全 文 ：辣萝中芦丁的薄层及紫外光谱鉴别
常 瑛 , 王四旺 ` 张 超 2 王剑波` 谢艳华 ,
( 1第四军医大学药学系药物研究所 西安 7 1加犯 2 成都华高药业有限公司 成都 ` 1仪月 1
摘要 目的 :确定辣攀中有效成分芦 T 的定性鉴别和总黄阴含黄的洲定方 法。 方法 :采用薄层层析 ( l t C ) 、萦外分光光度法
(VU )对辣葵分别进行理化鉴别和含童侧定 。 结果 : 芦丁确 系辣界中主要有效成分 ; 同时建立 vu 检侧中浓度在 0 .仪洲招 一 0 .
以翻 8网扩动 范圈内与吸收度间的具雀良好线性关系 ,其回归方程为 A 二 11 . 47 1c6 一 。 . “ 刃3 ( : 二 0 . 卯 28 , n 二 6) ,平均回收率为 97 .
95 % ( RS D 二 1
.
8 % ) ;辣攀样品中总黄阴的平均含童为 1 .刃 9% 。 结论 :本方法简便 、 快速 、 准确 ;为辣攀开发新药及其相关质贡
标准的研究提供了依据 。 三
关性词 :辣攀 ;芦丁 ;薄层层析 ;磅外分光光度法 ;总黄阴 ;含贵
中圈分类号 J U斜 . 1 文献标识鹤 : A
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辣井为萝科植物水辣萝 田 y脚 lnU Hy` 户脚或早辣葬
时y脚帅 几叹id团】 M` . 的干燥全草 ,其叫法各地有差异通常是指水移 、 红辣葬 、 辣尿草等〔’ 一 31。 产于我国南北各地 ,多生
于澳边 ,山坡湿地。 传统医学认为甭辣葬辛 、 温 ,无毒 。 具有健
脾化湿 、 除湿化滞 、止痢止痛 、解毒化癖的功效 ; 适用于感染和
饮食不忌等引起的腹泻 、腹痛、 痢疾等的治疗。 现代临床医学
研究表明[’] ,辣葬具有抗菌 、抗病毒 ,抗炎 ,抗氧化 ,止血 ,抗肿
瘤 ,镇痛等功效 ,总黄酮为其有效成分。 其水提液能明显降低
大鼠肾盂肾炎模型尿中的白细胞和红细胞 . 明显降低大肠杆
菌感染小鼠的死亡率 ,降低发热家兔的体温 5[] 。 笔者以芦丁
为对照品 , 采用分光光度法 61[ ,对其中的总黄酮进行含量侧
定 ,现报道如下 。 `
1 仪器与试药 ;
1
.
1 仪公 : :
萦外可见光分光光度计 (甲涵司幼 型 ,德国耶拿 扣朋公司 ) ;石英比色皿 (德国耶章 jean 公司 ) ; 1 / 10 万电子分析天平
(】)以刃型 ,德国 S川浦 us 公司 ) ; 电子恒温水浴锅 (天津泰斯特
科学仪器有限公司 )。 三
1
.
2 试药 :
芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号 : l x x洲〕-
么刀互巧 ) ;辣葬产于湖北那州市 (药材经陕西省药品检验所鉴
定 ) ;其余试剂均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 定性检脸
2
.
2
.
1 盐酸 一 镁粉还原反应试验 : 取本品粉末约 19 ,加乙醉
巧dn ,于水浴上 刃而 n ,滤过。 取滤液加 ,加人镁粉 纸飞 ,滴加浓盐酸数滴 ,溶液呈徽樱桃红色 ,说明银杏根中有黄酮化合物
存在。
2
.
2
.
2 辣萝中芦丁的薄层鉴别 :取辣葬粉末 gl ,加乙醉 15 d ,
于水浴上温浸 2小时 ,滤过 , 回收乙醉 ,浓缩成稠浸膏状 ,加乙
醉 0 . 5d 溶解后为供试品溶液 。 另取芦丁对照品 ,加乙醉制成
Zn娜d 的溶液 ,作为对照品溶液。 照薄层色谱法 (中国药典
岌洲万年版一部附录班 B) 试验 ,吸取上述两种溶液分别点于同
一聚酞胺薄膜上 ,以醋酸乙醋 一 甲酸一水 ( 8 : l : l) 为展开荆 ,展
开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5% 三抓化铝乙醉溶液 ,待乙醉挥干后 ,工
紫外光灯 (肠 s ln )下检视。 供试品色谱中 ,在与对照品色谱相
应的位置上 ,显相同颜色的黄绿色荧光斑点图 1。
作者简介: 常瑛 ( 1980 一 ) ,女 ,陕西四安人 ,在读硕士 。
研究方向 : 中药新药研发。 侧 : ( 0 29 )翻刀女沼9
通讯作者 : 王四旺 ( l仍 8一 ) ,男 ,湖北武汉人 ,教授 ,硕士导师 。
刊 : (《左9 )翻刀幻叨 栩目 , , @ ` m . .山 . 。
(收稿日期 : 2以万 一 07 一 加 接受日期 门以万 一 璐 一 23 )
圈 l 薄层色诺圈
辣挤供试品 津 . 芦丁标准品
月 9 1 巧 d ” 口 e j ht i l 一 坛卿 山和 . ` 飞户助
.介函飞 幽润 e J 扭 1. ; 2 . 3 . 侧加 d洲钾画创 试画 n .
现代生物医学进展 i nM咏山 mBI 摘脚娜d 僻 2 以拾 V o l.6 N o . I O , 4 7 .
2
.
2 总黄翻含t 的测定
2
.
2
.
1 对照品溶液的制备 : 准确称取于 1加 ℃下干燥至恒重
的芦丁对照品 10 . 05 gm ,置于 , d 容量瓶中 ,加甲醉溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 0 . 20 h l唱 / d 的芦丁对照品溶液 。
2
.
2
.
2 供试品溶液的制备 : 称取辣芬粉末约坛,准确称定 ,分
别t 于索氏提取器中 , 加石油醚适最 , 加热回流至提取液无
色 ,弃去石油醚液。 药渣放冷 ,再加甲醉适量 ,加热回流至提
取液无色 ,移里 lX( 玩 d容量瓶中 ,用少盘甲醉洗涤容器 ,洗涤液
并入容童瓶中 ,加甲醉至刻度 ,摇匀 ,精密量取 25 毗 ,置 匆 . 1正
量瓶中 .加水至刻度 ,摇匀 ,即得。
2
.
2
.
3 测定波长的选择 :分取` ,2 , 2 . 1”项下对照品溶液和 “ 2 .
2
.
2 项下供试品溶液 3耐 ,分别 t 于 25 d 容量瓶中 ,各加水至
6d
,再加 5% 亚硝酸钠溶液 M ,摇匀 ,放置 6面 n 。 加 10 %硝酸
铝溶液 闹 ,摇匀 ,放里 6而 n 。 加 4% 氮氧化钠试液 10 以 ,再加
水至刻度 ,摇匀 , 放置 15而 n 。 以水平行试验为空白参比 ,在
2X() nm
一 以刃旧 1波长范围内扫描 ,结果对照品和供试品溶液均
在 叹刃阴 ,波长处有最大吸收峰 ,故以 汉刃佃1为侧定波长。
2
.
2
.
4 标准曲线的绘制 :精密吸取` ,2 . 2 . 1” 项下对照品溶液
0
、
1
.
0
、
2
.
0
、
3
.
0
、
4
.
0
、
5
.
0
、
6
.
On d
, 分别工于 25 DIL 容量瓶中 ,按
,’2 . 2 . 3 项下方法进行操作 ,并在 又刃阴 1波长处侧定吸收度。
以吸收度 ( A )为纵坐标 ,浓度 ( c )为横坐标 ,绘制标准曲线图 2 ,
得回归方程 A 二 1 1 . 47 16 C 一 0 . 《众 )3 ( r 二 0岌祀 8 , n 二 6) ,表明样
品检测浓度在 。汉艾照犯 一 0 . 以别8 11州 d 的范围内与吸收度线
性关系良好 。
平均回收率 ,结果详见表 1。
裹 1 回收卒试脸结 .
口
n山 l 凡别】st j n , x 片曰 , 场目
样品含 l 加人 t 侧得盘 回收率 , SR D
(吨 ) (咚 ) (啤 ) (% ) (% ) (% )
00
.
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0
.
0 197 8
0
.
0 1卯 8
0
.
0 1刃 9
0
.
0 1卯 8
0
.
0 1卯 7
0
.
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0
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.
0 1卯 7
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0
.
07 8 16
0
.价幻 1
卯 .仍 1 . 8
2
.
2
.
, 样品含盘侧定 :准确称取药材粉末 19 ,按 “ 2 . 2 . 2 项下
方法制备成供试品溶液 ,分别从中准确吸取 3以 ,按“ 2 . 2 . 4 ”项
下方法操作 ,侧定吸收度 ,代人回归方程中计算供试品含 t ,
结果见表 o2
衰 2 样品含. 侧定结. 《n 二 3)
1袖 Z Q成翻 t d目曰`画 . ~ l. J 翻甲! .e ( n 二 3)
编号 称样. ( ` ) 总黄用含 t (% ) 武% ) sR (D % )
1 1
.
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2 1
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3 1
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( A ) ]
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( A ) ]
2
.
2
.
5 精密度试验 :精密吸取弋 . 2 . 1”项下对照品溶液 3d ,共
6 份 ,按恤 . 2 . 4 项下方法操作 ,分别侧定吸收度。 结果吸收度
平均值为 0 . 1207 旧S D 二 0 . 385 9% ,表明本方法精密度良好 。
2
,
2
. ` 稳定性试验 :精密吸取供试品溶液 3d ,按恤 . 2 . 4 项下
方法操作 ,摇匀后于 10 、 加 、 30 、 40 、 50 、 印丽 n 时分别侧定吸收
度 。 结果 义b 加内测得吸收度的 月S D 二 1 . 450 % ,表明在 义玩云n
内完成侧定时结果准确。
2
.
2
.
7 重复性试验 :取同一编号的辣葬粉末 ,按“ 2 . 2 . 2 项下
方法制备成供试品溶液 6份 ,分别从中准确吸取 3 d ,按` ,2 . 2 .
4 项下方法操作 ,侧定吸收度 。 结果该样品中总黄酮平均含
盆为 1 .仍9% 旧S D 二 1 . 23 % ,表明重现性良好 。
2
.
2
.
8 加样回收率试验 :准确取已知含 t 的辣葬粉末 1叱 ,共
9 份 ,再按低 、 中、高系列浓度分别加人对照品溶液 0 . 1、 0 . 2 、 0 .
3 d
,每种浓度 3份 ,其后按 u2 . 2 . 4 项下方法侧定吸收度 ,计算
3 讨论
薄层色谱的检侧原理及特性 : 实验中以芦丁为对照品 ,采
用硝酸铝作为黄酮类物质比色侧定的显色剂 ,主要是因为黄
酮母核中含有碱性氧原子 ,一般又多带酚经基 ,能和铝离子产
生黄色络合物 。 加人亚硝酸钠和氢氧化钠 ,可使之在碱性溶
液中显红色 ,但显色反应要及时侧定 ,放 t 过久易褪色 。
萦外分光光度法检侧波长的选择 : 文献报道总黄酮测定
的波长多采用 257 。 、 358 . 、 sl on , 等7[] 。 经过我们比较研究中发现 ,波长为义刃咖处千扰较小 ,且样品不需要特别处理即
可进行侧定。 实验结果表明 ,该方法回收率高 ,重复性好 ,方
法准确 、 简单快捷 , 易于普及 。 近年大盆药理试验研究表
明s[] ,辣萝有抑菌 、 抗炎效果 。 水提液体外抑菌实验证明 ,辣
芬对金黄色葡萄球菌 、 绿脓杆菌 、 大肠杆菌 、伤寒沙门氏菌 、 福
氏痢疾杆菌等肠道感染常见的细菌具有不同程度的抑制作
用 ,其中对金黄色葡萄球菌的抑菌作用更强。 动物体内实验
结果表明 ,辣葬对二甲苯引起的小鼠耳肿胀 、 蛋清引起的大鼠
足肿胀 、醋酸导致的小眼腹腔毛细血管通透性增高均有显著
的抑制作用 ,说明辣葬能够抑制炎症早期的渗出和水肿 。 辣
葬减少角叉菜胶引起的大鼠胸腔白细胞数 、 抑制小鼠滤纸片
致肉芽肿的生长 ,说明辣葬能够拮抗炎症中期白细胞趋化和
游走 ,抑制炎症晚期肉芽肿的形成 。 提示辣葬对炎症的早 、
中 、晚期均有明显的抑制作用 ,起作用成分可能与黄酮类化合
物有关 ,为其应用展示了良好的前景 ,有关辣萝的抗炎作用机
理有待进一步研究。 黄酮类化合物有抗炎 、降脂 、 抗血栓 、 抗
衰老 、 抗氧化 、抗心率失常等作用 。 本文探讨的辣葬薄层色谱
鉴别及其总黄酮含量侧定的方法研究 , 为该药材的质量标准
研究及新药研发奠定了基础 。 `下转第 51 页 l
现代生物医学进展 in M咏翻m 翻. 栩闭`」他 2《 X场 V d. 6N o . I O . 5 1.
圈 1一 3 大限肝理化肝脏 HE 染色 x 闷( X )倍 圈 1一 4 大吸正常肝脏 HE 染色 x 喇 X )倍
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活性研究进展〔J] .中草药 ,加工 , 3 ( 1 ) : 82 一 助
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《上接 ` 47 页 )
参 考 文 做
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【4 ] 巩忠福 ,杨国林 ,严作廷 ,谢家声 . 葬属植物的化学成分与药理学