全 文 ：［收稿日期］ 20130327(005)
［基金项目］ 2010 河南省郑州市科技攻关项目(10PTGS486-1)
［第一作者］ 李晓坤，讲师，从事中药新药研究与开发，Tel:
13333825177，E-mail:li96052122@ 126． com
［通讯作者］ * 杨云，硕士生导师，教授，从事药物化学研究，
Tel:0371-65680605，E-mail:Yyun@ china． com． cn
HPLC指纹图谱技术对 3 种贯叶连翘提取物制备工艺的评价
李晓坤，刘炯，张杰，张华锋，刘富岗，杨云*
( 河南中医学院药学院，郑州 450046)
［摘要］ 目的:比较 3 种贯叶连翘提取物制备工艺的稳定性与重复性。方法:建立提取物的 HPLC指纹图谱，对不同批次
提取物进行相似度分析、聚类分析和模式识别。结果:3 种工艺均具有良好的稳定性与重复性，且酶解后优于酶解前，纯化后
优于纯化前，以酶解后经大孔树脂 LSA-10 纯化所得提取物的制备工艺为最佳。不同批次提取物的镜像度较高，具有良好的相
似性(＞ 0. 9)。结论:HPLC指纹图谱可用于同类提取物的质量控制和制备工艺评价。
［关键词］ 贯叶连翘提取物;HPLC指纹图谱;提取工艺;评价
［中图分类号］ R283. 6，R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0010-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150010
Evaluation of Three Preparation Technologies for
Hypericum perforatum Extract by HPLC Fingerprint
LI Xiao-kun，LIU Jiong，ZHANG Jie，ZHANG Hua-feng，LIU Fu-gang，YANG Yun*
(College of Pharmacy，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450046，China)
［Abstract］ Objective:To compare stability and reproducibility of three preparation processes for
Hypericum perforatum extract． Method:HPLC fingerprint of H． perforatum extract was established，and different
batches of extract were analyzed by similarity analysis，cluster analysis and pattern recognition． Result:These
three processes had good stability and reproducibility，and enzymatic hydrolysis was superior to before enzymatic
hydrolysis，purification was superior to before purification，optimum preparation technology was purified by LSA-
10 macroporous resin after enzymatic hydrolusis． Mirror degree of different batches of extract was high with good
similarity (＞ 0. 9)． Conclusion:HPLC fingerprint analysis method could be adopted for quality control and
process evaluation of similar extract．
［Key words］ extract of Hypericum perforatum;HPLC fingerprint;extraction process;evaluation
贯叶连翘广泛分布于我国西北和西南地区，其
最具生物活性的成分为金丝桃素，具有多种药理活
性［1］。目前，贯叶连翘提取物中金丝桃素含量波动
较大，原因是金丝桃素提取率过低。2010 年版《中
国药典》一部对贯叶连翘的规定仅限于金丝桃苷、
芦丁鉴别和金丝桃苷含量测定［2］。前期以金丝桃
素为指标优选了 3 种贯叶连翘提取物的制备工
艺［3-5］，为评价药材及提取工艺对贯叶连翘提取物质
量的影响，本实验制备乙醇直接提取、酶解后乙醇提
取、酶解乙醇提取后大孔树脂纯化的提取物各 10批，
并建立各工艺的 HPLC指纹图谱［6］，考察 3 种工艺的
稳定性和重复性，为贯叶连翘的资源利用提供参考。
1 材料
2695 型高效液相色谱仪(美国 Waters 公司) ，
BS 210S型电子天平(北京赛多利斯公司) ，AE 240
型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司) ，FW-80
型微型植物试样粉碎机(河北省黄骅市新兴电器
厂)。
金丝桃素对照品(中药固体制剂制造技术国家
工程研究中心，批号 1158-080715，纯度 ＞ 98%) ，乙
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2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013
腈为色谱纯，水为自制双蒸水，其余试剂均为分析
纯。贯叶连翘药材购自陕西渭南，经河南中医学院
药学院董诚明教授鉴定为藤黄科金丝桃属植物贯叶
金丝桃 Hypericum perforatum L．的地上部分。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备 取同一批贯叶连翘药材
粉末 30 份，每份 50 g，精密称定，均分为 3 组，每组
10 份，分别按优选的“乙醇提取工艺”、“贯叶连翘
酶解 +乙醇提取工艺”、“贯叶连翘酶解 +乙醇提取
+大孔树脂纯化工艺”制备提取物。前两组每份提
取物取70 mg，第 3 组取 60 mg，精密称定，加甲醇使
充分溶解，定容至 10 mL，0. 22 μm 微孔滤膜滤过，
得 A10 ～ A39 共 30 份供试品，备用。
2. 2 对照品溶液的制备 取金丝桃素对照品
0. 3 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶中，加甲醇定容至
刻度，摇匀，经 0. 22 μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 3 色谱条件 依利特 Hypersil ODS2 色谱柱(5. 0
mm ×200 mm，5 μm) ，进样量 10 μL，柱温 30 ℃，流
速 1. 0 mL·min －1，检测波长 254 nm，流动相乙腈
(A)-水(B)梯度洗脱(0 ～ 12 min，10% A;12 ～
25 min，19%A;25 ～ 70 min，43%A) ，见图 1。
图 1 金丝桃素对照品 HPLC
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 精密度试验 精密量取 A10 号供试品溶液
适量，按上述色谱条件连续进样 5 次，记录色谱图，
以金丝桃素色谱峰为内参照峰，计算共有峰相对保
留时间 RSD ＜3%，相对峰面积 RSD ＜5%，说明仪器
精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验 取 A10 提取物样品 5 份，按
2. 1 项下方法制备供试品溶液 5 份，按上述色谱条
件测定，以金丝桃素色谱峰为内参照峰，计算相对保
留时间 RSD ＜3%，相对峰面积 RSD ＜5%，说明该方
法重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取 A10 供试品溶液，分别于
0，6，10，14，18，24 h按 2. 3 项下色谱条件进行检测，
记录色谱峰，以金丝桃素色谱峰为内参照峰，计算相
对保留时间 RSD ＜3%，相对峰面积 RSD ＜5%，表明
样品在 24 h内保持稳定。
2. 5 不同提取物比较
2. 5. 1 共有模式图谱镜像 分别量取 3 种工艺制
备的样品适量，按 2. 1 项下方法制备供试品溶液，测
定。运用 CHROMAP 1. 5 指纹图谱软件处理，分别
建立该 3 种工艺的 HPLC 共有指纹图谱模式，以各
工艺 10 批样品的 HPLC指纹图谱共有模式与编号 1
样品的指纹图谱进行对比，结果见图 2，表明镜像度
比较高。
A．乙醇提取物(A10) ;B．酶解-乙醇提取物(A20) ;
C．酶解-树脂纯化提取物(A30)
图 2 不同工艺制备的提取物与共有模式图谱镜像对比
2. 5. 2 相似度分析 以共有模式为参照，采用
CHROMAP 1. 5 指纹图谱软件分别对 3 种工艺制备
的 10 批样品检测结果进行相似度分析，相似度分析
包括相关系数法和夹角余弦法［7-8］，结果见表 1，说
明各制备工艺的不同批次提取物均具有良好的相似
性(＞ 0. 9)。
2. 5. 3 聚类分析［9-10］ 通过 CHROMAP 1. 5 指纹
图谱处理软件对 3 种工艺的全部样品测试结果进行
聚类分析，结果见图 3。将 3 种工艺制备的提取物
按 CHROMAP 1. 5 指纹图谱软件聚类分为 3 类，乙
醇提取物集中在第Ⅰ类，酶解-乙醇提取物集中在第
Ⅱ类，酶解-树脂纯化提取物集中在第Ⅲ类，3 类样
品均能较好地聚集在一起，且相聚较近，表明聚类较
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李晓坤，等:HPLC指纹图谱技术对 3 种贯叶连翘提取物制备工艺的评价
表 1 不同工艺制备的提取物的相似度分析
样品 相关系数 夹角余弦 夹角 / °
A10 0. 997 7 0. 998 6 3. 0
A11 0. 995 1 0. 996 9 4. 5
A12 0. 998 4 0. 999 0 2. 6
A13 0. 997 9 0. 998 7 3. 0
A14 0. 990 0 0. 994 0 6. 3
A15 0. 989 9 0. 993 9 6. 3
A16 0. 997 8 0. 998 5 3. 1
A17 0. 993 0 0. 995 8 5. 3
A18 0. 997 4 0. 998 3 3. 3
A19 0. 999 1 0. 999 4 2. 0
A20 0. 999 0 0. 999 1 2. 4
A21 0. 999 0 0. 998 8 2. 9
A22 0. 997 5 0. 997 5 4. 1
A23 0. 998 3 0. 998 3 3. 4
A24 0. 998 3 0. 998 2 3. 5
A25 0. 998 3 0. 998 5 3. 1
A26 0. 998 4 0. 998 5 3. 1
A27 0. 997 9 0. 998 2 3. 4
A28 0. 998 6 0. 998 7 2. 9
A29 0. 997 1 0. 997 3 4. 2
A30 0. 998 4 0. 998 4 3. 2
A31 0. 991 7 0. 992 5 7. 0
A32 0. 999 3 0. 999 3 2. 1
A33 0. 997 3 0. 997 0 4. 5
A34 0. 996 9 0. 996 3 4. 9
A35 0. 997 4 0. 997 0 4. 4
A36 0. 997 7 0. 997 2 4. 3
A37 0. 993 8 0. 994 3 6. 1
A38 0. 999 1 0. 999 2 2. 4
A39 0. 999 2 0. 999 2 2. 2
注:A10 ～ A19 为乙醇提取物;A20 ～ A29 为酶解-乙醇提取物;
A30 ～ A39 为酶解-树脂纯化提取物。
好，其中第Ⅲ类样品在分类距离 ＞ 1 000 时，不同批
次仍能较好地分离，说明此类样品的制备工艺稳定
性和重复性最好。
2. 5. 4 模式识别 通过 CHROMAP 1. 5 指纹图谱
处理软件对 3 种工艺的全部样品测试结果进行模式
识别，结果见图 4 ～ 5，表明贯叶连翘提取物的 3 种
工艺所建立的识别模式正确性与稳定性均较好，均
能正确指认本模式组内样品，准确识别组内混合的
其他模式样品，同时进一步验证了贯叶连翘的酶解、
图 3 不同工艺制备的提取物样品聚类分析树状
乙醇提取、大孔树脂纯化提取物制备工艺的稳定性
与重复性良好。
图 4 不同工艺制备的提取物模式识别组内测试
图 5 不同工艺制备的提取物模式识别混合测试
3 讨论
曾考察甲醇-水等梯度洗脱，结果发现效果远不
如梯度洗脱，将甲醇改为乙腈后，效果明显提高，采
用乙腈-水进行梯度洗脱，缩短了分析时间，色谱图
基线更加平稳，金丝桃素色谱峰的分离度均 ＞
1. 5［11-12］。在考察紫外-可见吸收最大波长时，发现
在 210，254，270，360 nm 处进行 HPLC 分析均有不
错效果，但以 254 nm出峰最多。
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［责任编辑 仝燕］
［收稿日期］ 20130110(011)
［基金项目］ 河北省自然科学基金项目(C2010001354)
［第一作者］ 罗赛赛，硕士，从事中草药有效成分提取分离研究，Tel:13398671073，E-mail:515277424@ qq． com
［通讯作者］ * 赵桂琴，博士，副教授，从事天然抗病毒活性产物研究与开发，Tel:0314-2291908，E-mail:zhaoguiqin1971@ sina． com． cn
素馨花总环烯醚萜苷的大孔树脂富集纯化工艺优选
罗赛赛，郝婷，赵桂琴*
( 承德医学院中药研究所，河北省中药研究与开发重点实验室，河北 承德 067000)
［摘要］ 目的:优选大孔树脂富集纯化素馨花总环烯醚萜苷的工艺条件。方法:采用 HPLC测定橄榄苦苷含量。以橄榄
苦苷为指标成分，通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，通过单因素试验和正交试验考察大孔树脂富集纯化工艺。结
果:XDA-16 型大孔树脂吸附洗脱性能最好，最佳纯化工艺条件为上样液生药质量浓度 0. 08 g·mL －1，上样量 0. 7 g·g －1，树脂柱
径高比 1∶ 3，吸附流速 2 BV·h －1，加 8 BV水洗除杂，用 70%乙醇 4 BV于 2 BV·h －1流速洗脱，收集洗脱液。结论:该工艺条件
稳定可行，XDA-16 型大孔树脂可有效地富集纯化素馨花总环烯醚萜苷。
［关键词］ 素馨花;总环烯醚萜苷;大孔树脂;正交试验;橄榄苦苷
［中图分类号］ R283. 6，R284. 2 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0013-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150013
Optimization of Enrichment and Purification Technology for
Total Iridoid Glycosides from Jasminum officinale by Macroporous Resin
LUO Sai-sai，HAO Ting，ZHAO Gui-qin*
(Institute of Chinese Traditional Medicine，Chengde Medical University，Hebei Provincal Key Laboratory
of Research and Development of Chinese Medicine，Chengde 067000，China)
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第 19 卷第 15 期
2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013