全 文 ：119(Pt11):2204-13.
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〔2009-12-31收稿　 2010-03-18修回〕
(编辑　曲　莉)
白花败酱草提取物对小鼠 U14宫颈癌细胞的抑制作用
陈　磊　张　涛　田黎明　陈　萍　王东伟　卢春凤　闫冬梅　
(佳木斯大学医学院 ,黑龙江　佳木斯　154007)
　　〔摘　要〕　目的　研究白花败酱草水提液对小鼠移植性宫颈癌的抑制作用及其机制。方法　观察败酱草大 、小两个剂量水提液对 U14荷瘤小
鼠肿瘤生长的抑制率及胸腺和脾腺指数的影响;采用比色分析法检测血清中总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)
的变化;采用 HE染色 ,光镜下观察败酱草诱导肿瘤组织细胞分化的程度。结果　高 、低剂量败酱草水提液均可抑制 U14宫颈癌细胞的生长 ,抑瘤率
分别为 42.3%、41.75%;同时荷瘤鼠胸腺和脾腺指数明显降低(P<0.01);败酱草水提液可降低 U14荷瘤鼠血清 MDA水平(P<0.01), 提高 T-AOC
和 SOD活性(P<0.01)。 HE染色后 ,败酱草水提液能在一定程度上改善肿瘤组织形态。结论　白花败酱草水提液具有抗 U14宫颈癌的作用。其机
制可能与调节小鼠免疫功能 ,增强抗氧化防御系统酶活性有关。
〔关键词〕　白花败酱草;U14荷瘤鼠;抗肿瘤
〔中图分类号〕　R737.33　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2010)08-1091-03
基金项目:黑龙江省自然基金资助项目(D2007-77);黑龙江省教育厅资
助项目(11531373)
通讯作者:张　涛(1964-),女 ,教授 ,硕士生导师 , 博士 , 主要从事植物
药抗肿瘤与抗衰老研究。
第一作者:陈　磊(1976-),女 ,主治医师 , 硕士 ,主要从事中药抗肿瘤作
用与机制研究。
　　白花败酱草是败酱科草本植物的带根全草 ,是一种常用植
物药 〔1～ 3〕。民间验方中与其他中药配伍 ,用于治疗肠癌和膀胱
癌。但有关白花败酱草水提液在抗肿瘤方面的作用及其机制 ,
国内外尚未见报道。
1　材料与方法
1.1　动物与试剂　6周龄昆明种小鼠 , 体重 20 ～ 22 g, 中国医
学科学院实验动物研究所繁育场提供 , 室温(20±2)℃环境中
颗粒食料喂养 , 自由饮水。环磷酰胺(CTX)购于山西泰盛制药
有限公司 , U14小鼠宫颈癌细胞株购于中国医学科学院细胞库。
白花败酱草购于佳木斯中医院中药局 ,经鉴定符合药典标准。
1.2　方法
1.2.1　白花败酱草水提液的制备　取败酱草 100 g适当粉碎
后 , 10倍体积蒸馏水浸泡 3h,煮沸提取 60 min, 收集药液 ,药渣
再用水煮 30min,合并 2次药液 ,经 50℃减压浓缩 ,真空干燥箱
放置 , 得败酱草水粗提物固体干粉。 4℃冰箱保存 , 临用前蒸馏
水稀释为含生药浓度 3.5 g/ml。
1.2.2　模型建立　50只小鼠随机分为分别是瘤源鼠组 、白花
败酱草水提液低剂量组(10g/kg)、高剂量组(15g/kg)、CTX组
及对照组每组 10只。 瘤源组鼠腹腔注射 U14细胞株 , 每只鼠
0.2ml, 制造腹水型瘤源鼠 ,此鼠腹腔注射 7 d后在无菌条件下
吸取腹腔中的腹水型瘤细胞 , 稀释成 1.6 ×106个 /ml, 常规无
菌条件下给其余 4组小鼠每只左前腋下接种 0.2 ml瘤细胞。
在接种瘤细胞 24h后 , 开始按 10 mg/kg和 15 mg/kg给鼠灌服
白花败酱草水提液 , 对照组每天灌服同剂量的蒸馏水;CTX组
按 25mg/kg腹腔注射 CTX;连续 14 d,第 15天小鼠断髓处死 ,
称量体重和瘤重。
1.2.3　检测指标　(1)肿瘤抑制率 =(C-T)/C×100%, C和
T表示对照组和治疗组的平均瘤重。 (2)胸腺指数 =10×胸腺
重量(mg)/体重(g)×100%, 脾脏指数 =10 ×脾脏重量(mg)/
体重(g)×100%。 (3)血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物
歧化酶(SOD)活性 、丙二醛(MDA)含量的测定:小鼠摘眼球取
血 , 离心分离血清备用 , 各指标采用比色法按试剂盒说明进行
检测。 (4)肿瘤细胞形态学的观察:对照组 、水提液组
(15g/kg)及 CTX组的瘤体被固定在 10%甲醛中做石蜡包埋
切片 , HE染色 ,光镜下观察细胞形态。
1.3　统计学处理　数据采用 x±s表示 ,组间差异采用 t检验。
2　结　果
2.1　白花败酱草水提液对 U14荷瘤鼠的抑瘤作用　见表 1。
高 、低剂量败酱草水提液和 CTX均能降低瘤体的重量。 各实
验组瘤体平均重量明显低于对照组(P<0.01), 肿瘤组织生长
的抑制率分别为 41.75%、42.30%和 44.21%。
2.2　白花败酱草水提液对 U14荷瘤鼠胸腺 、脾腺重量的影响　
水提液高剂量组 、CTX与对照组比较胸腺和脾腺的重量明显降
低(P<0.01)。见表 2。
2.3　白花败酱草水提液对 U14荷瘤鼠血清 T-AOC、SOD、MDA
含量的影响　败酱草水提液和 CTX均可降低 U14荷瘤鼠血清
MDA水平 , 同时提高 T-AOC和 SOD活性 (均 P<0.01)。
见表 3。
·1091·陈　磊等　白花败酱草提取物对小鼠 U14宫颈癌细胞的抑制作用　第 8期
表 1　白花败酱草水提液对 U14荷瘤鼠的
肿瘤抑制率(x±s, n=10)
组别 动物体重(g)给药前　　　　给药后
瘤重
(g)
抑瘤率
(%)
对照组 23.81g±1.29 30.91g±1.34 2.85±0.82
低剂量组 23.36g±1.71 28.89g±0.84 1.66±0.531) 41.75
高剂量组 23.56g±2.36 29.20g±0.83 1.65±0.361) 42.30
CTX组 23.90g±1.50 28.03g±2.64 1.59±0.521) 44.21
　与对照组比较:1)P<0.01;下表同
2.4　白花败酱草水提液对肿瘤细胞形态学的影响　各组实体
瘤切片 HE染色后 , 光镜下观察细胞形态 , 灌服水提液
(15g/kg)、CTX与对照组比较 , 肿瘤细胞数明显减少 , 部分区
域可见正常细胞排列 ,呈巢状分布 , 出现核深染 、异形和固缩的
细胞减少 , 细胞异形性趋向中等分化。见图 1。
表 2　白花败酱草水提液对 U14荷瘤鼠胸腺和
脾腺指数的影响(mg/10g, x±s)
组别 n 胸腺指数 脾指数
对照组 10 23.06±0.74 107.52±2.46
水提液高剂量组 10 18.52±0.571) 61.91±1.891)
CTX组 10 7.70±0.621) 43.27±1.261)
表 3　白花败酱草水提液对 U14荷瘤小鼠血清 T-AOC、
SOD和 MDA水平的影响(x±s, n=10)
组别 SOD(U/ml)
MDA
(nmol/ml)
T-AOC
(U/ml)
对照组 213.88±21.69 6.14±0.41 7.01±0.54
CTX组 327.18±25.451) 3.77±0.541) 9.74±0.581)
低剂量组 353.59±33.541) 3.96±0.281) 8.50±0.241)
高剂量组 359.81±23.591) 2.76±0.301) 10.66±0.321)
图 1　光镜下观察 U
14
宫颈癌细胞形态(×100)
3　讨　论
　　败酱草属植物药中白花败酱草 、黄花败酱草和异叶败酱三
个物种的药理作用已经报道 〔4〕。 20世纪 70年代研究者就已经
阐明了异叶败酱的抗肿瘤作用 〔5〕 , 关于黄花败酱体内抗肿瘤 、
体外诱导人乳腺癌 MCF-7细胞凋亡的作用也有报道 〔6〕。
　　本实验表明 , 白花败酱草水提液有明显抑制 U14宫颈癌细
胞生长增殖的作用 , 同时可降低 U14荷瘤鼠血清 MDA水平 , 提
高 T-AOC和 SOD活性。 HE染色后 ,光镜下观察肿瘤细胞数明
显减少 , 部分区域可见正常细胞排列 , 呈巢状分布 , 出现核深
染 、异形和固缩的细胞减少 , 细胞异形性趋向中等分化。揭示
白花败酱草水提液具有抗 U14宫颈癌的作用 , 其机制可能是通
过调节小鼠免疫功能 , 改善因肿瘤引起机体免疫功能紊乱 , 增
强抗氧化防御系统酶活性从而抑制肿瘤生长实现抑瘤作用。
　　肿瘤的发生发展与其宿主的自由基水平有关。自由基的
主要活性之一是引发脂质过氧化作用 , 攻击生物膜中的多不饱
和脂肪酸 , 引起细胞毒效应 〔7〕。体内自由基引发的脂质过氧化
物参与肿瘤基因的启动以及肿瘤的发生发展过程。 Irani等 〔8〕
提出 O 2 是原癌基因 ras生长信号传导途径的重要环节 , 可刺
激细胞增生 , 提示氧自由基不仅具有细胞毒作用 , 而且可作为
一种生长信号 , 参与细胞的生长增殖以及癌变过程。白花败酱
草水提液可以显著提高 U14荷瘤小鼠血清中的 T-AOC能力 、
SOD活力 , 能特异性使肿瘤细胞 O 2 水平增高 ,从而诱导肿瘤细
胞损伤 ,这个结果与 MDA水平的测定结果相一致。揭示败酱
草水提液可能通过增强抗氧化防御系统酶活性来抑制肿瘤细
胞的生长 ,达到其抗肿瘤作用 〔9〕。
4　参考文献
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〔2009-09-23收稿　 2010-01-19修回〕
(编辑　曲　莉)
氧化苦参碱对局灶性脑缺血大鼠脑组织超微结构的保护作用
张鉴清　崔新明 1　吕文伟 2　李　娜 2　陈　霞 2　(吉林大学第四医院急诊科 ,吉林　长春　130012)
　　〔摘　要〕　目的　观察氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)对局灶性脑缺血大鼠脑组织超微结构的保护作用。方法　将健康 Wistar大鼠随机分为模
型组 、假手术组 、路路通组(LLT)及 OMT35、 70及 105mg/kg三个不同剂量组 ,每组 8只。采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型 ,测定各组大鼠神
经学评分 、脑梗死体积及脑组织超微结构改变。结果　与模型组相比 , OMT各剂量组均能降低局灶性脑缺血大鼠神经学评分(P<0.05)及缩小脑梗
死体积(P<0.01)。电镜观察发现 OMT70及 105mg/kg剂量组能够改善脑组织神经元及神经毡的空化现象 ,对线粒体的结构也起到了一定的保护
作用。结论　氧化苦参碱能够减轻局灶性脑缺血大鼠脑组织超微结构的损伤 ,对缺血脑组织具有一定的保护作用。
〔关键词〕　氧化苦参碱;脑缺血;超微结构
〔中图分类号〕　R-332, R972.4　　〔文献标识码〕　A　　〔文章编号〕　1005-9202(2010)08-1093-02
基金项目:吉林省科技发展计划项目(No.200505144)
1　吉林大学白求恩医学院病理教研室
2　吉林大学白求恩医学院药理教研室
通讯作者:陈　霞(1964-),女 ,教授 , 硕士生导师 ,主要从事心脑血管临
床药理学研究。
第一作者:张鉴清(1972-),男 ,主治医师 , 主要从事手足显微外科及相
关糖尿病足的临床研究。
　　氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)是槐属植物苦豆子 、苦参等
所含生物碱的主要成分 〔1〕。研究表明 OMT具有多种药理作
用 , 主要表现在抗炎 、镇静 、镇痛 、强心 、降压 、抗心律失常对心
肌缺血和梗死的保护作用等方面 〔2 ～ 6〕。 李娜等 〔7〕的研究证明
OMT对于大鼠脑缺血损伤也具有一定的保护作用。本实验旨
在从脑组织超微结构的改变探讨 OMT对于大鼠局灶性脑缺血
性损伤的保护作用。
1　材料与方法
1.1　实验动物分组及给药　健康雄性 Wistar大鼠 , 体重 280 ～
320g, 由长春高新医学动物实验研究中心提供 , 合格证号
SCXK(吉)-2003-2004。将实验动物随机分为模型组 、假手术
组 、路路通组(LLT组)及 OMT35、70及 105 mg/kg剂量组。模
型组和假手术组腹腔注射等容量的生理盐水 , LLT组腹腔注射
路路通 31.25mg/kg。各组动物于制备模型后连续给药 5 d,末
次给药 30min后处死动物。
1.2　实验仪器与药品　LLT注射液为吉林东北虎药业股份有
限公司生产 ,批号 030501;OMT(质量分数 >99%)由中国药品
生物制品检定所提供。三苯基氯化四氮唑(triphenyltetrazoli-
umchloride, TTC)由上海化学试剂公司提供。 JEM-1200EX型
透射电子显微镜(日本电子公司)。
1.3　大鼠局灶性脑缺血模型的制备　采用线栓法制备大鼠局
灶性脑缺血模型 , 即应用水合氯醛 0.3 g/kg腹腔注射麻醉大
鼠 , 分离并结扎颈外动脉 ,从右侧颈总动脉剪口将 3 cm的尼龙
线插入 , 至其进入颈内动脉约 18 mm处止 , 固定尼龙线并缝合
皮肤。术后 37℃保温 , 待动物苏醒后通过神经学评分判定模型
是否制备成功。
1.4　神经学评分标准　0分:无神经功能缺失症状;1分:梗死
对侧前爪内收 、不能伸直;2分:前肢屈曲对侧抵抗推力下降 ,向
对侧转圈;3分:行走时身体向偏瘫侧倾倒;4分:意识障碍 , 完
全不能行走;评分在 2分以上为模型制备成功。
1.5　脑梗死体积测定　大鼠麻醉后断头取脑 , 去掉嗅球 、小脑
和低位脑干 , 从额板开始间隔 1 mm做冠状切片 , 将切片置于
1%TTC溶液中 , 37℃避光孵育 30 min后取出 , 置于 10%中性甲
醛中固定 , 正常组织染成红色 , 梗死区呈现白色。 数码相机摄
像 , 利用 LEICAQWIN图像分析仪测定脑梗死体积 , 计算脑梗
死体积占全脑体积的百分比。
1.6　透射电镜样品制备　将大脑组织放入 4%戊二醛中进行
前固定 4 h, PBS冲洗 , 再用 1%锇酸后固定 1.5 h, 用蒸馏水冲
洗 , 乙醇 、丙酮梯度系列脱水 , 环氧树脂包埋 ,超薄切片 , 电子染
色后在 JEM-1200EX透射电子显微镜下观察。
1.7　统计学处理　数据用 x±s表示 ,通过 GraphPad统计软件
进行多组间单因素方差分析。
2　结　果
2.1　各组大鼠神经学评分比较　采用线栓法制备大鼠局灶性
脑缺血模型 , 模型制备后各组大鼠均呈现出不同程度的脑缺血
性损伤表现 , 说明大鼠局灶性脑缺血模型制备成功。 OMT中高
剂量组的神经学评分(2.5 ±0.5、 2.4 ±0.5)和 LLT组(2.5 ±
0.8)明显低于模型组(3.6±0.7)(P<0.05)。而 OMT低剂量
组的神经学评分(3.0±0.9)与模型线无显著差异(P>0.05)。
表明 OMT中高剂量能够缓解动物身体倾斜或一侧肢体瘫痪的
缺血损伤症状。
2.2　脑梗死体积测定　与模型组脑梗死体积 〔(0.54 ±
0.06)%〕比较 , OMT70 及 105 mg/kg组 〔(0.41 ±0.03)%、
·1093·张鉴清等　氧化苦参碱对局灶性脑缺血大鼠脑组织超微结构的保护作用　第 8期