全 文 ：[研究简报 ]
毛细管电泳高频电导法测定青风藤药材及
制剂中青藤碱的含量
翟海云1 , 王峻梅2 , 陈缵光2 , 徐健君1 , 蔡沛祥1 , 莫金垣1
( 1. 中山大学化学与化学工程学院 , 广州 510275; 2. 中山大学药学院 , 广州 510089)
关键词　毛细管电泳 ; 高频电导检测 ; 非接触式电导检测 ; 青藤碱 ; 青风藤
中图分类号　 O657　　　　文献标识码　 A　　　　文章编号　 0251-0790( 2004) 12-2256-03
收稿日期: 2004-01-07.
基金项目: 国家自然科学基金 (批准号: 20375049)和广东省自然科学基金重点项目 (批准号: 021808)资助 .
联系人简介: 陈缵光 ( 1961年出生 ) ,男 , 博士 , 副教授 , 从事分析仪器、药物分析和临床化学等研究 .
E-mail: chenzg@ g zsums. edu. cn
青藤碱 ( Sinomenine)是具有镇痛、 消炎、 怯风除湿、活血化瘀、 增强免疫和抗癌等作用的生物碱
Scheme 1　 Structure of sinomenine
单体 (结构式见 Scheme 1) , 它存在于防己科植物青风藤和毛
青藤的干燥藤茎中 [1 ] . 在临床上 , 已有正青风痛宁片、 盐酸
青藤碱注射液和毛青藤总片等制剂 , 用于治疗各种急慢性风
湿痛、 肿胀以及心率失常等病症 [2 ] . 青藤碱含量测定常用非
水滴定法 , 但该法专属性差 , 实验结果易偏高 . 此外 , 还有
薄层色谱法、 薄层 -分光光度法、 薄层 -胶束荧光法、 极谱法
和高效液相色谱法等 [3～ 7 ] . 用毛细管电泳测定青藤碱的方法
尚未见报道 . 与毛细管电泳光学检测相比 , 毛细管电泳电化
学检测不存在光程短、 光路复杂及仪器价格昂贵等问题 , 装置简便易行 . 电导检测是一种通用的电化
学检测方法 , 其中高频电导检测法 (非接触式电导检测法 )的检测电极与被测溶液隔离 , 除了具有普通
电导检测的优点之外 , 还避免了普通电导检测装置因电极与溶液接触而导致的诸多问题 , 从而解决了
分离电场对检测的干扰和电极中毒等问题 , 故电极寿命长 , 成本低 , 检测灵敏度较高 , 使用极为方便 ,
可广泛用于荷电成分的检测 . 本文采用自行研制的毛细管电泳高频电导检测装置 [8 ] , 在弱酸性 NaAc-
HAc缓冲液中 , 对盐酸青藤碱片剂和中药青风藤中的青藤碱进行了分析 .
1　实验部分
1. 1　仪器与试剂　 自制高压电源 [ 9]和高频电导检测器 [ 8 ] . 石英毛细管 ( 150μm i. d. )为河北永年光导
纤维厂产品 . 数据工作站由中山大学化学与化学工程学院提供 , 信号采集使用台湾 EVOC制造的
PCL-711B型 A /D卡 ; 数据记录与处理在普通 P4微机上完成 . 中草药粉碎机 . 超声波提取器 .
盐酸青藤碱对照品 (中国药品生物制品检定所 ) , 三 (羟甲基 )氨基甲烷 ( T ris, G. R.级 , 香港分装 ) ;
其它试剂均为国产分析纯 ; 所用水为二次蒸馏水 ; 青风藤药材购自广州采芝林药店 (产地: 陕西太白 ) ;
正清风痛宁片 (北京万辉药业集团生产 ) .
1. 2　对照品和样品溶液的制备　称 0. 015 0 g盐酸青藤碱对照品 , 加水定容于 10 mL容量瓶中 , 得
1. 50 mg /mL的对照溶液 . 称 0. 200 0 g粉碎过筛后的青风藤粉末 , 加入 5 mL 75%的乙醇 , 浸泡 10
min, 超声 30 min, 振摇后静置 ,过滤 ; 取残渣加入 5mL 75%的乙醇 , 再次超声提取 30 min,振摇后静
置 , 过滤 , 合并 2次滤液 , 定容于 10 mL容量瓶中 , 得青风藤待测样品溶液 . 取 20片正清风痛宁片 ,
研细 , 精密称取适量 , 加 5 m L水 , 超声溶解 10 min, 过滤 ; 取残渣加入 5 mL水 , 再次超声溶解 10
Vol. 25 高 等 学 校 化 学 学 报 　 No. 12　
2 0 0 4年 12月 　　 　　　　　 CHEM ICAL JOURN AL OF CHINE SE UN IVERSITIES　　　　　 　　 2256～ 2258　
min, 过滤 , 合并 2次滤液 , 定容于 10 mL容量瓶中 , 得正清风痛宁片待测样品溶液 .
1. 3　实验方法　毛细管在使用前 , 先用 0. 1 mol /L NaOH, H2O和运行缓冲液分别洗 30, 15和
15 min. 每次进样运行完毕后 , 用运行缓冲液冲洗 30 s后再进样 . 采用重力虹吸方式进样 , 进样时间
14 s, 进样高度 25 cm, 分离电压 22 kV. 实验在恒温 ( 25℃ )和恒湿 (相对湿度 60% )条件下进行 .
2　结果与讨论
2. 1　缓冲溶液种类的影响　考察了 HAc-NaAc, Tris-H3 BO3 , NaH2 PO4-H3 PO4和 Na2 HPO4 -NaH2 PO4
等几种缓冲体系对分离的影响 . 结果表明 , 在 Tris-H3 BO3缓冲体系中 , 青藤碱不出峰 ; 在 NaH2 PO4-
H3 PO4和 Na2HPO4-NaH2 PO4缓冲体系中电泳电流较大 , 青藤碱峰形较差 , 出峰较慢 ; HAc-NaAc是较
理想的缓冲体系 , 在较高的分离电压下电泳电流很小 , 出峰较快 , 且峰形对称 , 检测灵敏度较高 , 故选
择 HAc-NaAc为运行缓冲溶液 . 分别以摩尔比为 2∶ 0, 2∶ 1, 2∶ 2, 2∶ 3, 2∶ 4, 2∶ 5, 2∶ 6的 HAc-
Fig. 1　 Effect of the concentration of NaAc
NaAc缓冲体系作为运行缓冲溶液 , 考察了体系摩
尔比对分离检测的影响 , 结果见图 1. 由图 1可见 ,
随着 NaAc浓度增大 , 青藤碱的信号逐渐增大 , 迁
移时间缓慢增加 , 当 NaAc浓度超过 3. 0 mmol /L
时 , 信号强度逐渐降低 . 可以认为在较强的酸性条
件下 ,青藤碱分子中的叔丁基 N原子经质子化后带
正电荷 , 其迁移方向与 EO F方向一致 , 故出峰较
快 . 随着酸性减弱 , 质子平衡发生移动 , 青藤碱的
质子化程度降低 , 所带的有效正电荷相应减少 , 故出峰延迟 ; 响应信号的强度与青藤碱的质子化程度
有关 , 在 NaAc浓度为 3. 0 mmol /L时达到最大 , 故此时灵敏度最高 . 实验选择 HAc-NaAc的浓度为
2. 0 mmol /L-3. 0 mmol /L( pH值为 4. 9) .
Fig. 2　 El ectrophorogram of Sinomenine standard(A) , Sinomenium acutum sampl e(B) and tablets sample(C)
Separation voltage: 20 kV; injection time: 14 s; injection h eigh t: 25 cm; buffer: 2. 0 mmol /L HAc-3. 0 mmol /L
NaAc-10. 0% CH3O H. Peak 1. Sinomenine; Peak 2. H2O; Peak 3, 4. unknow n impuriti es.
2. 2　添加剂种类和加入量的影响　考察了不同种类的有机溶剂甲醇、 乙醇、 乙腈、丙酮和四氢呋喃等
添加剂 (体积分数均为 10% )对分离测定的影响 . 结果表明 , 选用甲醇添加剂可有效地提高青藤碱的检
测灵敏度 . 考察了添加体积分数为 0, 5. 0% , 10. 0% , 15. 0% , 20. 0% , 25. 0%和 30. 0%的甲醇缓冲
液体系对分离和检测的影响 , 结果表明 , 随着甲醇体积分数增大 , 电泳电流变小 , 出峰时间逐渐延迟 ,
峰高先增大后减小 , 综合考虑检测灵敏度和出峰时间等因素 , 选择甲醇的体积分数为 10. 0% .
2. 3　分离电压和进样量的选择　考察了 10～ 28 kV的分离电压对分离的影响 . 结果表明 , 提高电压
可以提高分离度和缩短分析时间 , 但电压太高时 , 体系产生的焦耳热增加 , 基线噪音较大 , 分离度变
差 , 不利于分离 . 因此 , 综合两种因素考虑 , 优化条件为 22. 0 kV.
2. 4　最佳实验条件和线性范围　选定的最佳条件如下: 分离介质为 2. 0 mmol /L HAc-3. 0 mmol /L
NaAc-10. 0% CH3OH(体积分数 ) , pH= 4. 9, 分离电压 22 kV, 以 25 cm位差虹吸进样 14 s, 毛细管总
长 65 cm , 有效长度 55 cm. 图 2( A)为优化条件下青藤碱对照品的毛细管电泳图 , 青藤碱质量浓度在
1. 0～ 36. 0μg /mL范围内线性关系良好 . 线性方程为 Y= 56. 4X+ 39. 2(Y为峰面积 ; X 为质量浓度 ,
μg /mL) , r= 0. 998, 检出限为 0. 2μg /mL( S /N= 3) . 方法重现性好 , 峰面积的 RSD为 1. 4% (n= 6) .
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No. 12 翟海云等: 毛细管电泳高频电导法测定青风藤药材及制剂中青藤碱的含量 　　　
Tabl e 1　 Determination resul ts of the samples
Detection items Tablet s Sinomenium acutum
Back ground / (μg· mL- 1) 12. 4 12. 4 12. 4 14. 0 14. 0 14. 0
Addition /(μg· mL- 1 ) 5. 0 10. 0 20. 0 5. 0 10. 0 20. 0
Found / (μg· mL- 1 ) 17. 2 22. 1 32. 8 18. 9 23. 9 34. 3
Recov ery(% ) 96 97 102 98 99 102
2. 5　样品提取、 分析和加标回收实验　实验曾采用运行缓冲液和不同浓度乙醇溶液为溶剂提取青风
藤 . 将提取液适当稀释后进样测定 , 结果发现 , 以运行缓冲液为溶剂提取的样品溶液进样后 , 背景值
较大 , 杂峰较多 , 结果偏低 . 乙醇的体积分数对提取效果影响较大 , 经考察 , 体积分数为 75%的乙醇
水溶液提取效果较好 . 在选定的实验条件下 , 将青风藤提取液稀释 5倍 , 进样测定 , 结果见图 2( B) ,
根据线性回归方程计算得青风藤中青藤碱含
量为 0. 70% . 取片剂样品溶液适当稀释后进
样测定 , 毛细管电泳图见图 2( C) , 计算得片
剂中青藤碱含量为 19. 2 mg /片 . 分别将对
照品溶液与两种样品溶液按不同比例混合 ,
测得标准加入回收率见表 1.
参　考　文　献
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Determination of Sinomenine in Sinomenium acutum and
Sinomenium Tablets by Capillary Electrophoresis with
High Frequency Conductivity Detector
ZHAI Hai-Yun1 , WANG Jun-M ei2 , CHEN Zuan-Guang2*
XU Jian-Jun1 , CAI Pei-Xiang1 , M O Jin-Yuan1
( 1. College of Chemistry and Chemical Engineering , Sun Yat -sen University , Guangzhou 510275, China;
2. School of Pharamaceutical Sciences , Sun Yat-sen University , Guangzhou 510089, China)
Abstract　 A method based on capillary electrophoresis with a high f requency conductivity detection w as
developed for the determination of Sinomenine. The key factors for separation and determination w ere
studied and the best analysis conditions were obtained. In the buffer of 2. 0 mmol /L HAc-3. 0 mmol /L
NaAc-10. 0% CH3OH at a separation voltage of 22 kV , Sinomenine in the sample could be separa ted and
detected wi thin 4 min. The linear mass concentration of Sinomenine is in the range of 1. 0— 36. 0μg /mL,
the limit of detection reached 0. 20μg /mL. The method was used for the analysis of Sinomenine in
Sinomenium acutum and tablets satisfactorily w ith a recovery of 96%— 102% .
Keywords　 Capillary electropho resis; High f requency conductivi ty detection; Contact less conductivi ty de-
tection; Sinomenine; Sinomenium acutum ( Ed.: K, G, X)
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　　　 高 等 学 校 化 学 学 报 Vol. 25