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回回蒜的急性毒性和抗炎镇痛作用研究



全 文 :收稿日期:2013-08-11; 修订日期:2014-03-05
基金项目:宁夏自然科学基金( No. NZ11137)
作者简介:赵启鹏( 1981-) ,男( 汉族) ,山东枣庄人,宁夏医科大学副教
授,博士学位,主要从事中药及民族药药效物质基础研究工作.
* 通讯作者简介:赵云生( 1974-) ,男( 汉族) ,山西闻喜人,宁夏医科大学
副教授,博士学位,主要从事中药及民族药品种、质量与资源开发研究工
作.
回回蒜的急性毒性和抗炎镇痛作用研究
赵启鹏1,2,3,4,朱亚飞1,赵云生1,2,3,4*
(1.宁夏医科大学药学院,宁夏 银川 750004; 2.宁夏回医药协同创新中心,宁夏 银川 750004;
3.回医药现代化省部共建教育部重点实验室,宁夏 银川 750004;
4.宁夏回药现代化工程技术研究中心,宁夏 银川 750004)
摘要:目的 研究回回蒜水提物的急性毒性和抗炎镇痛作用。方法 小鼠一次灌胃给药后,观察 14 d内中毒情况,采用改
良寇氏法计算 LD50及 95%可信限。采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验考察抗炎活性;采用醋酸致小鼠扭体和热板法实验
考察镇痛活性。结果 回回蒜水提物的 LD50及 95%可信限为 99. 68( 93. 25 ~ 106. 56 ) g /kg。回回蒜可以明显降低二甲苯
致小鼠耳廓肿胀度;可以明显减少扭体次数;提高痛阈值。结论 回回蒜有毒,可以测出 LD50 ;回回蒜有一定的抗炎镇痛
作用。
关键词:回回蒜; 急性毒性; 抗炎; 镇痛
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2014. 06. 024
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 06-1345-02
回回蒜 Rannunculus chinensis Bunge. 是毛茛科植物[1],始载
于《救荒本草》,又名水胡椒、蝎虎草等,生于溪边或湿草地。味
辛、苦;温;有小毒。常用于消炎退肿、截疟、杀虫、治肝炎、肝硬化
腹水、牙痛、胃痛、风湿痛等[2]。目前仅有对回回蒜种子的成分
及相关药理学研究[3,4];回回蒜全草中的总黄酮及微量元素的测
定[5,6]。对回回蒜急性毒性、抗炎和镇痛的研究均未见报道。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 KQ -500DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);BP221S型电子天平(德国赛多利斯);HH - 2 数显恒
温水浴锅(金坛市鸿科仪器厂);微量移液器(芬兰百得)。
1. 2 试药 回回蒜水提液制备:称取回回蒜药材,加入 10 倍水量
的水超声提取 30 min,抽滤。抽滤后药渣加 8 倍水量的水超声提
取 30 min,抽滤。将两次滤液合并水浴浓缩至所需浓度,备用。
冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司,批号:20100302);二甲苯
(天津市大茂化学试剂厂,批号:20101123)。吲哚美辛肠溶片
(山西云鹏制药有限公司,批号:A110903)
1. 3 动物 昆明种小鼠,SPF 级,雌雄各半,体质量(20 ± 2)g,由
宁夏医科大学试验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(宁)2011
- 0001。
2 方法
2. 1 急性毒性实验
2. 1. 1 最高致死剂量、最低致死剂量的测定 取昆明种小鼠 30
只,雌雄各半,按体质量随机分 5 组(5 个不同浓度),每组 6 只。
每只小鼠均按 40 ml /kg 给药 1 次,分别观察小鼠灌胃后的死亡
情况,估算出回回蒜水提物的最高致死剂量(Dm,导致动物全部
死亡的最小剂量,下同)、最低致死剂量(Dn,不引起动物死亡的
最大剂量,下同),供测定 LD50时参考。
2. 1. 2 LD50的测定 取昆明种小鼠 50 只,雌雄各半,分别按体质
量分层后再随机分为 5 组,给药前均禁食 12h,不禁水。样品依
据 Dm、Dn的值等比各设 5 个剂量组。每只小鼠均按 40ml /kg给
药,分别观察小鼠灌胃相应浓度的药物后 14 d 内出现的中毒症
状,死亡情况及体质量变化情况。用改良寇氏法计算各药物的
LD50及 95%的可信区间。
2. 2 回回蒜对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[7] 昆明种小鼠 50
只,雌、雄各半,随机分为 5 组,每组 10 只,回回蒜高(16g /kg)、中
(12g /kg)、低剂量(8g /kg),吲哚美辛(7. 50mg /kg)和模型对照
组,以 20ml /kg 体积灌胃给药,模型对照组给予等容积蒸馏水。
连续给药 5d,末次给药后 30min,将二甲苯用微量移液枪按 10μl /
面(即两面共 20μl)涂于小鼠左耳前后两面,右耳做对照,涂二甲
苯后 1h脱颈处死每只小鼠,立即剪下左右耳,以直径为 9mm 的
打孔器取左右耳相同部位的耳片,称重,以左右耳片重量差值为
肿胀度(mg),并计算肿胀抑制效率。肿胀抑制率(%)=(空白
组平均肿胀度 - 给药组平均肿胀度)÷ 空白组平均肿胀度 ×
100%
2. 3 回回蒜对醋酸致小鼠扭体反应的影响 动物、分组与给药同
“2. 2”项,每日给药 1 次,连续 5 d,于末次给药后 30 min,每只小
鼠腹腔注射 0. 6%冰醋酸溶液,注射后观察 15 min内的扭体反应
(腹部内凹,伸展后肢,臀部抬高)次数。计算抑制率。抑制百分
率(%)=(空白对照组扭体次数 -用药组扭体次数)÷空白对照
组扭体次数 × 100%。
2. 4 回回蒜对热板致小鼠痛反应的影响 取雌性小鼠,体质量
(20 ± 2)g。筛选出痛阈值在 10 ~ 30s内的小鼠 50 只,分组给药
同“2. 2”项下。给药前记录每只小鼠痛阈值,共 2 次,取其平均
值。末次给药后 15,40,60,90,120,150,180min,分别测定小鼠的
痛阀值,观察痛阈值变化(如超过 60s,则按 60s计算)。
2. 5 数据统计 所有数据均应用 SPSS 10. 0 for windows软件进行
统计学处理,所有计量数据以 珋x ± s表示。
3 结果
3. 1 回回蒜水提物的急性毒性实验结果 Dm 和 Dn及按改良寇
氏法计算 LD50及 95%可信限结果见表 1。回回蒜 LD50及 95%可
信限是 99. 68 和(93. 25 ~ 106. 56)g /kg。
表 1 回回蒜急性毒性试验结果 g·kg - 1
药物 Dm Dn LD50 95%可信限
回回蒜水提物 144. 00 76. 68 99. 68 93. 25 ~ 106. 56
3. 2 回回蒜水提物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 表 2 结果
提示,回回蒜高、低剂量组对二甲苯引起的肿胀反应有显著的抑
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2014 VOL. 25 NO. 6 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 6 期
制作用(P < 0. 05)。
表 2 回回蒜对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(珋x ± s)
组别 剂量 / g·kg -1 肿胀度 /mg 抑制率(%)
模型对照组 - 26. 9 ± 14. 3 -
回回蒜高剂量 16 13. 8 ± 5. 3* 48. 8
回回蒜中剂量 12 21. 2 ± 13. 6 21. 1
回回蒜低剂量 8 15. 6 ± 6. 0 * 42. 2
吲哚美辛 0. 0075 10. 8 ± 8. 0* 60. 0
与空白对照比较,* P < 0. 0 5 ,* *P < 0. 01;n = 10
3. 3 回回蒜水提物对醋酸致小鼠扭体次数的影响 表 3 结果提
示,与空白对照组比较,回回蒜各剂量组均能减少小鼠扭体反应
次数。回回蒜高剂量和中剂量减少小鼠扭体次数作用显著。
3. 4 回回蒜水提物对小鼠痛阈值的影响 从表 4 和图 1 可以得
出,回回蒜水提物高、中和低剂量均可以提高小鼠疼痛反应潜伏
期。回回蒜高剂量组在给药后 60min显著提高痛阈值,效果维持
至给药后 180min。回回蒜中、低剂量组在给药后 90min提高痛阈
值作用明显,中剂量维持至给药后 150min;低剂量维持至给药后
120min。
表 3 回回蒜对醋酸致小鼠扭体反应的影响(珋x ± s)
组别 剂量 / g·kg -1 扭体次数 抑制率(%)
空白对照组 - 20. 3 ± 4. 0 -
回回蒜高剂量 16 15. 7 ± 5. 4* 22. 7
回回蒜中剂量 12 12. 3 ± 4. 5** 39. 5
回回蒜低剂量 8 16. 7 ± 8. 0 17. 7
吲哚美辛 0. 0075 3. 4 ± 3. 4** 83. 3
与空白对照比较:* P < 0. 0 5 ,* *P < 0. 01;n = 10
表 4 回回蒜水提物对热板所致小鼠痛阈的影响(珋x ± s)
组别 剂量 /g·kg - 1
痛阈 / s
0 min 15 min 40 min 60 min 90 min 120 min 150 min 180 min
空白对照组 - 17. 2 ± 3. 79 17. 7 ± 5. 95 18. 5 ± 4. 12 19. 6 ± 3. 06 19. 3 ± 8. 19 19. 11 ± 7. 42 23. 8 ± 5. 77 18. 1 ± 3. 84
回回蒜高剂量 16 20. 9 ± 4. 53 18. 2 ± 4. 94 24. 5 ± 8. 21 38 ± 16. 20** 37. 1 ± 16. 00** 40. 2 ± 9. 07** 40. 1 ± 11. 69**32. 6 ± 10. 39**
回回蒜中剂量 12 19. 6 ± 5. 52 20. 9 ± 6. 51 18. 9 ± 6. 94 22. 4 ± 8. 85 31. 2 ± 12. 55* 31. 1 ± 7. 56** 33. 4 ± 10. 81* 23. 1 ± 11. 33
回回蒜低剂量 8 19. 3 ± 4. 37 21. 33 ± 5. 02 21. 3 ± 4. 52 26. 1 ± 10. 32 34 ± 13. 04** 37 ± 12. 81** 28. 4 ± 9. 45 18. 8 ± 5. 69
吲哚美辛 0. 0075 18. 2 ± 5. 59 21. 2 ± 5. 35 21. 2 ± 5. 81 28. 1 ± 7. 40** 36. 2 ± 13. 16**34. 4 ± 12. 33** 28. 9 ± 11. 27 29. 3 ± 12. 64*
与空白对照比较,* P < 0. 0 5 ,* * P < 0. 01;n = 10
图 1 回回蒜水提物对小鼠痛阈值的影响
4 讨论
回回蒜功效及临床应用较多,具有退黄、消肿、截疟、止痛、杀
虫等功效;用于黄疸、臌胀、疟疾、风湿痹痛、肝炎、肝硬化腹水等。
但回回蒜的药学基础研究和临床应用报道均较少,不利于回回蒜
的开发与利用。针对回回蒜毒性、抗炎、镇痛及保肝作用研究,有
助于回回蒜用于治疗风湿痹痛、肝炎及肝硬化腹水等难治性疾
病。本实验首次对回回蒜的急性毒性、抗炎、镇痛进行了初步研
究。本实验急性毒性结果可以为回回蒜临床安全用药提供一定
的参考,为回回蒜的其它药理研究提供剂量设置依据;回回蒜的
抗炎、镇痛结果为回回蒜临床应用于疼痛及炎症提供一定的实验
依据。回回蒜其它药理作用及其机制还在进一步的研究中。
参考文献:
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