全 文 ：收稿日期:2004-06-22
鸡血藤药材中表儿茶素的含量测定
边宝林 ,王宏洁 ,司　南
(中国中医研究院中药研究所　北京　100700)
　　摘要:目的:通过高效液相色谱法 、薄层色谱法建立了道地药材鸡血藤中有效成分表儿茶素的含量测定及刺芒柄花素薄层
鉴别方法。方法:采用 HPLC 及TLC 法测定。结果:对不同地区市售的药材进行了表儿茶素的含量测定及刺芒柄花素鉴别。结
论:为道地药材鸡血藤质量控制方法的建立奠定了基础。
关键词:鸡血藤;表儿茶素;含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2004)06-0031-03
　　鸡血藤为豆科植物密花豆(Spatholobus suberectus
Dunn)干燥藤茎 ,始载于《本草备要》 ,为常用活血化
瘀中药 ,具有补血 、活血 、通络作用;临床用于月经不
调 ,血虚萎黄 ,麻木瘫痪 ,风湿痹痛等疾病。国内外
学者近 30多年来从鸡血藤中分离出 30多种化合
物 , 主要为黄酮类 、三萜类 、香豆素类 、甾醇类
等[ 1 ～ 6] ,由于所含成分的含量较低 ,至今为止尚未见
有关成分的含量测定的相关报道。我们从豆科植物
密花豆分离出表儿茶素及刺芒柄花素 ,并首次对其
中的表儿茶素进行了含量测定方法学研究及刺芒柄
花素的薄层色谱鉴别方法研究 。从而建立了鸡血藤
药材中的表儿茶素含量测定方法及刺芒柄花素的薄
层色谱鉴别方法 。
1　仪器 、试药
安捷伦HP-1100 ,KQ-100超声波清洗器:昆山市
超声技术有限公司 。甲醇:(色谱级)北京化工厂。
水:重蒸水 。聚酰胺:江苏临江试剂化工厂 。表儿茶
素自制。
2　方法与结果
2.1　鉴别　刺芒柄花素对照品纯度检查。刺芒柄
花素对照品的纯度在 90%以上 ,符合薄层鉴别的要
求(见附图 1)。根据鸡血藤所含化学成分及化合物
刺芒柄花素的理化性质 ,经过反复摸索 ,最终确定提
取方法为取本品粉末 1.0g ,加入 95%乙醇 100mL ,回
流提取 lh ,滤过 ,滤液蒸干 ,用甲醇2mL 溶解 ,加入硅
胶1g 拌匀 ,挥干溶剂 ,倾入硅胶层析柱中(100 ～ 200
目 ,2g ,内径 1.0cm ,干法装柱),依次用石油醚(60 ～
90℃)30mL、氯仿40mL洗脱 ,收集氯仿沈脱液 ,蒸干 ,
用氯仿 0.5mL溶解 ,作为供试品溶液 。另取刺芒柄
花素对照品 ,加甲醇制成每 lmL 含 1.0mg 的溶液 ,作
为对照品溶液 。照薄层色谱法(附录 Ⅵ B)试验 ,吸
取上述两种溶液 5 ～ 10μL ,分别点于同一硅胶 G 薄
层板上 ,以氯仿 -甲醇(15∶0.5)为展开剂 ,展开 ,展
距约 10cm ,取出 ,晾干 ,置紫外光灯(254nm)下检视 。
供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应的位置上 ,显相
同颜色的荧光斑点。对 10个不同地区的市售药材
进行薄层色谱鉴别 ,结果见附图 2。
图 1　刺芒柄花素 HPLC色谱纯度图
图 2　十个产地药材的薄层鉴别色谱
1.上海　2.杭州　3.山东　4.北京　5.南京　
6.河南　7.山西　8.陕西　9.湖北　10.广西　
标:刺芒柄花素
2.2　含量测定
2.2.1　色谱分析条件 　色谱柱:日本产 YMC C18
(4μm 4.6 ×150mm)No:041583435(W);流动相:
0.01mol/L 柠檬酸水溶液-甲醇(80∶20);流速:
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第 10卷第 6 期
2004年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.6
Dec., 2004
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2004.06.012
0.6mL/min;波长:280nm;柱温:30℃。
2.2.2　对照品纯度检查　表儿茶素对照品的纯度
在98%以上 ,符合含量测定的要求。(见附图 3)
图 3　表儿茶素 HPLC色谱纯度图
2.2.3　提取条件选择　根据有关文献的记载及被
测成分的理化性质 ,我们比较了使用水 、50%甲醇 、
100%甲醇作为提取溶剂 ,结果显示 ,使用 50%甲醇
提取 ,表儿茶素提取率均高于水及 100%甲醇。
2.2.4　提取方法选择　我们比较了回流提取 、超声
波振荡的提取方法 ,结果显示回流提取表儿茶素重
现性较超声波振荡提取差 ,故我们采用超声波振荡
的提取方法的方法提取样品。
2.2.5　提取时间选择　我们比较了超声振荡提取
20 、30 、40min ,结果显示提取 20 、30min的表儿茶素提
取率相同 ,故选用超声振荡提取30min。
2.2.6　样品处理选择　根据鸡血藤药材中被测成
分表儿茶素的特性 ,提取液经过 D101 、SP825 、HP-20大
孔吸附树脂柱层析 、硅胶柱层析 、聚酰胺柱层析等方
法的多次筛选 ,最后确定使用聚酰胺柱层析 ,即可以
除去绝大部分干扰测定的杂质 ,而又不影响样品含
量测定。
2.2.7　供试品溶液的制备　取鸡血藤药材粗粉(过
20目筛)约 1.0g ,精密称定 ,置具塞三角瓶中 ,精密
加入 50%甲醇 50mL , 称定重量 , 超声处理(功率
100W ,频率40kHz)30min ,放至室温后 ,再称定重量 ,
用 50%甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 提取液离心
(3000转/min , 15min)。取上清液浓缩至小体积 ,拌
入1g 的聚酰胺(过 100目筛)拌匀 ,挥干溶剂 ,加到
聚酰胺干柱(100 目 , 3g , 内径 1cm)上 ,用水 50mL 、
20%甲醇 50mL 、50%甲醇 50mL依次洗脱 ,收集 50%
甲醇洗脱液 ,至 50mL 量瓶中 ,定容 ,摇匀 ,用微孔滤
膜(0.45μm)即得。
2.2.8　线性关系考察　精密称取表儿茶素对照品
1.077mg ,加入甲醇 —水(1∶1)溶液 , 制成浓度为
0.1mg/mL的对照品溶液 ,摇匀。精密量取对照品溶
液1mL ,置干燥的 2mL 量瓶中加甲醇一水(1∶1)溶液
至刻度 ,摇匀 ,分别取 1 、5 、10 、15 、20μL 注入高效液
相色谱仪 ,测定 ,以对照品峰面积的积分值为纵坐
标 ,以对照品进样量为横坐标绘制工作曲线图 ,测定
数据 计 算 得 回 归 方 程:Y = -2.75555756 +
1151.380665X , r=0.9999。线性范围0.05 ～ 1.08μg 。
2.2.9　精密度试验　精密称取对照品 ,制成浓度为
每 1mL含 0.05mg 溶液 ,进行精密度试验。RSD(%)
为 0.18。
2.2.10　重复性试验　称取样品按供试品溶液的制
备方法提取 ,平行试验 5份 ,进行含量测定 ,RSD(%)
为 2.13。可见该方法有良好的重现性。
2.2.11　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,每间隔
一定时间测定一次含量 ,测至 12h , RSD(%)为 0.53。
可见样品溶液中表儿茶素的含量至少在 12h内稳定
性良好 。
2.2.12　回收率 　精密取表儿茶素 11.423mg , 至
10mL量瓶中 ,加入甲醇 —水(1∶1)溶液至刻度 ,精密
吸取 1.5mL ,分别加入到样品中 ,按供试品溶液方法
制备供试品溶液 。测定 ,计算回收率。结果见表 1 ,
平均回收率为 101.34%, RSD为 1.58%。
表 1　回收率测定结果
取样量
(mg)
样品中表儿茶
素量(mg)
添加表儿茶
素量(mg)
测出表儿茶
素量(mg)
回收率
(%)
2015.0 1.9189 1.71345 3.6777 102.64
2083.1 1.9838 1.71345 3.7245 101.59
2047.6 1.9499 1.71345 3.6652 100.10
2209.0 2.1037 1.71345 3.8745 103.35
2199.7 2.0948 1.71345 3.7911 99.00
2.2.13　药材的测定　于不同产地购买市售药材 ,
经本所何希荣老师鉴 定为豆科植物密花 豆
(Spatholobus suberectus Dunn)干燥藤茎 。样品粉碎
后 ,按供试品溶液的制备方法进行含量测定 ,结果见
下表。
表 2　不同产地购买市售药材含量测定结果
序号 样品产地 表儿茶素含量(%)
1 南京 0.1878
2 陕西 0.1039
3 上海 0.0416
4 湖北 0.0133
5 河南 0.1122
6 山东 0.1141
7 山西 0.1205
8 北京 0.1387
9 杭州 0.0286
10 广西 0.0848
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2004年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.6
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3　结论
鸡血藤的基原植物涉及 5科 20 多种(豆科 、黄
化豆等;木通科:大血藤;五味子科:黄龙藤等;葡萄
科:大血藤;紫金牛科:白花酸藤子),其中 80%的商
品鸡血藤来源于豆科植物密花豆。中国药典 90版 、
95版及 2000年版中所收载的鸡血藤为豆科植物密
花豆(Spatholobus suberectus Dunn)干燥藤茎 ,在研究
中发现 ,鸡血藤的活性部位为水溶性成分[ 7 、8] ,经实
验证明 ,其抗凝活性成分为以表儿茶素 、儿茶素为基
本单位构成的单宁类大分子物质。本文首次对其中
的表儿茶素进行了含量测定方法学研究及刺芒柄花
素的薄层色谱鉴别方法研究。为更好的控制药材质
量 ,进一步深入研究中药鸡血藤提供了一定的试验
基础 。
参考文献:
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[ 3] 　严新启 , 林萍 , 王迪.鸡血藤脂溶性成分研究[ J] .中国
药科大学学报 , 2001 , 32(5):336.
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杂志 , 1999:34(10):686.
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from the Root[ J] .Plant Medica , 1986:5(1):34.
[ 6] 　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国
药典[ S] .北京:化学工业出版社 , 2000.一部 , 151.
[ 7] 　胡利平 , 樊良卿 ,杨锋 , 等.鸡血藤对小鼠 LAK、NK细胞
的影响[ J] .浙江中医学院学报 , 1997:21(6):29.
[ 8] 　江涛 , 唐春萍 ,李娟好 , 等.鸡血藤对大鼠主动脉环收缩
反应的影响[ J] .广东药学院学报 , 1996.12(1):33-35.
气相色谱法测定山柰中对甲氧基桂皮酸乙酯的含量
周国平1 ,章　红2
(江西省药品检验所 ,江西 南昌　330046)
　　摘要:目的:建立山柰中对甲氧基桂皮酸乙酯的含量测定方法。方法:GC 测定山柰中对甲氧基桂皮酸乙酯的含量。采用
SE-30为固定相的色谱柱 , 柱温为 200℃。结果:此方法线性关系良好(r=0.9995),平均回收率为 97.8%, 相对标准偏差 RSD为
1.1%(n=5)。结论:本法可控制药材的质量。
关键词:气相色谱;山柰;对甲氧基桂皮酸乙酯
中图分类号:R284.1　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2004)06-0033-02
Determination of ethy-p-methoxy-cinnamate in Rhizoma Kaempferiae by GC
ZHOU Gou-ping , Zhang Hong
(Jiangxi Provincial Institute for Drug Control , Nanchang 335200 , China)
Abstract:Objective:A method of determination of ethyl-p-methoxy-cinnamate in Rhizoma Kaempferiae is developed.
Method:GC was performed to determine the content of ethy-p-methoxy-cinnamate on SE-30 column , column temperature at
200℃.Results:The linearity of this method was good , and the averge recovery was 98.7%, RSD=1.1%(n =5).
Conclusion:The method is suit to control the quality of the drug.
Key words:GC;Rhizoma Kaempferiae;ethy-p-methoxy-cinnamate
　　山柰为姜科植物Kaempferia galanga L.的干燥根
茎 ,栽培于台湾 、广东 、广西和云南等地 ,是一种传统
中药[ 1] ,具有行气温中 、消食止痛之功效 。中国药典
收稿日期:2003-01-10
2000年版一部规定挥发油含量不得少于 4.5%(mL/
g) , 其中对甲氧基桂皮酸乙酯(ethyl-p-methoxy-
cinnamate)为主要成分[ 2] 。本文采用气相色谱法测
定山柰中对甲氧基桂皮酸乙酯的含量 ,方法简便 ,可
作为山柰的质量评价指标 。
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第 10卷第 6 期
2004年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.10 , No.6
Dec., 2004