全 文 ：高乌头炮制前后高乌甲素含量测定及小鼠急性毒性实验
李 芸1，2， 胡昌江1* ， 徐 婷2， 王志旺2， 熊 瑞1
(1． 成都中医药大学，四川 成都 611137;2． 甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2014-12-02
基金项目:甘肃省自然科学基金项目 (1107RJZA242) ;甘肃中医学院中青年基金项目 (ZQ2011-8)
作者简介:李 芸 (1973—) ，女，博士生，主要从事中药炮制学的教学和科研工作。E-mail:liyunherb@ 163． com
* 通信作者:胡昌江 (1952—) ，男，教授，博士生导师，主要从事中药炮制学的教学和科研工作。E-mail:hhccjj@ hotmail． com
网络出版日期:2015-02-27
网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /31． 1368． R． 20150227． 1050． 001． html
摘要:目的 比较高乌头生品及炮制品的高乌甲素含有量及急性毒性大小，为探讨高乌头炮制机理提供依据。方法
采用测定半数致死量的方法对高乌头生品及炮制品的急性毒性进行研究。采用高效液相色谱法，测定高乌头生品及炮
制品中高乌甲素的含有量。结果 高乌头生品的 LD50为 1. 424 g /kg;高乌头炮制品的 LD50为 2. 625 g /kg。生品的毒性
大于炮制品，高乌甲素的质量分数分别为 1. 170%、0. 562%，炮制后含有量降低了一半。结论 高乌头炮制后毒性显
著降低，表明用甘草汁炮制能够降低高乌头的毒性，且毒性与高乌甲素密切相关，进一步证实高乌甲素就是高乌头的
毒性成分之一。
关键词:高乌头;炮制;高乌甲素;急性毒性
中图分类号:R283. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2016)01-0179-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 01. 042
高乌头是毛莨科乌头属植物高乌头 (Aconitum sinomon-
tanum Nakai)的干燥根，别名麻布七、穿心莲，曲芍，九
连环等，是甘肃、四川、陕西太白地区、湖北神农架地区
及云南、贵州等地珍稀名贵的 “七药”之一［1-2］，性味苦
辛、温，有毒，具有祛风除湿、理气止痛、活血散结的功
效，临床用于治风寒腰痛，痧气腹痛，胃痛，心悸，跌打
劳伤，瘰疬，疮疖等［3-5］，现收载于《甘肃省中药材标准》
(2009 年版)［6］。高乌甲素是高乌头主要的 C18-双去甲二萜
类生物碱，为高乌头的毒性成分之一［7-8］，也是有效成分之
一，临床上常用其氢溴酸盐，具有抗炎、解热、镇痛、局
麻、抗血小板聚集、抗肿瘤、抗心律失常、抗风湿、抗癫
痫、抗氧化、抗细菌、免疫调节、杀虫等活性［9-11］。由于
高乌头有毒，临床应用受限，需要炮制以解毒，本课题组
前期对高乌头的炮制工艺进行了优选 (加入 10%甘草汁蒸
制 5 h) ，分别测定了生品和炮制品中高乌甲素的量，同时
对 2 种样品进行了小鼠急性毒性试验，为高乌头的急性毒
性评价提供依据。
1 材料与方法
1. 1 受试物
1. 1. 1 生品 高乌头 (甘肃省天祝藏族自治县农贸市
场) ，经甘肃中医学院杨抚德教授鉴定为麻布七，高乌头
(Aconitum sinomontanum Nakai)的根。将原药材净制，润
法软化，然后切制成约 5 mm 的碎段，自然干燥，筛去碎
屑，制成高乌头生品饮片。
1. 1. 2 炮制品 (甘草制) 取高乌头生品饮片适量，用
10%甘草汁 (甘草 ∶ 水为 1 ∶ 3)润透后，置立式压力蒸汽
灭菌器内，在 127 ℃，0. 15 MPa 条件下蒸制 5 h，取出，
晾干，筛去碎屑，制成高乌头炮制品。
1. 2 主要试剂与器材 氢溴酸高乌甲素对照品 (甘肃神龙
药业股份有限公司，批号 20001001，纯度 97. 50%)。甲
醇、乙腈为色谱纯;其它试剂均为分析纯。Waters-2695 型
高效液相仪、2998 二极管阵列检测器 (PAD) ;BT 125D电
子天平 (赛多利斯科学仪器北京有限公司) ;LDZX-30FA
立式压力蒸汽灭菌器 (上海中安医疗器械厂) ;12 号灌
胃针。
1. 3 实验动物及环境 SPF 级昆明种小鼠 (18 ～ 22 g) ，
雌雄各半，均由甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动
物生产许可证号 SCXK (甘)2011-0001，实验设施合格证
SYXK (甘)2011-0001。实验室温度 20 ～ 24 ℃，相对湿度
40% ～70%。
1. 4 试验方法
1. 4. 1 高乌甲素含有量测定 对照品溶液的制备:精密称
取氢溴酸高乌甲素对照品 7. 5 mg，置 25 mL 量瓶中，加甲
醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
样品溶液的制备:取高乌头 (过 50 目筛)约 0. 5 g，
精密称定，置三角瓶中，加甲醇 15 mL，超声 15 min，滤
过，滤渣再加 10 mL甲醇，超声 15 min，滤液合并于25 mL
量瓶中，用甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液，经 0. 45
μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。
标准曲线的绘制:精密吸取对照品溶液 0. 5、1、5、
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Chinese Traditional Patent Medicine
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10、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰
面积 (Y)对进样量 (X)进行线性回归，氢溴酸高乌甲素
在 0. 15 ～ 7. 5 μg 范围内线性关系良好，回归方程 Y = 237
512 X － 53 646，r = 0. 999 9。
色谱条件:色谱柱 (ZORBAX SB-C18，4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;甲醇-0. 05 mol /L NaH2PO4 溶液 (45 ∶
55)为流动相;体积流量为 1. 0 mL /min;进样体积 10 μL;
检测波长 252 nm;柱温为 30 ℃。
1. 4. 2 小鼠经口毒性试验 采用半数致死量法。将高乌头
生品饮片粉碎，过 100 目筛两次，称取适量样品，加蒸馏
水配制成一定质量浓度的混悬液，备用 (以下称为高乌头
生品)。同法制备高乌头炮制品混悬液 (以下称为高乌头
炮制品)。
根据预试验结果，设计高乌头生品和炮制品的染毒剂
量。每种受试物设 5 个剂量，其中高乌头生品为 3. 200、
2. 272、1. 613、1. 145、0. 813 g /kg 体质量;高乌头炮制品
为 4. 000、2. 960、2. 190、1. 621、1. 200 g /kg体质量。
选用 18 ～ 22 g的 SPF级昆明种小鼠，雌雄各 8 只，于
灌胃前禁食 16 h。各受试物按相应剂量一次性灌胃给药
40 mL /kg体质量，对照组给以等容积的蒸馏水。严密观察
并记录给药后 4 h内动物的反应情况，并连续观察 14 d 内
动物的异常反应及死亡情况。同时，将死亡动物及时进行
解剖，肉眼观察各主要脏器有无明显病理改变，未死亡动
物于 14 d 后处死，进行尸检，观察主要脏器有无病理
改变。
1. 5 数据统计方法 数据统计采用 Bliss 法，应用 SPSS
17. 0 统计软件进行统计学分析，计算 LD50及 95%可信限。
2 结果
2. 1 高乌甲素含有量测定结果 高乌头生品、炮制品中高
乌甲素的质量分数分别为 1. 170%、0. 562%。炮制后，其
含有量约为生品的 1 /2。
2. 2 小鼠急性经口毒性试验 在高乌头生品及炮制品染毒
动物中，部分动物 3 ～ 5 min后相继出现活动减少，心跳加
速，呼吸困难，全身颤抖相继出现异常兴奋，呼吸抑制，
逐渐发展到张口呼吸，阵发性奔跑后出现阵挛惊脉，四肢
抽动，角弓反张，嘴巴、四肢及脚部颜色发青等中毒症状，
严重惊厥而死亡或断续出现多次惊厥后，部分死亡。给药
后 10 min 左右，陆续有动物死亡，极个别动物第 2 天死
亡，对死亡动物及时进行解剖，其胃及小肠内含有与受试
样品性状相同的物质，无明显的胃肠胀气、充血及水肿等，
其心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺等重要脏器也未见明显
异常;在给药后活动减少，蜷缩于笼内的存活小鼠于给药
40 ～ 45 min后，中毒症状逐渐减弱缓解，次日外观和活动
均恢复正常。给药第 14 天，处死存活动物，肉眼观察各组
织，其肠道及心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺等重要脏器
未见明显异常。
高乌头生品及炮制品对小鼠急性毒性实验的结果见表
1、表 2，LD50及 95%可信限见表 3。
表 1 高乌头生品急性毒性试验结果
剂量 /
(g·kg －1体质量)
剂量对数 动物数 /只 死亡数 /只 死亡率 /%
3. 200 0. 505 8 8 100
2. 272 0. 356 8 7 87. 5
1. 613 0. 208 8 5 61. 5
1. 145 0. 059 8 3 37. 5
0. 813 － 0. 090 8 0 0
表 2 高乌头炮制品急性毒性试验结果
剂量 /
(g·kg －1体质量)
剂量对数 动物数 /只 死亡数 /只 死亡率 /%
4. 000 0. 602 8 8 100
2. 960 0. 471 8 4 50
2. 190 0. 340 8 2 25
1. 621 0. 210 8 1 12. 5
1. 200 0. 079 8 0 0
表 3 高乌头生品及炮制品的 LD50及 95%可信限(g /kg)
受试物 LD50 95%可信限
高乌头生品 1. 424 1. 144 ～ 1. 739
高乌头炮制品 2. 625 2. 206 ～ 3. 247
从表 1 ～ 3 可以看出，高乌头炮制品的 LD50约为生品的
2 倍左右，表明高乌头炮制品的毒性小于生品，也说明高
乌头炮制后毒性显著降低。
3 讨论
我国自古就认为高乌头“辛热有毒”，在临床使用中，
相继有报道可引起严重的不良反应［12-13］，使其临床应用受
限，须炮制以解毒，才能保证临床安全有效。降低毒性的
方法很多，使用辅料解毒是中药炮制的一个显著特点，也
是毒性中药解毒的重要手段。甘草的解毒作用早在《神农
本草经》中就有记载，历代炮制毒性中药如乌头、半夏等
都用甘草解毒。《景岳全书》也记载:“甘草，味至甘，得
中和之性，有调补之功，故毒药得之解其毒，刚药得之和
其性……”。甘草的解毒作用与甘草酸的水解产物葡萄糖
醛酸有关，后者与毒物结构中的羟基或羧基发生羟醛缩合
而解毒。高乌头主要含有二萜生物碱，结构中含有大量的
羟基，容易发生羟醛缩合反应而解毒。
辅料去毒常与加热的方法相结合，去毒效果更好。本
研究借鉴了其它毒性中药的炮制方法和特点，采用辅料甘
草和蒸制相结合的解毒方法。实验结果显示，该法确能降
低高乌头的毒性。加热温度与时间如何影响去毒效果，需
要深入研究炮制过程中活性成分的转化规律，进一步揭示
炮制减毒机理，是亟待解决的问题，有待进一步研究。
将毒性成分转化为毒性较小或无毒物质是较理想的炮
制方法。高乌甲素为单酯型二萜生物碱，结构中含有酯键
和多个乙酰基，加热处理均易水解，可能是发生水解反应
生成 N-去乙酰高乌甲素、刺乌宁等多个毒性较低的水解产
物［10］，也可能与甘草酸形成了稳定的络合物［14］，致其含
量降低，结构也发生了转化，毒性随之降低。关于高乌头
炮制后高乌甲素的结构具体发生了如何变化，有望在后续
工作中开展。
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毒性中药的炮制要兼顾 “减毒”和 “存效”两个方
面，不可偏废，否则可能造成效失毒存，或毒去效失。高
乌头炮制后毒性降低了，能够保证临床用药的安全，那么
炮制后镇痛作用等药效是否还存在，是个关键问题，有待
药理实验进一步证明。
致谢:2013 届药物制剂专业本科毕业生李康、马贝红
同学在实验中的帮助和大力支持。
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刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节中谷氨酸及其受
体表达的影响
贾琳琳1， 张 涤2， 李佳明1， 张 波1， 徐 剑2， 陶春虹3， 李春雨1
(1． 佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 154007;2． 佳木斯大学附属第二医院，黑龙江 佳木斯
154002;3． 佳木斯市中心医院，黑龙江 佳木斯 154002)
收稿日期:2014-04-27
基金项目:黑龙江省教育厅项目 (12521564)
作者简介:贾琳琳 (1975—) ，女，博士，副教授，研究方向为中药抗氨基苷类抗生素耳毒性机制的研究。Tel: (0454)8618310，
E-mail:zhangshurui175@ 163． com
摘要:目的 观察刺五加注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸及其受体表达的影响，并探讨相
关机制。方法 实验动物随机分成正常对照组、庆大霉素组、刺五加 +庆大霉素组和刺五加注射液组。采用腹腔注射
庆大霉素制作耳毒模型，刺五加注射液进行干预治疗。连续用药 10 d 后，观察各组实验动物听阈变化、耳蜗螺旋神
经节中谷氨酸及其受体表达情况。结果 与正常对照组和刺五加注射液组相比，庆大霉素组豚鼠听阈阈值和耳蜗螺旋
神经节中谷氨酸及其受体的表达明显增高;刺五加注射液可显著改善庆大霉素所致的听阈改变和降低谷氨酸及其受体
的表达。结论 庆大霉素作用下耳蜗螺旋神经节细胞中谷氨酸和其相应受体表达增高;刺五加注射液可通过抑制谷氨
酸及其受体在耳蜗螺旋神经节中的过度表达，对螺旋神经节细胞起到保护作用。
关键词:刺五加注射液;螺旋神经节;谷氨酸;受体;庆大霉素
中图分类号:R285. 5 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2016)01-0181-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2016. 01. 043
谷氨酸是耳蜗内主要的兴奋性传入神经递质，在内毛 细胞与螺旋神经之间介导信号传递作用。在中枢神经系统
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