全 文 ：收稿日期:2002-07-11
正交试验法研究茺蔚子提取工艺
郭宇洁 ,马燕琼 ,吴晓洋
(中国中医研究院西苑医院 ,北京　100091)
　　摘要:目的:优选茺蔚子的最佳提取工艺。方法:采用正交试验法 , 以提取液中水苏碱含量为考察指标 , 对影响茺蔚子提取
工艺的因素进行了研究。结果:实验设计三因素中提取次数有显著影响。结论:茺蔚子的最佳提取工艺为:用 6 倍量 50%乙醇
回流提取 3次;每次为 2h。
关键词:正交试验;茺蔚子;盐酸水苏碱;提取工艺
中图分类号:R283.6　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2003)02-0009-02
Studies on Process for Extraction of Fructus Leonuri by Orthogonal Experiments
GUO Yu-jie ,MA Yan-qiong , WU Xiao-yang
(Xiyuan hospital China academy of traditional Chinese Medicine , Beijing 100091 , China)
Abstract:Objective　To optimize the condions for the extraction of Fructus leonuri.Methods　Conditions for the ex-
traction were studied by orthogonal experimental design as guided by the content of stachydrine present in the extract.Re-
sults　Significant effect was observed in times of extraction.Conclusion　The optimum condion of Fructus leonuri was to
be in a stata of hot reflux with six times of 50%ethanol for there times , the time was 2h each time.
Key words:orthogonal experiments;Fructus leonuri;stachydrine;extraction process
　　茺蔚子为唇形科植物益母草 Leonurus heterophyl-
lus Swee 的干燥成熟果实 ,具有活血调经 、清肝名目
的功效。茺蔚子总生物碱成分为茺蔚子的活性成分
之一。总生物碱部分含有水苏碱(stachydrine)等成
分[ 1] ,目前对茺蔚子总生物碱的提取工艺研究很少。
为了制定科学经济的茺蔚子提取工艺 ,同时保证成
药的质量 ,本文采用正交试验法对茺蔚子总生物碱
的提取条件进行筛选 ,确定了最佳的提取工艺 。
1　仪器与药品
HP8453分光光度计 。盐酸水苏碱对照品(中国
生物制品检定所);茺蔚子药材(西苑医院药房提
供);硫氰酸铬铵(北京化工厂);盐酸优级纯;活性
炭。
2　茺蔚子总碱的含量测定方法
2.1　对照品溶液的制备　精密称取盐酸水苏碱对
照品 10.1mg ,置 25ml量瓶中 ,加入 0.1mol L 盐酸溶
液15ml使溶解 ,备用 。
2.2　供试品溶液的含量测定
2.2.1　供试品溶液的制备　精密吸取正交样品 ,置
蒸发皿中 ,于水浴上蒸干 ,精密加入 0.1mol L盐酸溶
液 15ml使溶解(可适当超声溶解),加活性炭 1.5g ,
置水浴中加热半分钟 ,搅拌 ,滤过 ,滤液置 25ml量瓶
中 ,用 0.1mol L盐酸溶液分次洗洗蒸发皿和滤器 ,洗
液并入同一量瓶中 ,备用。
2.2.2　供试品溶液的测定　另取 0.1mol L 盐酸溶
液 20ml ,置 25ml量瓶中 ,在对照品溶液 、0.1mol L 盐
酸溶液及上述备用供试品溶液的量瓶中 ,各精密加
入新配制的 2%硫氰酸铬铵溶液 3ml , 摇匀 , 加
0.1mol L盐酸溶液至刻度 ,摇匀 ,置冰浴中放置 1h ,
用干燥滤纸滤过 ,取续滤液 ,以 0.1mol L盐酸溶液为
空白 ,照分光光度法(附录 VB),在 520nm 的波长处
分别测定吸收度 ,用空白试剂的吸收度分别减去对
照品与供试品的吸收度 ,计算 ,即得。
3　提取溶媒和提取方法的选择
3.1　溶媒的选择　生物碱在水及乙醇中的溶解度
都比较好 ,所以进行了水煎和乙醇回流的比较 。称
取 18g茺蔚子两份 ,一份按照常规法水煎 ,另一份以
50%乙醇回流提取 3 次 , 每次 2h 。分别吸取两者
40%的提取液于蒸发皿中 , 水浴蒸干 , 精密加入
0.1mol L 的盐酸溶液 15ml ,其余按照 2.2.1和 2.2.2
项下的操作进行供试品溶液的制备和含量测定 ,结
果吸收度差值水煎:0.3434;乙醇回流:0.4711。
·9·
第 9卷第 2 期
2003年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.9 , No.2
Apr., 2003
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2003.02.005
　　乙醇回流的吸收度差值大 ,说明以盐酸水苏碱
计的茺蔚子总生物碱含量高 。以乙醇提取效果好 ,
且出膏量低 ,故选择以乙醇来提取茺蔚子。
3.2　提取方法的比较　称取 18g 茺蔚子两份 ,一份
以6倍量 50%的乙醇回流提取 3次 ,每次 2h。另一
份以 6倍量50%乙醇浸渍 3次 ,每次 12h。分别吸取
两者 40%提取液于蒸发皿中 ,水浴蒸干 ,精密加入
0.1mol L的盐酸溶液 15ml ,其余按照 2.2.1和 2.2.2
项下的操作进行供试品溶液的制备和含量测定 ,结
果吸收度差值乙醇浸渍:0.1958;乙醇回流:0.4711。
　　乙醇回流吸收度差值大 ,说明以盐酸水苏碱计
的茺蔚子总生物碱含量高 。由于乙醇回流效果远远
高于乙醇浸渍 ,所以选择以乙醇回流法来提取茺蔚
子。
3.3　正交试验设计　选定乙醇浓度 、提取次数和乙
醇用量作为正交试验中需考察的 3 个因素 ,每个因
素各取三个水平(见表 3)。采用 L9(34)正交表进行
试验 ,以提取液中水苏碱的含量为考察指标 ,因素设
计见表1 。正交试验和结果见表 2 ,对表 4中的结果
进行统计学处理 ,得方差分析表(见表 3)。
表 1　试验因素水平表
因素水平 A乙醇浓度(%)
B
提取次数
C
乙醇倍数
1 50 1 4
2 60 2 5
3 70 3 6
3.2　结果分析　表 3结果说明各因素对提取效果
的影响程度依次为 B>A>C 。B 因素有显著影响
(P<0.05);A 因素和 C因素无显著影响。因此 ,各
因素的最佳水平组合为 A1B3C3 ,即以 6倍量 50%的
乙醇 ,提取 3次 ,每次 2h。
4　小结和讨论
根据实验结果 ,最终确定茺蔚子提取工艺如下:
以6倍量 50%的乙醇 ,提取 3次 ,每次 2h。
表 2　正交试验方案和结果
试验
号码 A B C D
茺蔚子总生物碱
含量(mg g 药材)
1 1 1 1 1 1.3327
2 1 2 2 2 2.1794
3 1 3 3 3 2.6630
4 2 1 2 3 1.4001
5 2 2 3 1 2.1697
6 2 3 1 2 2.5890
7 3 1 3 2 1.3587
8 3 2 1 3 1.9023
9 3 3 2 1 2.0828
K 1 6.1753 4.0915 5.8240 5.5851
K 2 6.1588 6.2514 5.6622 6.1271 ∑ = 17.6776
K 3 5.3438 7.3348 6.1914 5.9654 CT=34.7221
R 0.8312 3.2433 0.5292 0.5420
S 0.1506 1.8176 0.0490 0.5162
表 3　方差分析表
方差来源 平方和 S 自由度 f 均方和 MS F
A 0.1506 2 0.0753 2.9927
B 1.8176 2 0.9088 36.1202＊
E=C+D 0.0516 4 0.0252
　　F 1-0.05(2 ,2)=19.00;F 1-0.01(2 ,2)=99.00
茺蔚子中生物碱以盐酸水苏碱(C7H13NO2·HCl)
计是参照 2002年药典第 237页益母草项下的有关
规定选择的 。
参考文献:
[ 1] 　阴健.中药现代研究与应用(第二册)[ M] .北京:古籍出
版社 , 1995.264.
[ 2] 　中华人民共和国药典.一部[ S] .北京:化学工业出版
社 , 2000.237.
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第 9卷第 2 期
2003年 4 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.9 , No.2
Apr., 2003