全 文 ：2005 年 3 月第 7 卷第 1 期
M arch. 2005 , Vo l. 7 , No. 1 湖北中医学院学报Journa l of Hubei Co llege of TCM
　　作者简介:刘超英(1958 -),女 ,湖北中医学院实验师。
青风藤中青藤碱的提取分离方法比较研究
刘超英 ,乔　明 ,范卫峰
(湖北中医学院 , 湖北 武汉 430061)
　　摘要:目的:比较研究青风藤中青藤碱的提取与测定方法。方法:采用方法 l和方法 2 提取青藤碱;选用正相
色谱柱 1:ZORBAX　RX - SIL柱(4. 6mm×150 mm , 5μm),流速为 0. 6ml min - 1和反相色谱柱 , 2:SUPELCOSIL
柱(4. 6mm×250mm , 5μm), 流速为 0. 8ml min - 1 ;甲醇-乙二胺(100∶0. 125)为流动相;检测波长为 262 nm。 结
果:两种方法的青藤碱均在 0. 519 - 2. 595μg 范围内具有良好的线性关系 ( r=0. 9996);方法回收率为 95%～
101%之间。结论:两种方法均可行 、可靠 、可控。
　　关键词:青风藤;青藤碱;高效液相色谱法
　　中图分类号:R284. 1　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1008 - 987X(2005)01 - 0049 - 02
Study on Sinomeine of the Extraction and
Determination in Qingfengten
L IU Chao-ying , QIAO Ming , FAN Wei-feng
(Colleg e of Phy tochemistry , H ubei Co lleg e of T raditional Chineses Medicine , Wuhan 430061)
Abstract :Objec tie:S tudy of the method on Sinomeine ex traction and determination in Q ingfeng teng . Methods:
The ex traction 1 and 2 , the chroma to g rapho ric column 1 w as ZORBAX RX - SIL(4. 6 ～ 150mm , 5μm), flow rate
at 0. 6ml ～ min- 1 , the chromatog raphoric column 2 w as SUPELCOSIL (4. 6 ×250 mm , 5μm) flow rate at
0. 8 ml min- 1 (4. 6 ×250mm , 5μm);methano l-ethylenediamine(100 ∶0. 125) as mobile phase;the assaying
waveleng th was 262nm。Results:Sinomeine w as a llowed the determination o f 0. 519 ～ 2. 595μg w ith repr oducibility
(r=0. 9996), the recove ry w as 95% ～ 101%. Conclusion:The tw o methods w ere available , creditable and
controllable.
Key words:Qingfengteng;Sinomeine;HPLC
青风藤是常用中药之一 , 收载于 《中华人民共和国药
典》2000 年版。青风藤具有祛风 、 通经络 、 利小便之功
效 , 用于治疗风湿痹痛 、 关节肿胀 、 麻痹瘙痒 , 还有抗心
率失常和降压等作用。2000 年版药典收载的青风藤项下含
量测定方法 , 色谱柱采用硅胶填充剂[ 1] ;而文献[ 2]等对青
风藤及复方制剂中的青藤碱含量测定则采用硅胶键合相填
充剂。笔者考察了正相和反相高效色谱法 、 2000 年版药典
提取方法和 1995 年版药典试管反应前处理提取方法之间的
差异 , 其分离结果均为满意。现将研究结果报道如下。
1　材料和方法
1. 1　仪器和试药
美国安捷伦 1100 系列高效液相色谱仪 (单元泵 , 紫外
检测器 , 手动进样器)。青藤碱对照品 (中国药品生物制品
检定所);青风藤药材 (购自湖北中医学院附属医院药房 ,
经中医学院鉴定教研室陈科力教授鉴定为正品);水为重蒸
水;所用试剂均为分析纯。
1. 2　方法
1. 2. 1　色谱条件　色谱柱 1:ZORBAX 　RX-SIL 柱
(4. 6×150mm , 5μm), 流速为 0. 5 m l min- 1;色谱柱 2:
SUPELCOSIL柱 (4. 6×250 mm , 5μm), 流速为 0. 8ml
min- 1 ;甲醇-乙二胺 (100∶0. 125) 为流动相;检测波长
为 262nm。
1. 2. 2　溶液配制
(1) 对照品溶液的制备:精密称取对照品适量 , 加甲
醇溶解 , 摇匀 , 使成 0. 519mg ml- 1的溶液 , 作为对照品
溶液。
(2) 供试品溶液的制备:
方法 1:精密称取青风藤粉末 (过 60 目筛) 0. 5 g , 置
具塞锥形瓶中 , 精密加入 70%乙醇20 ml , 密塞 , 称定超声
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湖北中医学院学报 2005 年第 7 卷第 1 期
处理 20 min , 放冷 , 再称定 , 用 70%乙醇补足减失的重量 ,
摇匀 , 滤过。取续滤液 , 即得供试品溶液 1;
方法 2:精密称取青风藤粉末 (过 60 目筛) 0. 5g , 置
圆底烧瓶中 , 精密加入 70%乙醇 20 ml , 回流提取 30 min ,
放冷 , 滤过 , 滤液蒸干 , 残渣加盐酸溶液 (1—50) 10 ml
使溶解 , 滤过 , 滤液用氨试液调 pH 至碱性 , 加氯仿 20
ml , 振摇 2 次 , 每次 10ml , 氯仿液蒸干 , 残渣加甲醇溶解
至 20ml , 摇匀 , 即得供试品溶液 2。
3　结果
3. 1　线性关系考察
精密吸取对照品溶液 1、 2 、 3 、 4、 5μl , 注入液相色谱
仪中分析 , 以峰面积积分值 Y 为纵坐标 , 青藤碱进样量 X
为横 坐标 , 绘 制 标准 曲 线 , 得 回 归 方程 为:Y =
2815. 524lX - 212. 971 , r =0. 9996 , 青藤碱在 0. 519 -
2. 595μg 范围内与峰面积具有良好的线性关系。
3. 2　精密度试验
精密吸取对照品溶液 5μl , 按上述色谱条件 , 连续进
样 6 次 , 测定峰面积积分值 , 计算结果为:RSD为 0. 68%。
3. 3　稳定性试验
精密吸取对照品溶液 5μl , 在 0 、 2、 4 、 6、 8 、 10h 内
按上述色谱条件进行考察 , 测定峰面积积分值 , 计算 RSD
为 1. 08%。结果说明对照品溶液在 10h 内稳定性良好。
3. 4　回收率试验
精密称取已知含量的青风藤粉末 0. 20 g , 精密加入青
藤碱 0. 415 mg , 按 1. 2. 2 项下供试品溶液方法制备 , 测定
结果见表 1
表 1　回收率测定结果 (n=5 , %)
1 2 3 4 5 X
方法 1 正相柱 103. 99 100. 25 98. 83 99. 44 101. 39 100. 58反相柱 98. 99 100. 05 99. 90 102. 01 101. 21 101. 68
方法 2 正相柱 96. 65 99. 23 97. 25 97. 33 96. 53 95. 98反相柱 95. 86 95. 45 97. 54 95. 53 96. 51 97. 39
3. 5　样品测定
取青风藤粉末 0. 50 g , 共 10 份 , 得供试品溶液 l和供
试品溶液 2 , 测定 , 以外标法计算青藤碱的含量 (n=5),
样品含量见表 2
表 2　样品测定结果 (n=5 , %)
1 2 3 4 5 X
方法 1 正相柱 1. 97 1. 99 1. 97 1. 93 1. 95 1. 96反相柱 1. 99 1. 98 1. 98 2. 00 2. 00 1. 99
方法 2 正相柱 1. 38 1. 38 1. 37 1. 37 1. 37 1. 37反相柱 1. 36 1. 35 1. 38 1. 38 1. 39 1. 37
4　讨论
分别采用两种方法提取和分离青藤碱 , 含量结果基本
相近 (见图 1)。方法 l操作较简便 , 色谱杂质峰相对要多 ,
但不影响色谱峰的分离;方法 2 操作相对繁琐 , 但色谱杂
质峰明显要少 , 适用于复方制剂的提取。另方法 2 的回流
提取可改为超声提取 , 溶剂的用量和提取次数有待进一步
研究。可视样品成分的复杂性选择提取方法。
在选择正相或反相色谱柱分离时 , 既可根据实验室条
件而定 , 也可根据样品成分的复杂性而定。笔者建议 , 含
有水 (70%乙醇提取) 的供试品 , 可选用反相柱分离;选
用正相柱的弊端是分析完以后 , 冲洗色谱柱不能用水 , 供
试品中的水性成分会残留在色谱柱中 , 造成色谱柱的污染 ,
导致损伤色谱柱。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会中华人民共和国药典 [ M] . 北京. 化学工
业出版社 2000 , I (一部):154.
[ 2] 　张转平 , 朱朝德 , 高海 , 等. 青风藤中青藤碱的含量考察
[ J] , 西北药学杂志 1998 , 13 (6):282.
(收稿日期:2004 - 12 - 11　编辑:郑晓屏)
图 1　高效液相色谱图
A 、 D. 对照品;B、 E. 样品 (方法 1);C 、 F. 样品 (方法 2)
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