全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2016，31(3)∶281 ～ 285
基金项目:广东省公益研究与能力建设专项(2014A020208133);广东省科技计划项目(粤科规划字［2013］137 号)
作者简介:程轩轩(1978—)，女，博士，从事中药有效成分与药理活性的研究工作。Email:gdyxycxx@ 126． com
* 通信作者(Correspondent author)，Email:p39352353@ 126． com
酶解 －吸附澄清法提取水辣蓼总黄酮的工艺优化
程轩轩，唐晓敏，杨 全，梁肖芳，潘育方* ，张春荣
(广东药科大学 岭南药材生产与开发重点研究室，广东 广州 510006)
摘要:目的 优化酶解 －吸附澄清法提取水辣蓼总黄酮的工艺。方法 采用响应面法，构建多元二次回归数学模型，筛选酶
法提取和絮凝澄清的最佳工艺条件。结果 最佳酶法提取工艺为料液比 1∶50，pH6． 06，复合酶用量 0． 24 %，酶解温度
50 ℃，酶解时间 1． 62 h;最佳澄清工艺为酶解液的浓缩比 1∶5，药液 pH5． 24，膨润土用量 0． 45 mL·g －1，43． 43 ℃下絮凝
40 min。结论 酶法提取条件温和，膨润土絮凝能有效降低酶解液中总固形物的含量，优于传统醇沉法。
关键词:水辣蓼;总黄酮;酶解 －吸附澄清法;纤维素酶;果胶酶;膨润土;响应面法;絮凝
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2016)03 － 0281 － 05
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2016． 03． 021
Optimization of the extraction technology for the total flavonoids from Polygonum hydropiper
by Enzyme hydrolyzing and flocculating method
CHENG Xuanxuan，TANG Xiaomin，YANG Quan，LIANG Xiaofang，PAN Yufang* ，ZHANG Chunrong
(Key Laboratory of State Administration for Production ＆ Development of Cantonese Medicinal Materials，Guangdong Pharmaceutical
University，Guangzhou，Guangdong 510006 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To optimize extraction technology of total flavonoids from Polygonum hydropiper by Enzyme hydrolyzing and
flocculating method．METHODS Ｒesponse surface method was used to establish quadratic polynomial mathematical models for the
optimization of extraction process and clarification conditions． ＲESULTS Optimum enzymatic extraction conditions were as follows:
liquid /solid ratio of 1∶50，pH of 6． 06，composite enzyme amount of 0． 24%，temperature of 50 ℃ and time of 1． 62 h． The best
flocculation conditions were as follows:extract concentrated ratio of 1∶5，pH value of 5． 24，bentonite solution amount of 0． 45 mL·
g －1，temperature of 43． 43 ℃ and time of 40 min． CONCLUSION The extraction condition of enzymatic method is mild． Bentonite
clarification process is superior to the traditional method of water extraction and alcohol precipitation．
Key words:Polygonum hydropiper;Total flavonoids;Enzyme hydrolyzing and flocculating method;Cellulase;Pectase;Bentonite;
Ｒesponse surface method;Flocculation
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2016)03 － 0281 － 05
蓼科水辣蓼 Polygonum hydropiper L． 的干燥全
草具有抗微生物、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种生物
活性［1］，临床上用于治疗痢疾、腹泻、跌打肿痛等
症［2］。水辣蓼中的黄酮类成分是其抗氧化作用的
物质基础，也是控制药材质量的指标成分［3］。中药
提取的传统方法为水煎煮，其反应条件剧烈。鉴于
酶法提取条件温和，效率较高，利于保持天然产物的
构象及生物活性［4］，故通过响应面法对酶解 －吸附
澄清法提取水辣蓼总黄酮的工艺进行优化，可为水
辣蓼总黄酮的工业化生产和资源开发提供依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
UV －2450 紫外分光光度计(日本岛津);PHS －
25 型数字 pH 计(上海盛磁仪器有限公司)。水辣
蓼购自广西玉林中药材市场，经鉴定为蓼科水辣蓼
Polygonum hydropiper L．的全草;3 × 104U·g －1纤维素
酶、2 × 104 U·g －1果胶酶(上海蓝季科技发展有限公
司);芦丁对照品(上海金穗生物科技有限公司，批
号:20130509，纯度 ＞ 98%);水为蒸馏水;其余试剂
为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 标准曲线的绘制 精密称取芦丁对照品
3. 7 mg，用 30%乙醇溶解，定容至 25 mL，制成 0． 148
mg·mL －1的芦丁对照品贮备液。分别吸取 0、1． 0、
1． 5、2. 0、2． 5、3． 0、3． 5、4． 0 mL 上述贮备液，置 10
mL量瓶中，依次加入 30%乙醇 1 mL、5% NaNO2 溶
液 0． 3 mL，摇匀后放置 10 min;加入 10% Al(NO3)3
溶液 0． 3 mL，摇匀后放置 10 min;加入 4% NaOH 溶
液 2． 0 mL，再用 30%乙醇定容至 10 mL，摇匀后静
置 15 min，于 510 nm处测定吸光度。以吸光度为纵
坐标、总黄酮浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方
程为:Y = 13． 345X + 2 × 10 －3(r = 0． 9996)，芦丁
14. 8 ～ 59． 2 μg·mL －1与吸光度的线性关系良好。
1. 2. 2 总黄酮酶解液的制备 精密称取干燥的水
辣蓼粉末(过 3 号筛)1 g，置具塞锥形瓶中，以水为
溶剂，在适宜的料液比、复合酶、pH 值、温度等条件
下于水浴锅中酶解，酶解结束后于沸水浴中灭酶
2 min，过滤，浓缩，定容。
1. 2. 3 酶解液的絮凝方法 精密称取 5 g 膨润土，
用 100 mL蒸馏水浸泡 24 h，使之充分吸水分散成胶
体悬浮液，即得 5%膨润土悬浮液。称取干燥的水
辣蓼粉末(过 3 号筛)300 g，按照“1. 2. 6”项下响应
面法优化的最佳提取工艺于水浴锅中酶解，酶解液
经过滤后浓缩至生药浓度为 0． 2 g·mL －1。精密量
取上述浓缩液 25 mL，置具塞锥形瓶中，加入适量膨
润土溶液，以 40 r·min －1磁力搅拌 10 min，在适宜的
时间、pH、温度等条件下于水浴锅中絮凝，离心后吸
取上清液测定固形物的收率、总黄酮的含量及总黄
酮的保留率。
1． 2． 4 总黄酮含量、保留率和固形物收率的测定
精密量取“1． 2． 2”“1． 2． 3”项下水提液适量，置 10
mL量瓶中，按“1． 2． 1”项方法依次加入 5% NaNO2、
10%Al(NO3)3、4% NaOH 显色，定容，于 510 nm 处
测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮的含量，计
算总黄酮的保留率［絮凝后药液总黄酮的量(mg)/
絮凝前药液总黄酮的量(mg)× 100%］［6］。精密量
取“1． 2． 3”项下各样品液 20 mL，置干燥至恒重的蒸
发皿中，水浴中蒸干后于 105 ℃烘箱中干燥至恒重，
在干燥器中放置 30 min，迅速称重，与絮凝处理前样
品液中的固形物相比，计算固形物的收率［6］。
1． 2． 5 总黄酮提取率影响因素的考察 精密称取
水辣蓼粉末 6 份，每份 1 g，置具塞锥形瓶中，其中，5
份样品中分别加入 1%纤维素酶、果胶酶、复合酶 1
［纤维素酶 － 果胶酶(3∶2)］、复合酶 2［纤维素
酶 －果胶酶(1∶1)］和复合酶 3［纤维素酶 －果胶
酶(2∶3)］。按料液比 1∶20 加入蒸馏水中，用盐
酸调至 pH4. 5，于 45 ℃水浴中酶解 2 h，沸水灭酶
2 min，趁热过滤，定容至 25 mL。其余操作同
“1. 2. 4”项方法，计算得各组样品中总黄酮的含量
分别为 8． 33 mg·g －1(无酶)、8． 64 mg·g －1(纤维素
酶)、9． 05 mg·g －1(果胶酶)、9． 40 mg·g －1(复合酶
1)、9． 20 mg·g －1(复合酶 2)、9． 81 mg·g －1(复合酶
3)。结果表明:同等工艺条件下加入酶可提高总黄
酮的得率，比较不同酶的酶解效果，最终选用复合酶
3 作为本次实验用酶。精密称取水辣蓼粉末 6 份，
每份 1 g，置具塞锥形瓶中，分别按 1∶20、1∶30、
1∶40、1∶50、1∶60、1∶70 的料液比加入蒸馏水，
在复合酶 3 用量 1%、pH4． 5、45 ℃水浴下酶解 2 h，
其余操作同“1． 2． 4”项。计算得各组样品中总黄酮
的含量分别为 8． 18、12． 46、13. 87、15. 05、15． 47、
15. 70 mg·g －1。随着料液比的增加，黄酮的提取量
呈上升趋势，但当料液比达到 1∶50 后，总黄酮量的
增加趋于平缓，说明黄酮的浸出已达动态平衡。为
节约成本，降低浓缩负荷，最佳料液比定为 1∶50。
精密称取水辣蓼粉末 6 份，每份 1 g，置具塞锥形瓶
中，加蒸馏水 50 mL，在复合酶用量 1%、pH4． 5、
45 ℃水浴条件下分别酶解 0． 5、1. 0、1. 5、2． 0、2． 5、
3． 0 h，其余操作同“1． 2． 4”项。计算得各组样品中
总黄酮的含量分别为 11. 71、15． 08、15． 79、13． 94、
12． 64、15． 05 mg·g －1。因此，确定 1． 5 h 为适宜的
酶解时间。精密称取水辣蓼粉末 6 份，每份 1 g，置
具塞锥形瓶中，复合酶用量 1%，加蒸馏水 50 mL，分
别用盐酸调 pH 至 3． 5、4． 5、5． 5、6. 0、6． 5、7． 0，于
45 ℃水浴中酶解 1． 5 h，其余操作同“1． 2． 4”项。计
算得各组样品中总黄酮的含量分别为 20． 69、
21. 81、21． 59、22． 08、21． 78、21． 66 mg·g －1。由此确
定最适 pH值为 6． 0。精密称取水辣蓼粉末 6 份，每
份 1 g，置具塞锥形瓶中，分别按 0． 2%、0. 3%、
0. 5%、1． 0%、1． 5%、2． 0%用量加入复合酶 3，料液
比 1∶50，于 pH6． 0、45 ℃水浴条件下酶解 1. 5 h，其
余操作同“1． 2． 4”项。计算得各组样品中总黄酮的
含量分别为 22． 94、23． 35、21. 96、22． 01、20． 93、
19. 45 mg·g －1。由此确定复合酶用量为 0. 3%。精
密称取水辣蓼粉末 6 份，每份1 g，置具塞锥形瓶中，
加入蒸馏水 50 mL，在复合酶用量 0． 3%、pH6． 0 条
件下分别于 35、40、45、50、55、60 ℃酶解 1. 5 h，其余
操作同“1． 2． 4”项。计算得各组样品中总黄酮的含
量分别为 18． 93、21． 21、21. 49、23． 33、22． 97、22． 63
mg·g －1。由此确定适宜酶解温度为50 ℃。
1． 2． 6 响应面法优化总黄酮的酶解工艺［5］ 根据
Design Expert 8． 0． 5 软件中的 BBD 设计原理，综合
单因素实验结果，选取酶解时间、pH、酶用量 3 个主
要因素，采用 3 因素 3 水平响应面分析法(表 1、2)，
建立影响因素和水辣蓼总黄酮含量 Y(mg·g －1)之
间的多元二次回归 模 型 为:Y = 23． 8352 +
0． 5188A + 0. 1897B － 0． 2703C － 0． 3014AB +
0. 0327AC － 0. 1967BC － 0． 9862A2 － 0． 7454B2 －
0. 5177C2。式中，A、B、C 分别代表酶解时间(h)、药
液 pH、复合酶用量(%)。由表 3 可知:模型的
282 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷
Prob ＞ F 值小于1 × 10 －4，表明二次方程模型极显
著。失拟相 P = 0. 0878 ＞ 0． 05，说明模型不存在失
拟因素，实验结果与数学模型拟合良好。 r2 =
0. 9856(r2Adj = 0． 9671)，表面响应面 96． 71%的变化
可以由此模型解释。变异系数 CV = 0． 69，说明其置
信度较高。由 Prob ＞ F值可知:B、BC为二次回归模
型的显著性因素(P ＜ 0． 05);A、C、AB、A2、B2、C2 为
二次回归模型的极显著性因素(P ＜ 0． 01)。各因素
对水辣蓼总黄酮提取效果的影响次序为:酶解时
间 ＞酶用量 ＞药液 pH。由响应面分析得到理论最
佳提取工艺参数为:料液比 1∶50，pH 6． 06，复合酶
用量为 0． 24%，酶解温度 50 ℃，酶解时间 1． 62 h。
在此条件下，重复实验 5 次，水辣蓼总黄酮的提取量
为 22． 18 mg·g －1，与预测值(23． 95 mg·g －1)的符合
度为 93%。
表 1 酶解工艺的因素与水平
Table 1 Factors and levels of enzyme hydrolyzing technology
Levels A /h B C /%
－1 1． 0 5． 5 0． 1
0 1． 5 6． 0 0． 3
1 2． 0 6． 5 0． 5
表 2 酶解工艺的响应面分析方案及结果
Table 2 Design scheme and results of response surface analysis for
the enzyme hydrolyzing technology
No． A B C Total flavonoids /mg·g － 1
1 2． 0 6． 0 0． 5 22． 54
2 1． 0 6． 0 0． 5 21． 51
3 1． 0 6． 5 0． 3 21． 92
4 1． 5 6． 0 0． 3 23． 91
5 1． 0 5． 5 0． 3 21． 18
6 2． 0 6． 0 0． 1 23． 09
7 1． 5 6． 5 0． 1 23． 31
8 2． 0 5． 5 0． 3 22． 89
9 1． 5 6． 5 0． 5 22． 45
10 2． 0 6． 5 0． 3 22． 43
11 1． 5 6． 0 0． 3 23． 83
12 1． 5 6． 0 0． 3 23． 69
13 1． 0 6． 0 0． 1 22． 19
14 1． 5 5． 5 0． 1 22． 30
15 1． 5 6． 0 0． 3 23． 81
16 1． 5 5． 5 0． 5 22． 23
17 1． 5 6． 0 0． 3 23． 94
1． 2． 7 絮凝工艺酶解液浓缩比的选择 取酶解液
浓缩比［生药量(g)/药液体积(mL)］为 1∶2、1∶5、
1∶10、1∶15、1∶20 的酶解液各 25 mL，调 pH6. 0，
按膨润土溶液体积 /生药量为 1 mL·g －1(下同)加入
膨润土溶液，用磁力搅拌器搅拌 10 min，于 50 ℃水
浴中放置 2 h。在室温下静置 24 h 后，分离膨润土
与沉淀物，观察药液的澄清情况，并按“1． 2． 4”项下
方法测定并计算各组样品中总黄酮的保留率分别为
85. 38%(有浑浊)、87． 32% (澄清)、88． 60% (澄
清)、88． 88%(澄清)、90． 18%(澄清);固形物收率
表 3 酶解工艺的回归模型方差分析
Table 3 Anova for response surface quadratic model for the
enzyme hydrolyzing technology
来源 平方和 自由度 均方 F Prob ＞ F
模型 11． 9236 9 1． 3248 53． 1781 ＜ 1 × 10 － 4
A 2． 1535 1 2． 1535 86． 4401 ＜ 1 × 10 － 4
B 0． 2880 1 0． 2880 11． 5598 0． 0114
C 0． 5843 1 0． 5843 23． 4540 1． 9 × 10 － 3
AB 0． 3634 1 0． 3634 14． 5853 6． 6 × 10 － 3
AC 4． 276 × 10 － 3 1 4． 276 × 10 － 3 0． 1716 0． 6911
BC 0． 1548 1 0． 1548 6． 2123 0． 0414
A2 4． 0951 1 4． 0951 164． 3746 ＜ 1 × 10 － 4
B2 2． 3396 1 2． 3396 93． 9093 ＜ 1 × 10 － 4
C2 1． 1284 7 1． 1284 45． 2918 3 × 10 － 4
残差 0． 1744 7 0． 0249 － －
失拟相 0． 1351 3 0． 0450 4． 5826 0． 0878
纯误差 0． 0393 4 9． 826 × 10 － 3 － －
总和 12． 0980 16
分别为 40． 27%、36． 22%、33． 11%、31． 44%、
30. 55%。药液浓度过高则溶液黏稠，加入絮凝剂
后，不利于大分子化合物的分散［6］，故澄清效果较
差。药液浓度较稀则澄清效果较好，且总黄酮保留
率较高，但后续处理较为复杂。由此选择酶解液的
适宜浓缩比为 1∶5。
1． 2． 8 絮凝剂用量、絮凝时间、絮凝温度和药液 pH
的考察 精密量取“1． 2． 3”项下浓缩液各 5 份，每
份 25 mL，置具塞锥形瓶中，调 pH6． 0，分别按 0. 25、
0． 5、1． 0、1． 5、2． 0 mL·g －1加入膨润土溶液，其余操
作同“1． 2． 4”项。观察各组药液的澄清情况并计算
总黄酮含量 (总黄酮保留率)分别为 21. 25
(90. 42%，微有浑浊)、21． 59(91． 86%，澄清)、
20. 73(88． 19%，澄清)、19． 87(84． 52%，澄清)、
19. 30(82． 13%，澄清)mg·g －1;固形物收率分别为
37. 11%、35． 78%、34． 22%、32． 89%、30． 02%。故
膨润土的加入量以 0． 5 mL·g －1为宜。精密量取
“1. 2. 3”项下浓缩液各 5 份，每份 25 mL，置具塞锥
形瓶中，调 pH6． 0，按 0． 5 mL·g －1加入膨润土溶液，
用磁力搅拌器搅拌 10 min，于 50 ℃水浴中分别放置
20、40、60、80、100 min，其余操作同“1． 2． 4”项。计
算得各组样品中总黄酮含量(总黄酮保留率)分别
为 20. 46 (91. 96%)、20． 65 (92． 81%)、20． 28
(91. 13%)、20． 16(90． 60%)、20． 13(90． 45%)mg·
g －1;固形物收率分别为 38． 26%、39． 28%、40． 14%、
39． 13%、36. 38%。因此，确定最佳絮凝时间为 40
min。精密量取“1． 2． 3”项下浓缩液各 5 份，每份 25
mL，置具塞锥形瓶中，调 pH5． 0，按 0． 5 mL·g －1加入
膨润土溶液，用磁力搅拌器搅拌 10 min，分别于 30、
40、50、60、70 ℃水浴中放置 40 min，其余操作同
“1. 2. 4”项。计算得各组样品中总黄酮的含量(总
黄酮保留率)分别为 19. 60 (89． 64%)、20． 20
382第 3 期 程轩轩，等。酶解 －吸附澄清法提取水辣蓼总黄酮的工艺优化
(92. 38%)、19. 79(90． 49%)、19． 19(87． 75%)、
19. 87(90. 84%)mg·g －1;固形物收率分别为
40. 13%、42. 40%、44． 13%、39． 33%、41． 33%。因
此，选择40 ℃为最佳絮凝温度。精密量取“1． 2． 3”
项下浓缩液各 5 份，每份 25 mL，置具塞锥形瓶中，
分别调 pH为 3． 0、4． 0、5． 0、6． 0、7． 0，按 0． 5 mL·g －1
加入膨润土溶液，用磁力搅拌器搅拌 10 min，于
40 ℃水浴中放置40 min，其余操作同“1． 2． 4”项。
计算得到各组样品中总黄酮的含量(总黄酮保留率)
分别为 15． 07(75. 08%)、16． 91(84． 23%)、18． 37
(91. 51%)、15. 56(77． 51%)、18． 21(90． 73%)mg·
g －1;固形物收率分别为 43． 10%、40． 56%、38． 45%、
31. 68%、36． 62%。因此，选择适宜的药液 pH为 5． 0。
1． 2． 9 响应面法优化酶解液的絮凝工艺 根据单
因素实验结果，选取膨润土用量、药液 pH、絮凝温度
3 个主要因素，采用 3 因素 3 水平响应面分析法(表
4、5)。利用 Design Expert 8． 0． 5 软件，建立影响因
素和水辣蓼总黄酮含量之间的数学模型为:Y =
22. 8180 － 0． 1700A + 0． 9686B + 0． 1108C －
0. 2987AB + 0． 1328AC + 0． 4553BC － 0． 5187A2 －
2. 5063B2 － 0. 2815C2。式中，A、B、C 分别为膨润土
用量(mL·g －1)、药液 pH 和絮凝温度(℃)。由表 6
可知:二次方程模型的 Prob ＞ F 值小于 1 × 10 －4，说
明此实验方法可靠。失拟相 P = 0． 1364 ＞ 0． 05，表
明模型不存在失拟因素，可用该二次多项式方程模
拟实验真实点。回归模型的 r2 = 0． 9964(r2Adj =
0. 9919)，变异系数 CV = 0． 65，说明模型的置信度较
高，进一步证实模型的拟合性良好。由Prob ＞ F 值
可知:A为二次回归模型的显著性因素(P ＜ 0． 05);
B、AB、BC、A2、B2、C2 为二次回归模型的极显著性因
素(P ＜ 0． 01)。各因素对酶解液絮凝效果的影响次
序为:药液 pH ＞膨润土用量 ＞絮凝温度。图 1 为各
因素对响应值(总黄酮含量)影响的响应面图。各
因素间的交互作用可由曲面的陡度和等高线的形状
及密度进行判断。等高线以近椭圆形且比较密集，
三维响应曲面陡峭，表明各因素间交互作用明显。
图 1 中分别将温度、膨润土用量、药液 pH 固定在 0
水平，可以看出膨润土用量和药液 pH 之间、药液
pH与絮凝温度之间存在明显的交互作用，此结论亦
与方差分析结果(P ＜ 0． 01，表 6)吻合。用响应面分
析计算出最佳絮凝工艺参数为:酶解液浓缩比为1∶
5，药液 pH5． 24，膨润土用量为 0． 45 mL·g －1，于
43. 43 ℃下絮凝 40 min。在此条件下，重复实验 5
次，水辣蓼酶解液经絮凝澄清后总黄酮的平均含量
为 21． 55 mg·g －1，与预测值(22． 97 mg·g －1)极为接
近，总黄酮的保留率为 92． 54%。
表 4 絮凝工艺的因素与水平设计
Table 4 Factors and levels of flocculation technology
Levels A /mL·g － 1 B C /℃
－1 0． 25 4． 0 30
0 0． 50 5． 0 40
1 0． 75 6． 0 50
表 5 絮凝工艺的响应面分析方案及结果
Table 5 Design scheme and results of response surface analysis for
flocculation technology
No． A B C Total flavonoids /mg·g － 1
1 0． 75 5． 0 30 21． 69
2 0． 50 4． 0 50 18． 87
3 0． 25 5． 0 50 22． 08
4 0． 50 5． 0 40 22． 71
5 0． 50 4． 0 30 19． 42
6 0． 50 5． 0 40 22． 75
7 0． 50 5． 0 40 22． 86
8 0． 25 5． 0 30 22． 26
9 0． 50 5． 0 40 22． 96
10 0． 50 5． 0 40 22． 81
11 0． 25 6． 0 40 21． 33
12 0． 75 6． 0 40 20． 36
13 0． 50 6． 0 50 21． 55
14 0． 75 4． 0 40 18． 85
15 0． 25 4． 0 40 18． 63
16 0． 50 6． 0 30 20． 28
17 0． 75 5． 0 50 22． 04
23
22
21
20
19
18
6.00
5.50
5.00
4.50
4.00 0.25
0.35
0.55
0.45
0.650.75
加入量pH 温度 pH4.00
4.50
5.00
6.00
5.50
30.00
35.00
40.00
45.00
50.00
23
22
21
20
19
18
23
22
21
20
19
18
30.00
35.00
40.00
45.00
50.00
0.25
0.35
0.55
0.45
0.650.75
加入量温度
A B C
总
黄
酮
/m
g·
g-
1
图 1 膨润土用量和药液 pH(A)、药液 pH和温度(B)、膨润土用量和温度(C)对总黄酮含量的响应曲面图
Figure 1 3D response surface maps of bentonite amount and pH(A)，pH and temperature(B)，bentonite amount and temperature(C)on the
flovonoids yield
482 华 西 药 学 杂 志 第 31 卷
表 6 絮凝工艺的回归模型方差分析
Table 6 Anova for response surface quadratic model for the
flocculation technology
数据来源 平方和 自由度 均方 F Prob ＞ F
模型 38． 1824 9 4． 2425 220． 6667 ＜ 1 × 10 －4
A膨润土用量 0． 2312 1 0． 2312 12． 0255 3． 5 × 10 －3
B药液 pH 7． 5058 1 7． 5058 390． 4005 ＜ 1 × 10 －4
C温度 0． 0982 1 0． 0982 5． 1077 0． 0583
AB 0． 3569 1 0． 3569 18． 5630 0． 035
AC 0． 0706 1 0． 0706 3． 6697 0． 0969
BC 0． 8291 1 0． 8291 43． 1265 3 × 10 －4
A2 1． 1329 1 1． 1329 58． 9280 1 × 10 －4
B2 26． 4474 1 26． 4474 1． 3756 × 103 ＜ × 10 －4
C2 0． 3336 1 0． 3336 17． 3528 0． 042
残差 0． 1349 7 0． 0192 － －
失拟相 0． 0963 3 0． 0321 3． 3558 0． 1364
纯误差 0． 0383 4 9． 567 × 10 －3 － －
总和 38． 3170 16 － － －
1． 2． 10 絮凝工艺与醇沉工艺的比较 精密量取
“1． 2． 3”项下水辣蓼浓缩液 3 份，每份 25 mL，分别
加入无水乙醇，使得含醇量达到 70%，室温下静置
24 h后，过滤，回收乙醇，将滤液浓缩至 25 mL，测定
总黄酮的含量为 14． 43 mg·g －1，总黄酮的保留率为
66． 38%。实验表明:膨润土絮凝法和醇沉法的澄清
工艺效果相当，但前者在总黄酮含量(21． 55 mg·
g －1)及保留率(92． 54%)方面明显优于后者。且醇
沉工艺的乙醇用量大，沉降耗时长，不利于生产效率
的提高。
2 讨论
水煎煮提取中药反应条件剧烈，易破坏化合物
的结构。为验证酶法提取的优越性，文中比较了酶
解法(最佳酶解工艺条件)和煎煮法(沸水浴提取
1 h)对水辣蓼总黄酮的提取效果。两组药液中总黄
酮含量分别为 22． 18、29． 73 mg·g －1。因此，酶解法
的提取效率与传统煎煮法相当，且操作安全，反应条
件温和。中药水提液在制剂生产过程中常采用水提
醇沉的澄清工艺，需要消耗大量乙醇，生产成本高，
有效成分损失大。膨润土是天然无毒的絮凝剂，沉
降速度较快，絮凝剂用量少，絮凝周期短。文中证实
了酶解 －吸附澄清法能较好地保留水辣蓼中的总黄
酮成分，是一种有效提取及精制中药的方法。
参考文献:
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收稿日期:
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2014 － 11 － 06
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582第 3 期 程轩轩，等。酶解 －吸附澄清法提取水辣蓼总黄酮的工艺优化