全 文 ：荧光分光光度法测定瑞香狼毒中总黄酮的含量
罗喜荣1，黄 静1，杨 军2* ，余德顺2 (1．贵阳医学院，贵州贵阳 550004;2．中国科学院地球化学研究所，贵州贵阳 550002)
摘要 ［目的］建立瑞香狼毒中总黄酮的含量测定方法。［方法］以芦丁为标准品，在激发波长 435 nm、发射波长 490 nm条件下采用荧
光分光光度法测定瑞香狼毒中总黄酮含量。［结果］荧光强度与芦丁浓度在 0． 003 95 ～ 5． 0 μg /ml范围内具有良好的线性关系，检出限
为 1． 19 μg /L，平均回收率为 99． 15%;测得瑞香狼毒中总黄酮的含量为 1． 310%，RSD为 0． 51%。［结论］该方法操作简便、准确性好，具
有良好的分析应用前景。
关键词 荧光分光光度法;瑞香狼毒(RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES);总黄酮
中图分类号 S123 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)17 －09260 －02
Determination of Total Flavanoids in RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES by Spectrofluorimetry
LUO Xi-rong et al (Guiyang Medical College，Guiyang，Guizhou 550004)
Abstract ［Objective］To establish a new method for determining the content of total flavanoids in RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES．
［Method］Total flavanoids in RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES were determined by spectrofluorophotometer with rutin as standard refer-
ence at the excitation wavelength of 435 nm and the emission wavelength of 490 nm． ［Result］The fluorenscence had good linear relations with
rutin concentration within the range of 0． 003 95 －5． 0 μg /ml，the detection limit was 1． 19 μg /L，the average recovery was 99． 15%，and the
content of total flavonoids was 1． 310% with a relative standard deviation of 0． 51% ． ［Conclusion］The method is simple，accurate and has bright
future in analytical applications．
Key words Spectrofluorimetry;RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES;Total flavonoids
基金项目 贵州省科学技术基金项目(黔科合 J字［2011］2288 号)。
作者简介 罗喜荣(1973 － ) ，女，贵州松桃人，副教授，硕士，从事天然
药物化学研究，E-mail:luoxirong@ hotmail． com。* 通讯作
者，副研究员，硕士，从事生物化学及分析化学研究，E-mail:
yjco2@ 163． com。
收稿日期 2012-03-12
瑞香狼毒(RADIX STELLERAE CHAMAEJASMES)为瑞
香科(Thymelaeaceae)狼毒属(Stellera)植物瑞香狼毒(Stellera
chamaejasme L．)的干燥根，又名断肠草、红狼毒等，始载于
《神农本草经》，广泛分布于我国西北、东北和西南等地区。
其味苦、辛，性平，有毒，入肺、脾、肝经，具有泻水逐饮和破积
杀虫的功效［1］。瑞香狼毒的主要化学成分有黄酮类、香豆素
类和木脂素类等。其黄酮类化合物大多为双黄酮。双黄酮
主要有狼毒素 A． B． C、新狼毒素 A． B 和狼毒色原酮等［2］。
药理研究表明，瑞香狼毒总黄酮提取物具有较强的体内和体
外抗肿瘤作用，能明显抑制肝癌细胞的增殖，其抑制作用呈
现明显的剂量 －时间依赖性［3 －4］。瑞香狼毒总黄酮还具有
明显的体外清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的作用，且
作用强于 VC
［2］。目前瑞香狼毒中总黄酮含量的测定主要采
用紫外分光光度法，关于利用荧光法测定瑞香狼毒中总黄酮
含量的研究鲜有报道。笔者根据黄酮类化合物与铝离子能
形成稳定的荧光络合物的特性，采用荧光分光光度法测定瑞
香狼毒中的总黄酮含量，以期为瑞香狼毒资源的开发利用提
供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。瑞香狼毒，购自甘肃兰州，经鉴定为 RADIX
STELLERAE CHAMAE － JASMES，粉碎成 1 mm颗粒备用。
1． 1． 2 主要仪器。KQ5200超声波清洗器，购自昆山市超声仪
器有限公司;F －2500型荧光分光光度计，购自日本日立公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁标准品，购自中国药品生物制品检
定所;无水甲醇、无水三氯化铝均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 标准品溶液的制备。精密称取 10． 0 mg芦丁，用无水
甲醇溶解并定容至 10 ml，配制成浓度 1 mg /ml 的标准贮备
液;分别取芦丁标准贮备液 5、10、15、20和 25 μl置于 5 ml比
色管中，加入浓度0． 01% AlCl3 甲醇溶液0． 6 ml，用无水甲醇
定容至刻度，摇匀，配制成系列标准工作溶液。
1． 2． 2 样品溶液的制备。准确称取 0． 500 g 瑞香狼毒粉置
具塞锥形瓶中，加入无水甲醇 50 ml 浸泡 24 h，超声提取 40
min，过滤，用无水甲醇定容至 50 ml，取滤液 0． 1 ml，按标准
工作溶液制备方法处理得到待测样品溶液。
1． 2． 3 荧光光谱的扫描。对芦丁标准液进行荧光光谱扫
描，测定最大激发波长和最大发射波长。
1． 2． 4 AlCl3 用量对芦丁标准液荧光强度的影响。黄酮类
化合物与铝离子可生成稳定的荧光络合物。向适量黄酮类
化合物中分别加入0． 2、0． 4、0． 6、0． 8和1． 0 ml的浓度0． 01%
AlCl3 甲醇溶液，然后根据试验方法测定芦丁标准液的荧光
强度，考察不同 AlCl3 用量对芦丁标准液荧光强度的影响。
1． 2． 5 静置时间对荧光强度的影响。将芦丁标准液静置于
室内，避免阳光直射，于不同时间测定溶液的荧光强度，考察
静置时间对荧光强度的影响。
1． 2． 6 方法学考察。①线性关系的考察和检出限的测定。
将配制好的系列标准工作溶液按试验方法进行测定，以荧光
强度为纵坐标 Y，芦丁浓度(μg /ml)为横坐标 X绘制芦丁的
工作曲线。在相同条件下对空白溶液平行测定 11 次，以 10
σ /k计算芦丁的定量下限，以 3 σ /k计算芦丁的检出限。③
回收率试验。取适量样品溶液，分别向其中加入 5、10 和 15
μl的标准溶液，计算样品的平均回收率和 RSD。
1． 2． 7 样品的含量测定。在激发及发射通带均为 10 nm、激
发波长为 λex = 435 nm、发射波长 λem = 490 nm条件下测定芦
丁标准工作溶液的荧光强度，以荧光强度相对应的浓度绘制
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(17):9260 － 9261
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.17.050
工作曲线，以相同条件测定样品中总黄酮的荧光强度，再用
回归方程计算含量。
2 结果与分析
2． 1 荧光光谱的扫描 由图 1 可知，最大激发波长为 435
nm，最大发射波长为 490 nm，激发光谱和发射光谱峰型对
称，最大荧光强度基本相等。
图 1 芦丁的荧光光谱
2． 2 AlCl3 用量对芦丁标准液荧光强度的影响 由图 2 可
知，随着浓度 0． 01 % AlCl3 甲醇溶液加入量的增加，荧光强
度增强;当加入量在 0． 6 ～ 1． 0 ml 时，荧光强度的增加不明
显。因此试验选择 AlCl3 甲醇溶液的加入量为 0． 6 ml。
图 2 AlCl3 用量对荧光强度的影响
2． 3 静置时间对荧光强度的影响 由图 3 可知，溶液的荧
光强度在 1 h内呈平缓下降趋势(RSD = 0． 79%) ，故试验选
择静置 20 min后进行测定。
2． 4 方法学考察 ①线性关系的考察和检出限的测定。结
果表明，线性回归方程为Y =39． 74X +10． 41，表明荧光强度
图 3 静置时间对荧光强度的影响
与芦丁浓度在 0． 003 95 ～5． 0 μg /ml范围内具有良好的线性
关系，相关系数 R =0． 998 4，方法的检出限为 1． 19 μg /L。②
加样回收试验。由表 1可知，瑞香狼毒中总黄酮含量的平均
回收率为 99． 15%，表明该方法准确性好，可用于瑞香狼毒中
总黄酮的含量测定。
表 1 样品回收率实验结果
样品
原含量
μg /ml
加入量
μg /ml
测定值
μg /ml
回收率
%
平均回
收率∥%
1 1． 823 1 2． 794 98． 97
2 1． 823 2 3． 853 100． 78 99． 15
3 1． 823 3 4． 712 97． 70
2． 5 样品的含量测定 测得瑞香狼毒中总黄酮的含量为
1． 310%，RSD为 0． 51%。
3 结论
采用荧光分光光度法测定瑞香狼毒中总黄酮的含量，方
法准确性、线性关系和重现性都较好，检出限达到 1． 19
μg /L。而且该方法操作简便，AlCl3 用量低，分析成本低，具
有良好的分析应用前景。
参考文献
［1］卓兆莲，高英，李卫民．蒙药瑞香狼毒的生物活性及毒副作用研究［J］．
中国现代中药，2007，9(12):32 －34．
［2］霍强，王宇，高荣远，等．瑞香狼毒总黄酮的提取及体外抗氧化作用研
究［J］．畜牧与饲料科学，2010，31(2):83 －84．
［3］王敏，贾正平，马骏，等．瑞香狼毒总黄酮提取物的抗肿瘤作用［J］．中
国中药杂志，2005，30(8):603 －606．
［4］吴晓亮，韩敏，刘晓松，等．不同瑞香狼毒提取物对肝癌细胞的抑制作
用［J］．畜牧与饲料科学，2009，30(9):
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
5 －6．
(上接第 9259页)
［33］柴民伟，石福臣，马妍，等．药用植物浸提液抑制蛋白核小球藻生长的
化感效应［J］．生态学报，2010，30(18):4960 －4966．
［34］戚建华，梁银丽，梁宗锁．农业生态系统中化感作用研究综述［J］．西
北农业学报，2004，13(2):l15 －118．
［35］陈礼玲，庞珂佳，李同臣，等．角茴香根和地上部水浸液对杂草反枝苋
的化感作用［J］．西北林学院学报，2011，26(1):138 －142．
［36］刘淑超，廖周瑜，何黎，等．伴生植物青蒿及龙须草对紫茎泽兰化感效
应的研究［J］．安徽农业科学，2010，38(12):6167 －6168，6173．
［37］王千，覃逸明，黄雨清，等．益母草(Leonurus heterophyllus Sweet)化感作
用的初步研究［J］．安徽师范大学学报:自然科学版，2009，32(5):461
－465．
［38］赵杨景．植物化感作用在药用植物栽培中的重要性和应用前景［J］．
中草药，2000，31(8):81 －84．
［39］王荣秀，李永良，刘国强，等．退耕还林(草)林药复合模式中草药栽培
技术［J］．青海农林科技，2004(4):71 －72．
［40］王冬梅，李登武，朱玮，等．卷叶黄精根不同极性化感物质的化感作用
［J］．林业科学，2007，43(10):145 －149．
［41］董强，杨顺义，王琰，等．黄花棘豆水浸提液对 4种受体植物的化感作
用研究［J］．湖南农业科学，2010(9):7 －10．
［42］游佩进，王文全，张媛，等．三七根区土壤提取物对三七幼苗的化感作
用［J］．西南农业学报，2009(2):308 －310．
［43］MIAO L，DONG K M，LI N，et al． Antialgal activities of allelochemical ex-
tracts from 3 terrestrial plant species［J］． Agricultural Science ＆ Technol-
ogy，2010，11(7):20 －28．
［44］董林林，李振东，王倩．大蒜鳞茎浸提液对黄瓜幼苗的化感作用［J］．
华北农学报，2008(S2):47 －50．
［45］徐高峰，张付斗，李天林，等． 5种植物对薇甘菊化感作用研究［J］．西
南农业学报，2009(5):1439 －1443．
162940 卷 17 期 罗喜荣等 荧光分光光度法测定瑞香狼毒中总黄酮的含量