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不同产地鸡血藤药材中染料木素及芒柄花素的含量测定



全 文 :分及特征性成分) ,突出主要的“地貌”以达到鉴别的目的即可。
本实验中,在全部 12 个样品中均含有 4 -煯烯、杜松烯 、α -姜黄
烯、姜烯、β -倍半水芹烯、芳基姜黄酮 、姜黄酮 、姜黄新酮 8 种
特征性成分,这些成分相对含量占挥发油总量的 80%以上,具有
典型的代表性。
1. 4 -煯烯 2.杜松烯 3. α -姜黄烯 4.姜烯 5. β -倍半水芹烯
6.芳基姜黄酮 7.姜黄酮 8.姜黄新酮 9.正十四烷
图 15 黄丝郁金挥发油的 GC /MS指纹特征图谱
由 8 个主要成分的出峰先后和相对含量为特征,形成了黄丝
郁金的指纹特征图谱,峰 1 到峰 8 的成分相对含量平均值依次为
4. 61%,5. 12%,5. 09%,11. 95%,8. 79%,13. 69%,23. 54%,
12. 41%,8 个特征峰的相对含量总和为 85. 04%;8 个主要成分
的出峰顺序及其相对含量极具特征性,形成了黄丝郁金挥发油的
特征指纹图谱,可作为黄丝郁金内在质量评价和鉴定的依据。
在 8 个特征峰中,第 6 号峰与第 7 号峰没有完全分离,其相
对含量也是通过计算机辅助分析得出的;通过分析 6 号峰(芳基
姜黄酮)和 7 号峰(姜黄酮)的化学组成后发现,二者相对分子质
量一样,均为 216,分子结构极为相似,两者的离子碎片峰十分接
近。如何优化实验条件使之完全分离有待进一步研究。
参考文献:
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收稿日期:2012-11-20; 修订日期:2012-03-14
基金项目:广东省教育部科技部企业科技特派员行动计划专项
( No. 2009B090600135) ;
广东省重大科技专项( No. 2007A032200001)
作者简介:梁永枢( 1974-) ,男( 汉族) ,广西玉林人,现任广东食品药品职
业学院副主任中药师,主要从事中药质量标准研究工作.
* 通讯作者简介:刘军民( 1973-) ,女( 汉族) ,江苏淮阴人,现任广州中医
药大学教授,博士学位,主要从事中药材 GAP 与中药材品质评价研究工
作.
不同产地鸡血藤药材中染料木素及芒柄花素的含量测定
梁永枢1,安 冉2,刘军民3* ,黄颖喻3
(1.广东食品药品职业学院,广东 广州 510520;
2.新疆农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,新疆 乌鲁木齐 830091;
3.广州中医药大学中药学院,广东 广州 510006 )
摘要:目的 测定鸡血藤药材中指标性成分染料木素和芒柄花素的含量,为其药材质量评价提供依据。方法 采用高效液
相色谱法测定 13 批不同居群及 10 批商品鸡血藤药材中染料木素和芒柄花素的含量。结果 不同居群及商品鸡血藤药材
中染料木素及芒柄花素的含量均较低,分别为 0. 002 ~ 0. 078 mg·g -1,0. 035 ~ 1. 04 mg·g -1,且含量差异明显。结论 不
同产地鸡血藤药材品质差异较大。
关键词:鸡血藤; 染料木素; 芒柄花素; 反相高效液相色谱法
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 07. 048
中图分类号:R284. 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1655-02
鸡血藤为《中国药典》(2010 年版)收载的传统大宗药材,为
豆科植物密花豆 Spatholobus suberectus Dunn 的干燥藤茎。具补
血、活血、通络的功效,用于月经不调、血虚萎黄、风湿痹痛等
症[1]。现代药理研究表明,鸡血藤具有促进造血功能、调节免
疫、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗辐射及对酪氨酸酶双向调节等多
种药理作用[2],但目前其药效物质基础并不明确,有学者虽测定
了鸡血藤中一个或多个指标性成分的含量[3,4],但其品质评价方
法及评价指标尚未明确确定,现行版《中国药典》只在鉴别项下
收录了芒柄花素的薄层色鉴别。鸡血藤主含黄酮类成分[5 ~ 8],有
儿茶素、表儿茶素等黄烷醇类成分[9],且含量较高,尚有染料木
素、芒柄花素等多种异黄酮类成分。据报道,染料木素具抗氧化、
抗肿瘤、雌激素样作用及预防心血管系统疾病等多种药理活
性[10],芒柄花素具抗癌、调节体内血脂代谢,抑制肝脏脂肪沉积
和预防动脉粥样硬化以及雌激素样等作用[11,12]。本文在建立了
HPLC法同时测定鸡血藤中染料木素和芒柄花素含量的基础上,
对不同产地野生与栽培鸡血藤及商品药材中的含量进行了分析
比较,同时也为鸡血藤药材质量控制方法的建立提供参考依据。
1 仪器、试剂与材料
芒柄花素对照品(111703 - 20050,购自中国药品生物制品检
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期
定所) ;染料木素对照品(080915,购自上海融禾医药科技有限公
司) ,纯度均大于 98%。甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其它
试剂均为分析纯。
不同产地鸡血藤药材分别实地采集于我国鸡血藤主产区广
东、广西两省的主要分布地,商品药材分别购自全国各地药店或
药材市场。经广州中医药大学刘军民教授鉴定为豆科植物密花
豆 Spatholobus suberectus Dunn的干燥藤茎,凭证标本存于广州中
医药大学中药资源研究室。详见表 2。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Diamonsil C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm,5 μm) ;
流动相为 1‰H3PO4 - 乙腈(66 ∶ 34)等度洗脱;流速 1 ml·
min -1;检测器 UV;室温检测;检测波长 254 nm;进样量:20 μl。
对照品溶液及供试品溶液色谱图见图 1。
A -对照品 B -供试品
1.染料木素 genistein 2.芒柄花素 formononetin
图 1 鸡血藤对照品及样品 HPLC图
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取染料木素、芒柄花素对照品适
量,分别加甲醇制成每 1 ml含 0. 9 mg,2 mg的溶液,作对照品贮
备液。
2. 3 供试品溶液的制备 取样品粉末(过 40 目筛)约 2 g,精密称
定,加 70%乙醇 50 ml加热回流提取 2 次,每次 15 min,合并两次
提取液,减压收溶剂至干,残渣加甲醇定容于 5 ml 棕色量瓶中,
摇匀,过 0. 45 μm的微孔滤膜,作供试品溶液。
2. 4 标准曲线的制备 精密吸取染料木素对照品贮备液,分别制
成每毫升含 9 0,45,9,0. 9,0. 09 μg 的对照品溶液。另精密吸取
芒柄花素对照品贮备液,分别制成 1 ml含 2,0. 2,0. 02,0. 002,0.
000 2 mg的对照品溶液。分别吸取上述各对照品溶液 20 μl 注
入液相色谱仪中,测定峰面积积分值。以峰面积(Y)为纵坐标,
对照品的进样量(X)为横坐标,绘制标准曲线。得到的回归方程
及相关系数分别为:Y = 8E + 07X + 15456,r = 0. 999 9;Y = 3E +
07X - 110288,r = 0. 996 8。表明染料木素和芒柄花素对照品分
别在 0. 000 9 ~ 0. 9 μg及 0. 002 ~ 20 μg范围内,峰面积与进样量
呈良好的线性关系。
2. 5 精密度实验 取对照品溶液重复进样 6 次,每次 20 μl,记录
色谱峰面积。染料木素、芒柄花素的 RSD 分别为 1. 25%,
1. 72%,表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性实验 按“2. 3”项下方法制备供试品溶液,在“2. 1”
色谱条件下,分别在 0,2,4,8,12,24 h进样 20 μl,测定,记录色谱
峰面积。染料木素、芒柄花素的 RSD 分别为 1. 90%,0. 50%,表
明供试品至少在 24 h内稳定。
2. 7 重现性试验 取同一样品(样 3)5 份,按“2. 3”项下方法制
备供试品溶液,在“2. 1”色谱条件分别进样 20 μl测定,记录色谱
峰面积。染料木素、芒柄花素的 RSD 分别为 1. 71%,1. 50%,表
明本方法重现性良好。
2. 8 回收率实验 取已知含量的样品(样 3)6 份,各 2 g,分别精
密加入与样品中染料木素、芒柄花素含量相等的对照品,按“2.
3”项下方法制备供试品溶液,在“2. 1”色谱条件下,进样 20 μl测
定,记录色谱峰面积。计算 2 种成分的平均加样回收率分别为
100. 66%,99. 72%(见表 1) ,表明该方法具有良好的回收率。
表 1 染料木素、芒柄花素加样回收率
对照

样品含量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
染料木素 0. 0146 0. 011 0. 0256 100. 54
0. 0146 0. 011 0. 0256 100. 48
0. 0146 0. 011 0. 0257 100. 84 100. 66 0. 28
0. 0146 0. 011 0. 0257 101. 16
0. 0146 0. 011 0. 0256 100. 53
0. 0146 0. 011 0. 0256 100. 42
芒柄花素 0. 0264 0. 022 0. 0484 99. 98
0. 0264 0. 022 0. 0482 98. 95
0. 0264 0. 022 0. 0484 100. 08 99. 72 0. 43
0. 0264 0. 022 0. 0483 99. 66
0. 0264 0. 022 0. 0484 100. 05
0. 0264 0. 022 0. 0483 99. 62
n =6
2. 9 含量测定 按“2. 3”项下方法制备供试品溶液,精密吸取 20
μl,按“2. 1”色谱条件注入高效液相色谱仪测定,计算含量。结
果见表 2。
表 2 鸡血藤药材中染料木素、芒柄花素的含量 mg·g - 1
序号 采集(购买)地 染料木素 芒柄花素
1 广东深圳 1 0. 009 0. 040
2 广东深圳 2 0. 004 0. 037
3 广东深圳 3 0. 011 0. 122
4 广东韶关 0. 002 0. 035
5 广东从化 0. 007 0. 127
6 广东罗定 0. 017 0. 063
7 广东岑溪 0. 058 0. 177
8 广东韶关 0. 004 0. 126
9 广东英德 0. 012 0. 371
10 广西贺州 0. 078 1. 040
11 广东广州(药圃) 0. 046 0. 237
12 广东平远(GAP基地) 0. 035 0. 113
13 广西贺州 0. 028 0. 089
14 广西百色 0. 012 0. 094
15 湖北武穴 0. 012 0. 084
16 江苏徐州 0. 020 0. 188
17 云南昆明 0. 012 0. 111
18 湖北十堰 0. 010 0. 206
19 湖南长沙 0. 018 0. 193
20 广东广州 0. 020 0. 150
21 新疆乌鲁木齐 0. 022 0. 137
22 福建厦门 0. 004 0. 104
23 江苏南京 0. 010 0. 236
样品 1 ~ 10 为实地采集的野生品,11 ~ 13 为人工栽培品,14 ~ 23 为
商品;n = 4
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 7
3 讨论
供试品溶液的制备先分别考察了提取方法(回流、超声、索
氏)及提取溶剂(甲醇、乙醇、氯仿) ,结果显示,以乙醇加热回流
提取效果为佳。进而对不同浓度乙醇(30%,50%,70%,95%)、
提取时间(15,30,45 min)、溶剂量(30,50,70 ml)及提取次数(1
次,2 次,3 次)进行了考察,结果显示,用 70%乙醇 50 ml,回流提
取 2 次,每次 15 min提取效果为佳。
测定结果显示,鸡血藤药材中染料木素和芒柄花素的含量均
较低,分别为 0. 002 ~ 0. 078 mg·g -1,0. 035 ~ 1. 04 mg·g -1,不
同居群样品间 2 种成分的含量差异均较明显。染料木素各样品
间含量相差 39 倍,大部分样品的含量在 0. 01 mg·g -1以上,实地
采集的野生品中以广西贺州产含量最高,岑溪产其次,栽培品(3
年生)的含量高于大部分野生品,而商品药材的含量普遍偏低。
鸡血藤中芒柄花素的含量,除广西贺州产样品外(含量最高,达
1. 04 mg·g -1) ,各样品间含量相差约 10 倍,但大部分样品的含
量 0. 12 mg·g -1以上,栽培品的含量介于各样品之间。另从表 2
中还可看出,广西贺州产野生品中 2 种成分的含量均高于 3 年生
栽培品,我校药圃种植的鸡血藤生长年限达 15 年以上,2 种成分
的含量相对较高。
笔者在实地资源调查与采集过程中发现,我国鸡血藤野生资
源蕴藏量正逐年减少,已远远满足不了药用需求。由于鸡血藤为
多年生野生藤茎类药材,不同环境、不同生长年限及不同采收月
份等均会影响到其体内次生代谢产物的含量,造成药材质量的不
稳定。为了确保鸡血藤药材质量的稳定与可控,很有必要开展鸡
血藤规范化种植研究及产业化基地建设。
采用本文色谱条件,染料木素和芒柄花素与其它峰分离度大
于 1. 5,理论塔板数均大于 10 000,峰形较好。本法操作简便、快
捷,适用于鸡血藤药材中染料木素和芒柄花素含量的测定。
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临床报道
收稿日期:2013-01-14; 修订日期:2013-04-01
基金项目:武汉市卫生局课题资助项目( No. WZ09D08)
作者简介:郑琼莉( 1960-) ,女( 汉族) ,湖北武汉人,现任武汉市中西医结
合医院主任医师,硕士研究生导师,学士学位,主要从事中西医结合高血
压,心力衰竭,高脂血症工作.
辛温通阳药治疗慢性心力衰竭临床疗效研究
郑琼莉,张介眉,郝建军,段刚峰,戴 榕,王 超
(武汉市中西医结合医院,国家中管局“辛温通阳治疗冠心病”重点研究室 430022)
摘要:目的 观察辛温通阳药———搏心通胶囊治疗慢性心力衰竭的临床有效性和安全性。方法 将符合入选标准的 200
例慢性心力衰竭患者,随机分为西药对照组、治疗 A组( 方证对应治疗量) 、治疗 B组( 方证对应加强量) 、治疗 C组( 方证
不对应治疗量) 及治疗 D组( 方证不对应加强量) ,共五组,每组 40 例。经过 12 周的治疗,分别观察治疗前后中医症候学
疗效、心功能分级、明尼苏达生活质量及血清 HCY和 TNF - α水平的变化情况,同时监测血尿常规、肝肾功能、空腹血糖
及 12 导联心电图。结果 所有患者中医证候、心功能明显改善( P < 0. 05 ~ 0. 01) ;所有患者和明尼苏达生活质量积分均
较治疗前得到明显改善( P < 0. 05 ~ 0. 01) ;治疗组组间比较无统计学意义( P > 0. 05) ;治疗后治疗组与对照组生活质量
积分比较,有显著性差异( P < 0. 05) ;所有治疗组患者血清 HCY、TNF - α 水平组内治疗前后比较均有统计学意义( P <
0. 05) ,与对照组比较有显著性差异( P < 0. 05) ;所有患者治疗前后血常规、尿常规、肝肾功能、空腹血糖、心电图均无异
常。结论 ①在规范西药治疗的基础上,加服辛温通阳药———搏心通胶囊能安全有效地提高缓解慢性心力衰竭患者中医
证候,改善心功能,提高生活质量的作用。
关键词:搏心通胶囊; 慢性心力衰竭; 临床有效性
DOI标识:doi: 10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2013. 07. 049
中图分类号:R259 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2013) 07-1657-03
慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF,简称慢性心衰)是
临床上常见的临床综合征,是各种病因引起的心血管疾病的严重
或终末阶段。流行病学显示,心力衰竭的发生率正逐年增加。近
年来,众多学者在规范的西药治疗基础上结合中医药治疗,取得
良好临床疗效,但临床上大家较多应用活血化瘀法。辛温通阳
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL. 24 NO. 7 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 7 期