全 文 ：第 22卷第 6期 重庆工商大学学报(自然科学版 ) 2005年 12月
Vo.l 22　No. 6 JC hongq ing Techno lBu sinessUn iv. (Nat Sci Ed) Dec. 2005
收稿日期:2005 - 06 - 15;修回日期:2005 - 09 - 20。
作者简介:邵承斌(1956 -), 男 ,四川巴中人 , 教授 ,从事天然产物研究与开发。
　　文章编号:1672 - 058X(2005)06 - 0556 - 04
聚花过路黄总黄酮提取工艺
邵承斌 , 吴四维 , 李仁炳
(重庆工商大学 环境与生物工程学院 ,重庆 400067)
摘　要:以总黄酮为指标 ,优化聚花过路黄醇提取工艺条件 ,采用正交设计法进行试验;结
果表明:过路黄的乙醇回流提取最佳工艺条件为乙醇体积浓度的 55%左右 ,提取次数为 3次 ,溶
剂用量为投料量的 8倍 ,提取时间为每次 2 h;按优化条件测定的重庆产聚花过路黄总黄酮的质
量分数为 10. 980 6 mg /g。
关键词:聚花过路黄;总黄酮;回流提取;正交试验
中图分类号:Q 599　　　　文献标识码:A
聚花过路黄 (Lysimachi congestifloa Hem sl. )属报春花科珍珠菜属草本植物 ,别名小过路黄 、风寒草 、红
头绳 ,广泛分布在湖北 、四川 、云南等地 ,文献 [ 1]记载该种植物有祛风散寒作用 ,用于治疗感冒咳嗽 、头痛
身痛 、腹泻等症。聚花过路黄含杨梅树皮素 、槲皮素 、圣柳素等黄酮类物质[ 2] 。该植物资源丰富 ,原料易
得 ,具有较好的利用价值。为了开发利用过路黄资源 ,采用乙醇回流提取方法 ,以总黄酮和收率为指标 ,
研究聚花过路黄的有效成分提取工艺 。
1　材料试剂
(1)仪器试剂。 UV - 2450紫外可见分光光度计 (日本岛津公司 ),索式提取器等;芦丁标准溶液 (0. 6
mg /mL),精密称取在 105℃干燥至恒重的芦丁 (上海化学试剂公司产品 ,浓度大于 95%)标准品 30. 0mg
加甲醇 50mL,即得芦丁标准溶液;所用其它试剂均为国产分析纯。
图 1　芦丁与聚花过路黄的吸收曲线
(2)材料。过路黄 ,购于农贸市场 , 50 ℃烘干 。经鉴定其
特征与《四川中药志》记载的小过路黄一致 ,为报春花科珍珠菜
属植物聚花过路黄 (Lysimachi congestifloa Hem sl)。
2　方法与结果
2. 1　总黄酮浓度的测定[ 3]
(1)波长的确定 。分别吸取芦丁标准溶液和样品 1 mL,加
2 mL醋酸钠 , 2 mL三氯化铝 , 用 50%乙醇定容至刻度放置
40 m in,在 300 ～ 600 nm波长范围扫描得吸收曲线 (图 1)。由
曲线可见 , 420 nm为最大吸收峰 。
(2)稳定性实验 。按 (1)测试条件 ,分别放置不同时间测定芦丁在 420 nm下的吸光度 ,结果表明芦
丁在 1 h内显色十分稳定 (表 1)。
(3)标准曲线。分别吸取适量系列芦丁标准溶液 ,加入 2 mL乙酸钠 , 2 mL三氯化铝溶液 ,用 50%乙
图 2　芦丁标准曲线
醇定容至刻度 ,测定 420 nm下的吸光度 ,以浓度 (C)为横坐
标 ,吸光度(A)为纵坐标得标准曲线 (图 2)。试验中 ,芦丁浓
度在4 ～ 40 μg /mL范围内呈直线关系 ,标准曲线方程为:
y =0. 019 7x +0. 017 7 ,R 2 =0. 993 7
(4)回收率。用移液管分别准确移取标准卢丁(0. 6mg /mL)
溶液 0, 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 6mL,加入聚花过路黄提取液 0. 2mL,按标
准曲线操作 ,以聚花过路黄提取物为对照 ,分别测定其在 420 nm
处的吸光度 ,计算加标回收率(表 2),平均回收率 99. 87%, RSD为
3. 10%。
(5)样品测定。精密吸取适量样品提取液 ,按标准曲线操
作 ,测定 420 nm下的吸光度 ,从工作曲线方程中查出总黄酮含量 ,计算出总黄酮含量 。
表 1　芦丁显色稳定性实验结果
测定时间 9∶00 9∶05 9∶10 9∶15 9∶30 10∶00 11∶00
A 0. 685 0. 685 0. 685 0. 685 0. 685 0. 685 0. 676
表 2　加标回收率
项目 1 2 3 4 5 平均回收率 RSD /%
样品提取液 /mL 0. 2 0. 2 0. 2 0. 2 0. 2
标准加入量 /m g 0. 06 0. 12 0. 24 0. 36
测得量 /m g 0. 599 0. 125 0. 237 0. 349
回收率 /% 99. 83 104. 17 98. 54 96. 94 99. 87 3. 10
2. 2　提取方法
(1)提取方法的选择 。①乙醇提取:称取过路黄粗粉 10. 00 g ,加 50%的乙醇 80 mL,水浴回流 80
m in,过滤 ,提取 3次 ,合并滤液并减压浓缩后定容至 100mL;②水提取:称取过路黄粗粉 10. 00 g,加水 80
mL,浸泡 30m in,煮沸 60m in,过滤。共煎煮 3次 ,合并滤液减压浓缩至 100mL。
上述两种提取方法的提取结果见表 3。结果表明 ,乙醇回流提取优于水提取。对乙醇回流提取条件
进行了进一步优化。
(2)乙醇回流提取条件的优化。用正交设计法 [ 4] ,考察溶剂(A)、料液比(B)、提取时间 (C)、提取次
数 (D)四个因素 ,三个水平 ,优选最佳提取工艺条件。因素的水平根据预试单因素实验结果确定 ,每个样
品称量 10 g。因素水平安排见表 4,正交实验结果见表 5。
表 3 　过路黄提取方法与
黄酮含量的关系(n=3)
提取方法 黄酮含量 /mg. g- 1 RSD /%
乙醇回流提取法 7. 268 0. 921
水提取法 6. 144 0. 762
表 4　因素水平
因素 A酒精体积浓度 /%
B酒精
倍数
C回流
时间 /h
D提取
次数
1 30 6 1. 0 1
2 55 8 1. 5 2
3 80 10 2. 0 3
从正交实验的级差分析分析可知 ,级差最大的为 C因素 ,其次为 D因素 ,再其次是 B因素和 A因素 ,
说明在过路黄的乙醇回流提取中 ,对总黄酮含量影响最大的因素为溶剂倍数 ,其次分别是提取时间 ,提取
次数和溶剂浓度 。故 C因素和 D因素选水平 3, B因素选水平 2。 A因素级差较小 ,说明乙醇浓度在研究
范围内对过路黄总黄酮影响不大 ,结合预试和以往经验选水平 2。因此 ,优选的乙醇回流提取过路黄总黄
酮的最佳提取工艺条件为乙醇浓度 55%左右 ,提取次数为 3次 ,溶剂用量为投料量的 8倍 ,提取时间
557第 6期　　　　　　　　　　　　邵承斌 ,等 :聚花过路黄总黄酮提取工艺
为 2 h。
(3)验证实验 。按优选的最佳工艺条件制备 3批样品 ,并测定提取液中的总黄酮浓度结果表明:提取
液中的总黄酮浓度为 10. 980 6mg /g,与正交实验结果中最好的指标接近(表 5、表 6)。
表 5　正交试验 L9 34的结果分析
实验号 A B C D 总黄酮含量
/m g. g - 1
1 1 1 1 1 6. 037 5
2 1 2 2 2 9. 262 9
3 1 3 3 3 11. 265 5
4 2 1 2 3 10. 240 4
5 2 2 3 1 9. 317 8
6 2 3 1 2 7. 267 6
7 3 1 3 2 8. 805 3
8 3 2 1 3 9. 181 1
9 3 3 2 1 8. 976 1
K 1 26. 565 9 25. 083 2 22. 486 2 24. 331 4
K 2 26. 852 5 27. 761 8 28. 479 4 25. 335 8
K 3 26. 962 4 27. 509 2 29. 388 6 30. 687 0
X
1 8. 855 3 8. 361 1 7. 495 4 8. 110 5
X2 8. 941 9 9. 253 9 9. 493 1 8. 445 3
X3 8. 987 5 9. 169 7 9. 796 2 10. 22 9
R 0. 132 2 0. 892 8 2. 300 8 2. 118 5
表 6　验证实验结果
样品批次 1 2 3 平均
总黄酮含量 /mg. g- 1 9. 985 1 11. 152 3 11. 804 5 10. 980 6
3　讨　论
分光光度法用于聚花过路黄中总黄酮的测定 ,快速 、稳定 ,适合生产工艺过程的中间产品检测 。实验
采用分光光度法测定了聚花过路黄的总黄酮含量。以总黄酮为指标对聚花过路黄的总黄酮提取工艺进
行了优化。由表 3看出 ,乙醇回流提取法优于水提取法 ,主要原因是黄酮类物质在乙醇中的溶解度高 ,有
效成分能快速进入溶剂 ,而水提取中 ,水溶性杂质溶出率高 ,影响有效成分的溶出 ,杂质含量增加 ,因而提
取效率较低 。正交实验法用于提取工艺优化 ,减少了实验次数 ,节约了实验成本 ,是天然产物有效成分提
取工艺优化实验很好的工具。通过正交实验法确定聚花过路黄总黄酮的提取工艺条件为:乙醇体积浓度
55%左右 ,提取次数为 3次 ,溶剂用量为投料量的 8倍 ,提取时间为每次 2 h。按最佳工艺提取聚花过路黄
中的总黄酮 ,测得聚花过路黄总黄酮含量为 10. 980 6 mg /g。
黄酮类物质具有降血脂 、清除自由基及加强维生素抗氧化作用的能力 ,在医药食品行业有广泛的用
途 。聚花过路黄中黄酮类物质浓度丰富 ,具有较好开发利用价值。实验结果为聚花过路黄的综合利用提
供了实验数据。
参考文献:
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558 重庆工商大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　第 22卷
Study of the extraction of flavonoids from
Lysimachi congestifloaHem s.l by ethano l
SHAO Cheng -b in ,WU S i -wei ,L IRen -b ing
(Environmenta l and B io logical Eng inee ring Co llege , Chongqing Techno logy and
Business University, Chongqing 400033, China)
Abstract:In o rder to study the ex traction process for the to tal flavones o f Lysim ach i congestifloaHem sl, the
optimum extrac tion processw as selected w ith the oethogona ldesign. The contan t of to tal flavonesw as determ ined
by UV - spec trophotome try. The sig in fican t e ffec t o f alcoho l amount, extrac tion time , times of extrac tion on the
ex traction o f to tal flavones we re presented. The optimum extrac tion process is as fo llow s:adding 8 times amount
of 55% a lcoho l into Ch inese medicalm aterials, re flux ex traction 3 times 2h pe r time. The con tant o f to tal fla-
vones o f Lysimach i congestifloaHem sl in Chongqing is 10. 9806mg. g - 1.
Keyword:Lysim ach i congestifloaHem sl;to ta l flavono id;re flux extrac tion;oethogona l design
责任编辑:田　静
(上接第 550页)
参考文献:
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A new process for biological treatment of nitric wastewater - - nitrous
nitrifying / au totroph ic denitrifying process
WEIChen
(Depa rtment of Env ironmen t and B io logy Eng ineering, Chongqing Technology and
Business University, Chongqing 400067, China)
Abstract:This paper in troduces a new b iolog ical treatment of nitric w astew ater /n itrous nitrifying / auto-
troph ic den itrify ing process in recent yea rs, d iscusses the deve loping history, reac tion theory bases, influence e le-
men ts and the advantages o f this process, g ives reac tion equation, diag ram s, the ana lysis and the advantage .
Key words:biology n itrogen removal;partia l nitrification;autotrophic denitrifying;ANAMMOX
责任编辑:田　静
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