全 文 ：收稿日期:2009-01-07
作者简介:李莹(1979-),女(汉族),辽宁沈阳人 ,硕士研究生, E-maillilyinw@163.com;毕开顺(1956-),男(汉族), 河
北丰南人 ,教授 ,主要从事中药质量标准化 、中药药效物质基础研究 , Tel.024-23986296, E-mailksbi@mail.sy.ln.cn。
文章编号:1006-2858(2009)12-0975-03
RP-HPLC法测定鸡血藤中芒柄花素的含量
李　莹 , 陈晓辉 , 张天虹 , 毕开顺
(沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立测定鸡血藤药材中芒柄花素的 RP-HPLC法。 方法 采用 KromasilC18色谱柱
(250 mm×4.6 mm, 5μm),流动相为乙腈 -水(体积比为 35∶65), 流速为 1 mL·min-1 ,检测波长为
254nm, 柱温为 30 ℃。结果 芒柄花素在 0.5 ～ 15.4mg·L-1内线性关系良好(r=0.999 8, n=6), 平
均回收率为 98.6%(RSD=1.6%, n=9)。结论 RP-HPLC法可用于鸡血藤中芒柄花素的含量测定。
关键词:芒柄花素;鸡血藤;反相高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标志码:A
　　鸡血藤为传统的活血化瘀中药 , 《中华人民
共和国药典 》2005年版一部收载鸡血藤为豆科
(Leguminosae)密花豆属植物密花豆(Spatholobus
suberectusDunn.)的干燥藤茎 ,其性温 ,味苦 、甘 ,
归肝 、肾经 ,具有补血 、活血 、通络之功效 ,用于治
疗月经不调 、血虚萎黄 、麻木瘫痪 、风湿痹痛等
症 [ 1] 。文献 [ 2-6]报道密花豆属植物主要含有三
萜 、香豆素 、蒽醌和黄酮及其苷类化合物。 2005年
版《中华人民共和国药典 》只规定鸡血藤的性状 、
鉴别 、炮制 、性味与归经 、功能与主治 、用法与用量
和贮藏等七方面内容 ,而没有含量测定项 ,目前鸡
血藤质量控制方法只有以芒柄花素为对照 ,采用
TLC方法进行品种鉴定。本文作者建立了 RP-
HPLC测定鸡血藤药材中芒柄花素(结构式见图
1)的方法 ,比较了不同产地的鸡血藤中芒柄花素
的含量 ,为鸡血藤的质量评价提供了依据 。
Fig.1　Structureofformononetin
1　仪器与材料
LC-10ATvp高效液相色谱仪(日本 Shimadzu
公司), SPD-10A紫外检测器(日本 Shimadzu公
司), AB135-S天平 (瑞士 MetlerToledo公司),
AGBP2100天平(德国 Sartorius公司), SZ-96自动
纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂), KQ-100DB
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
芒柄花素由本实验室自制(HPLC峰面积归
一化法纯度质量分数大于 99.7%),乙腈 、甲醇为
色谱纯 ,水为自制蒸馏水。
鸡血藤药材经沈阳药科大学中药学院孙启
时教授鉴定为豆科(Leguminosae)密花豆属植物
密花豆 (SpatholobussuberectusDunn.)的干燥藤
茎 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:KromasilC18色谱柱 (250 mm×
4.6mm, 5μm),流动相:乙腈-水(体积比为 35∶
65),流速:1 mL·min-1 ,检测波长:254 nm,柱温:
30℃,进样量:20μL,分析时间:30 min。在上述
色谱条件下进样分析 ,理论塔板数按芒柄花素峰
计算不低于 6 000,样品分离状况良好 ,分离度 >
1.5。色谱图见图 2。
2.2　供试溶液的配制
取鸡血藤药材粉末约 1g,精密称定 ,置圆底烧
瓶中 ,加入体积分数为 80%的甲醇溶液 30 mL,称
定质量 ,回流提取 30 min,取出 ,放冷 ,再次称定质
量 ,用体积分数为 80%的甲醇溶液补足减失的质
量 ,经 0.22 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液备用 。
2.3　对照溶液的配制
取芒柄花素 12.0mg,精密称定 ,置 25 mL量
瓶中 ,加入甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,配得质
第 26卷 第 12期
2 0 0 9年 1 2月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol.26 　No.12
Dec.2009 p.975
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2009.12.005
1—Formononetin
Fig.2　HPLCchromatogramsofformononetin(A)andSpatholobussuberectusDunn.(B)
量浓度为 480.0 mg·L-1的对照储备液 。精密量
取上述对照储备液 1.0 mL,置于 10 mL量瓶中 ,
加入甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 既得质量浓度为
48.0mg·L-1的对照溶液。
2.4　线性关系试验
分别精密量取芒柄花素对照溶液 0.1、0.2、
0.4、0.8、1.6、3.2mL分别置于 10 mL量瓶中 ,加
甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得系列标准溶液 ,分别取
系列标准溶液 ,在 “ 2.1”条色谱条件下分析。以
对照溶液质量浓度 ρ为横坐标 ,峰面积 A为纵坐
标 ,得芒柄花素的回归方程为:A=4.468×104ρ-
4.277×103 , r=0.999 8。结果表明 ,芒柄花素在
0.5 ～ 15.4mg·L-1内呈良好线性关系。
2.5　精密度试验
取芒柄花素对照溶液 ,按 “ 2.1”条的色谱条
件下连续进样 6次 ,记录芒柄花素的峰面积 ,其
RSD为 0.5%,结果表明仪器精密度符合要求。
2.6　重复性试验
取同一批鸡血藤药材样品 (Guangxi1)按
“ 2.2”条下方法制备供试溶液 6份 ,在 “2.1”条下
色谱条件下测定 , 测得芒柄花素含量 RSD为
2.6%,表明该方法重复性良好。
2.7　稳定性试验
取供试溶液 , 分别在 0、2、 4、 6、 12、24 h按
“ 2.1”条的色谱条件下测定 ,测得供试品中芒柄
花素峰面积的 RSD为 1.7%,表明供试品溶液在
24h内稳定 。
2.8　回收率试验
取已知含量的鸡血藤药材样品(Guangxi1)9
份 ,每份 0.5g,精密称定 ,每组按低 、中 、高浓度分
别精密加入芒柄花素对照溶液 ,每一浓度 3份 ,
按 “2.2”条下操作 ,在 “ 2.1”条色谱条件下进行分
析 ,计算低 、中 、高浓度芒柄花素的回收率 ,结果
见表 1。
Table1　Recoveriesofformononetin(n=9)
No. moriginal/μg madded/μg mfound/μg Recovery/% Average/% RSD/%
1 103.8 56.0 157.7 96.3
2 103.8 56.0 159.0 98.6
3 103.8 56.0 158.5 97.7
4 103.8 112.0 213.3 97.8
5 103.8 112.0 214.2 98.6 98.6 1.6
6 103.8 112.0 213.6 98.0
7 103.8 168.0 273.9 101.3
8 103.8 168.0 273.0 100.7
9 103.8 168.0 268.8 98.2
2.9　样品测定
将 8批不同产地的鸡血藤药材样品分别按
“2.2”条下方法制备供试品溶液 ,在 “2.1”条色谱
条件下测定 ,用外标法计算样品含量 ,结果见表 2。
3　讨论
a.检测波长的选择:用二极管阵列检测器对
芒柄花素对照溶液进行扫描 ,扫描范围为 200 ～
400nm,表明芒柄花素在 254 nm处有一最大吸
收 ,故选择 254 nm作为检测波长。
b.流动相的选择:作者分别考察了乙腈-水
系统和甲醇 -水系统作为流动相 ,结果发现乙腈 -
水系统的分离效果明显优于甲醇-水系统。故选
择乙腈 -水系统作为流动相。
976 沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 26卷　
Table2　Contentsofformononetin(n=3)
No. Species Origins w/%(×10-3)
1 SpatholobussuberectusDunn. Guangxi1 20.8
2 SpatholobussuberectusDunn. Guangxi2 9.4
3 SpatholobussuberectusDunn. Guangxi3 11.4
4 SpatholobussuberectusDunn. Guangxi4 3.1
5 SpatholobussuberectusDunn. Guangxi5 5.2
6 SpatholobussuberectusDunn. Guangdong1 5.1
7 SpatholobussuberectusDunn. Guangdong2 10.4
8 SpatholobussuberectusDunn. Yunnan 2.7
　　c.提取工艺的考察:作者以芒柄花素的含量
为指标 ,考察提取工艺 。采用超声法分别考察了
水 、甲醇 、乙醇的提取效率 ,结果表明甲醇的提取
效率较高。又以甲醇为提取溶剂 ,分别考察了超
声法和回流法的提取效率 ,结果表明回流法的提
取效率优于超声法 ,故采用回流法 。又采用回流
法分别考察了体积分数为 30%甲醇 、体积分数为
50%甲醇 、体积分数为 80%甲醇 、甲醇的提取效
率 ,结果表明体积分数为 80%甲醇的提取效率最
高 。采用单因素循环方法 ,进一步考察了溶剂倍
数 、提取时间和提取次数 3个因素 ,最后选择的
最佳提取工艺为 30倍量体积分数为 80%甲醇回
流 30min,提取 1次 。
d.作者对鸡血藤药材中芒柄花素的含量进
行测定 ,测定结果表明不同产地的鸡血藤药材中
芒柄花素含量差别很大 。其中 ,产地为广西 1的
鸡血藤药材中芒柄花素含量最高 ,产地为云南的
鸡血藤药材中芒柄花素含量最低 ,相差近 8倍。
作者建立的鸡血藤中芒柄花素含量测定的高效
液相色谱方法 ,简单 、准确 、可靠 ,可作为鸡血藤
质量控制的一项重要指标 。
参考文献:
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部 [ M] .
北京:化学工业出版社 , 2000:134.
[ 2] 严启新 ,李萍 , 王迪 ,等.鸡血藤脂溶性化学成分研究
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药学学报 , 2002, 37(10):784-787.
[ 4] 李静 ,张炜 , 许津.鸡血藤化学成分研究Ⅱ [ J] .中国
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[ 5] 成军 , 梁鸿 , 王媛 , 等.中药鸡血藤化学成分的研究
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中国中药杂志 , 2005, 30(2):121-123.
Determination of content of formononetin in
SpatholobussuberectusDunn.byRP-HPLC
LIYing, CHENXiao-hui, ZHANGTian-hong, BIKai-shun
(SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China)
Abstract:ObjectiveTodevelopanHPLCmethodforthedeterminationofthecontentofformononetinof
SpatholobussuberectusDunn.fromdiferentplaces.MethodsAKromasilC18 column(250 mm×4.6 mm,
5 μm)withamobilephaseconsistingofacetonitrile-water(V∶V=35∶65)wasused, theflowratewas1 mL
·min-1 , andthedetectingwavelengthwassetat254 nm, thecolumntemperaturewas30 ℃.ResultsThe
goodlinearityintherangeof0.5-15.4mg·L-1 , withcorelationcoeficientof0.999 8(n=6).Theaver-
agerecoveryofformononetinwas98.6% withRSDof1.6%.ConclusionsThemethodissensitive, accu-
rate, rapid, andsuitableforthequalitycontrolofSpatholobussuberectusDunn.
Keywords:formononetin;SpatholobussuberectusDunn.;RP-HPLC
977第 12期 李　莹等:RP-HPLC法测定鸡血藤中芒柄花素的含量