全 文 ：第 20卷 第 2期 化　学　研　究 中国科技核心期刊
2009年 6月 CHEMICAL　RESEARCH hxyj@henu.edu.cn
高速逆流色谱法分离制备华山参中东莨菪内酯
刘彩霞 1 ,呼亚旭 1 ,李宁宁 1 , 赵东保 1, 2＊ ,王 　勇 1 ,刘绣华 1
(1.河南大学 化学化工学院河南省天然药物与免疫工程重点实验室 ,河南 开封 475004;
2.济源职业技术学院 ,河南 济源 454650)
收稿日期:2009-01-14.
基金项目:河南省教育厅自然科学基金项目(2007150030)和河南省科技厅国际合作项目(084300510023).
作者简介:刘彩霞(1982-),女 ,硕士生 ,主要从事天然产物研究.＊通讯联系人 , E-mail:dongbaozhao@sina.com.
摘　要:采用高速逆流色谱法从华山参乙醇提取液的氯仿萃取物中分离得到了一种高纯度的香豆素类化合物 ,
东莨菪内酯.所用体系为正己烷∶乙酸乙酯∶甲醇∶水(体积比 3∶5∶3∶5), 上相做固定相 , 下相做流动相.分离所
得东莨菪内酯的纯度经高效液相色谱检测达到 97%.该方法操作简单 、方便 、快捷 ,可用于华山参中香豆素类化
合物———东莨菪内酯的分离制备.
关键词:华山参;香豆素;东莨菪内酯;高速逆流色谱;高效液相色谱
中图分类号:O623.7 文献标识码:A 文章编号:1008-1011(2009)02-0101-03
IsolationofScopoletinfromPhysochlaineInfundibularisKuang
byHigh-speedCounter-currentChromatography
LIUCai-xia1 , HUYa-xu1 , LINing-ning1 , ZHAODong-bao1, 2＊ , WANGYong1 , LIUXiu-hua1
(1.CollegeofChemistyandChemicalEngineeringofHenanUniversity, HenanKeyLaboratoryofNaturalMedicineandImmunology,
Kaifeng475004, Henan, China;2.JiyuanVocationalandTechnicalColege, Jiyuan454650, Henan, China)
Abstract:Ahigh-speedcounter-curentchromatographymethodforisolationofcoumarinfromphysoch-
laineinfundibularisKuangwasdevelopedbyusinghexane-ethylacetate-methanol-waterasthetwo-
phasesolventsysteminelutionatanoptimizedvolumeratioof3∶5∶3∶5.Theupperphaseofthesol-
ventsystemwasusedasstationaryphase, andthelowerphasewasusedasmobilephase.Thepurityof
scopoletinfromtheseparatedfractionwas97% analyzedbyHPLC.Themethodiseasytooperatewith
lowcostandcanbeusedforseparationandpreparationofscopoletinfromphysochlaineinfundibularis
Kuang.
Keywords:physochlaineinfundibularisKuang;coumarins;scopoletin;high-speedcounter-curent
chromatography;HPLC
　　华山参(physochlaineinfundibularisKuang)系茄科(solanaceae)泡囊草属植物 ,学名漏斗泡囊草 ,又名华山
人参 、华山参 、秦参 ,因主产于西岳华山而得名.用于治疗神经衰弱 、精神分裂 、胃腹疼痛 、失眠头痛 、咳喘多
汗和防治慢性气管炎等[ 1] .华山参的主要活性成分之一是香豆素 , 香豆素的传统分离多采用柱色谱和薄层
色谱法 ,操作繁琐.作者采用高效 、方便 、快捷的高速逆流色谱对其进行分离.高速逆流色谱是 20世纪 80年
代以来迅速发展的新型液-液分配色谱技术 ,所依据的原理是单向流体动力学平衡 ,利用样品在两相中分配
系数的不同而得到有效分离 ,因其近年来在天然产物分离方面表现出了独特的优势而受到关注 [ 2-5] .
作者用乙醇对华山参进行提取 、氯仿对醇提物粗分后 ,用高速逆流色谱法(HSCCC)对其进行分离 ,从中
分离制备出一种香豆素类化合物 ,经与标准品对照确定其为东莨菪内酯.
DOI :10.14002/j.hxya.2009.02.031
102　 化　学　研　究 2009年
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
TBE-300A高速逆流色谱仪(中国上海同田生化技术有限公司);AKTApurifier泵及检测系统(美国 GE
公司);Agilent1100 HPLC仪(美国 Agilent公司);旋转蒸发仪(德国 Heidolph);超声波清洗器(上海现科仪
器有限公司);
高速逆流色谱所用的有机溶剂(正己烷 、乙酸乙酯 、甲醇 、氯仿 、乙醇)均为分析纯;高效液相色谱所用的
甲醇为色谱纯;乙酸 、盐酸为分析纯;双蒸水.
东莨菪内酯标准品(中国药品生物制品检定所);华山参样品由河南天方药业集团提供.
1.2　样品制备
取华山参粉末 320 g,置于 5 L圆底烧瓶中 ,加入含 0.1 mol/L盐酸的 80 %乙醇 3 L, 90 ℃水浴提取 2
次 ,每次 2h.过滤 ,滤液减压浓缩 ,加入等体积的氯仿于 60℃水浴提取 2次 ,每次 1h.冷却 ,合并氯仿提取
液.将氯仿相减压浓缩 ,得到的浸膏即为香豆素粗提物 ,放入冰箱冷藏待用.
1.3　高速逆流色谱分离
将正己烷 、乙酸乙酯 、甲醇 、水按体积比 3∶5∶3∶5的比例配制在分液漏斗中静置过夜 ,分离后超声脱气
30 min.冷却 、待用.以上相为固定相 ,将其在最大流速下泵入并充满分离螺线管(300 mL).开启恒温循环
器并将其温度设定为 25 ℃.当有固定相流出时 ,以 2 mL/min的流速开始泵下相(流动相),同时开启 AKTA
purifier检测系统 ,按 800 r/min的转速启动主机.观察透明容器 ,待流动相以液滴形式穿透固定相 ,从管柱出
口流出且基线稳定后 ,将样品溶液由载样注射器经进样圈注入.管柱出口处的流出物经 AKTApurifier的紫
外检测器检测并由其色谱工作站和记录仪记录 ,按峰收集组分.
1.4　HPLC纯度分析
色谱柱:AgilentZorbacC18(2.1 mm×150 mm, 5 μm);流动相:0.5 %醋酸水-甲醇(体积比 80∶20);流
速:0.3 mL/min;检测波长:340 nm;柱温:30 ℃.
2　结果与讨论
2.1　两相溶剂系统的选择
(1)薄层色谱法:样品点于自制的硅胶薄层板上 ,选用不同的展开系统展开 ,通过比较荧光斑点的大小
或颜色深浅来判断各组分在两相间的分布情况 ,发现采用氯仿 -丙酮(体积比 10∶1)时样品在下相的溶解效
果最好.
(2)高效液相色谱法:取香豆素粗提物 5 mg用下相定容于 10 mL容量瓶中 ,摇匀 ,用 0.45 μm的微孔滤
膜过滤 ,滤液作为供试品溶液.在 1.4色谱条件下测定分配系数.
参照文献 [ 6]和溶剂选择软件给出的溶剂系统 ,考察了三种溶剂系统的分离情况 ,发现正己烷:乙酸乙
酯:甲醇:水(体积比 3∶5∶3∶5)体系的分离效果最好.图 1是华山参乙醇提取物的高速逆流色谱图 ,其中峰 1
为东莨菪内酯的色谱峰.
2.2　结构鉴定及含量测定
经由 HSCCC分离所得化合物 1(峰 1)通过与东莨菪内酯标准品对照 ,采用比较 TLC比移值的大小 、
HPLC检测的保留时间以及紫外光谱等 ,确定其为东莨菪内酯 ,结构见图 2.高效液相色谱(图 3,图 4)测得
纯度大于 97 %.
3　结论
高速逆流色谱的关键是溶剂体系的选择 ,采用薄层色谱法和高效液相色谱法对分离华山参中香豆素类
化合物东琅菪内酯的溶剂系统进行了研究.结果表明采用正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水(体积比 3∶5∶3∶5)体
系最佳.实验结果表明 ,利用高速逆流色谱可直接从华山参粗提物中制备活性成分东琅菪内酯.方法操作
简单 、方便 、快捷 ,切实可行 ,为东莨菪内酯的纯化制备提供了新的途径.
第 2期 刘彩霞等:高速逆流色谱法分离制备华山参中东莨菪内酯 103　
图 1　华山参乙醇提取物的高速逆流色谱图
Fig.1　Chromatographofthecrudeethanolextract
ofphysochlaineinfundibularisKuang
图 2　东莨菪内酯的结构式
Fig.2　Thestructureofscopoletin
图 3　东莨菪内酯标准品的 HPLC
Fig.3　TheHPLCchromatogramofscopoletin
图 4　化合物(1)的 HPLC图
Fig.4　TheHPLCchromatogramofpurifiedcomound(1)
参考文献:
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