ～ 5] 。过
去对金丝桃素的源植物及应用开发研究主要集中在贯叶连翘 H.
perforatumL.。关于长萼小连翘的相关研究报道是在近期才见 ,
如白洁等 [ 6]利用 HPLC /DAD/ESI2MS分析鉴定了湖北巴东产
长萼小连翘的化学成分 ,明确该植物中含有金丝桃素和伪金丝桃
素等成分。而我们在进一步对该植物金丝桃素的含量测定中发
现 , 其全株中金丝桃素的含量显著高于贯叶连翘这一传统金丝桃
素植物资源。因此 ,我们对该植物资源进行了深入的金丝桃素含
量分析 , 为长萼小连翘这一新的含量更高的金丝桃素植物资源的
开发利用奠定基础。
1　仪器与材料
1.1　HPLC检测仪器 DIONEXP680 HPLCPUMP泵;DIONEX
UVD170U紫外检测仪。
1.2　药品 金丝桃素对照品(HPLC法自制 ,纯度 96.34%)。
1.3　材料 花果期(8 ～ 10月)野生长萼小连翘全株实验材料采
自湖北巴东大支坪至耀英坪一带 , 海拔 900 ～ 1 450 m, 按不同海
拔和部位对实验材料分类后阴干。花期(8月)野生贯叶连翘材
料采自湖北巴东大支坪 , 海拔 980 m, 生境与同海拔下的长萼小
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.8
连翘相同 , 采集部位为花枝 20 ～ 40 cm部分 , 阴干。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 SupelcosilODS色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5
μm);流动相:等度洗脱 , 甲醇∶乙腈∶水∶0.3%磷酸 = 45 ∶
50∶4.5∶0.5 (三乙胺调 pH值至 6.0);检测波长:590 nm;流
速:1 ml/min。
2.2　对照品与供试品溶液制备
2.2.1　样品溶液的制备 样品粉碎 , 过 40目筛 ,分别称取 5.00 g
于三角烧瓶中加入 50毫升 95%的乙醇避光超声提取 3次 , 每次
20 min, 过滤 ,合并滤液 , 45℃以下减压浓缩除去部分溶剂 , 定容
为 250 ml。 0.45 μm微孔滤膜过滤后 ,进样分析。
2.2.2　金丝桃素标准曲线的测定 精密取金丝桃素对照品溶液
(40μg/ml)1.0, 2.0, 4.0, 5.0, 10.0ml于 10 ml容量瓶 ,甲醇定容
至刻度 , 为 1, 2, 3, 4, 5号对照品溶液 , 混均 , 0.45 μm滤膜过滤。
各浓度对照品溶液分别以 20 μl进样 3次 , 以平均峰面积 A对浓
度 C进行线性回归 , 得回归方程:A=439 763 C+305 002, 相关
系数 r=0.999 1,线性范围 4.38 ～ 44.7 μg/ml。
2.3　方法学考察
2.3.1　精密度 取金丝桃素对照品溶液重复进样 5次 , 计算峰面
积 RSD。 RSD=3.11%。
2.3.2　稳定性 取金丝桃素对照品溶液 , 于 0, 4, 8, 12, 24 h分别
进样分析 , 计算峰面积的 RSD。 RSD=4.18%。
2.3.3　重复性 取同一批样品 5份 , 每份约 5 mg, 按上述操作平
行测定 5次 , 计算金丝桃素含量的 RSD。 RSD=1.29%。
2.3.4　加样回收率 取已知金丝桃素含量的样品 5份 , 每份约 5
mg,精密加入金丝桃素对照品溶液(40 μg/ml)1 ml, 按上述操作
测定峰面积 , 计算加样回收率。平均加样回收率为 100.7%,
RSD=3.46%。
以上结果表明该方法符合含量测定的要求。
2.4　含量测定 按 “ 2.2”项下制备每种待测样品的溶液 , 进样量
10 μl。测定结果见表 1 ～ 2。
3　讨论
从测定结果可以看出 ,长萼小连翘全株中的金丝桃素含量与
产地的海拔有关 , 随着海拔高度的升高金丝桃素的含量呈逐渐下
降趋势。根据我们对模式标本产地附近的湖北恩施 、建始 、宣恩 、
利川等海拔 250 m至 1 450 m的山地资源采集与调查 , 在海拔
980m以下和 1 500m以上的山地未见有长萼小连翘分布。但相
同产地(海拔 980 m)的长萼小连翘中的金丝桃素含量约为贯叶
连翘中的 3.6倍。由于长萼小连翘金丝桃素的含量显著高于贯
叶连翘这一传统金丝桃素植物资源 ,提示长萼小连翘可能成为一
种金丝桃素新优植物资源。
表 1　贯叶连翘和不同海拔长萼小连翘中金丝桃素的含量 %
样品
号
贯叶连翘中
的含量
不同海拔长萼小连翘全株中的含量
980m 1 240m 1 450m
1 0.065 0.293 0.298 0.289
2 0.102 0.338 0.286 0.274
3 0.097 0.324 0.326 0.261
平均 0.088 0.318 0.303 0.275
表 2　海拔 1 240m野生长萼小连翘不同部位金丝桃素的含量 %
样品号 根 茎 叶 花 幼果 成熟果
1 未检出 痕迹量 0.406 1.068 0.725 0.327
2 未检出 痕迹量 0.422 1.124 0.764 0.341
3 未检出 痕迹量 0.451 1.216 0.833 0.334
平均 未检出 痕迹量 0.426 1.136 0.774 0.334
金丝桃素在长萼小连翘各部位中以花和幼果中含量最高 , 可
高达 0.774% ～ 1.136%, 在叶中的含量也可高达 0.4%左右 , 但
在根和茎中含量极低。
通过对长萼小连翘不同海拔(980 ～ 1 680 m)所产和不同部
位的含量测定 , 可以为长萼小连翘这一可能的金丝桃素新优植物
资源在进一步的人工种植和科学采收研究中给予提示和指导。
就以上测定结果可以初步设定其第 1阶段的人工栽培实验适宜
地为鄂西山区海拔 1 000m左右 , 以尚带少量花的幼果期为最佳
采集期 ,以带叶 、花和果的枝条为最佳采集部位 ,并可留根翌年发
芽而可持续采收。
另一方面 , 进一步开展对长萼小连翘这一高含量的金丝桃素
新植物资源在化学 、药理和资源保护方面的研究工作 , 可为其应
用开发奠定基础。
参考文献:
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·1907·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.8 时珍国医国药 2010年第 21卷第 8期