全 文 ：415※分析检验 食品科学 2006, Vol. 27, No. 11
高效液相色谱-质谱法分析丰城鸡血藤中
刺芒柄花素
余燕影1，章丽华1，曹树稳2
(1.南昌大学化学系，江西 南昌 330047；
2.南昌大学 食品科学教育部重点实验室，江西 南昌 330047)
摘 要：采用高效液相色谱-质谱法分析丰城鸡血藤中刺芒柄花素。以乙腈—0.1%甲酸为流动相，流速0.8ml/min，
经反相色谱柱Spherisord ODS(250mm×4mm，5μm)梯度洗脱分离后进行质谱分析，采用正负电喷雾离子源同时进
行信号采集。经HPLC/MS定性确证，丰城鸡血藤含有刺芒柄花素。方法的线性范围为6.0～126.0μg/ml，检出限
(S/N=3)和定量下限(S/N=10)分别为0.8和2.7μg/ml，加标回收率为99.6%～104.3%。该方法简便、快速、灵敏度
高，可用于丰城鸡血藤中刺芒柄花素分析测定。
关键词：高效液相色谱-质谱；丰城鸡血藤；刺芒柄花素
Analysis of Formononetin in the Millettla nitida Be th.v r. hirsutissima.
Z.Wei by HPLC-Mass Spectrometry
YU Yan-ying1，ZHANG Li-hua1，CAO Shu-wen2
(1.Department of Chemistry, Nanchang University, Nanchang 330047, China；
2.Key Laboratory of Food Science of Ministry of Education，Na hang University, Nanchang 330047, China)
Abstract ：The formononetin in the Millettla nitida Be th. var. hirsutissima. Z.Wei was analyzed by HPLC-Mass spectrometry.
By means of acetonitrile-0.1% formic acid as mobile phase with flowing rate at 0.8ml/min, exploiting Spherisord ODS(250mm
×4mm, 5μm)with gradient elution, the tandem mass spectral acquisition was done in positive and negative electrospray ionization.
The result showed that the plant studied here contained formononetin.The linear ra ge of this method was from 6.0 to 126.0μg/ml.
The limit of detection(LOD, S/N=3) and limit of quantity(LOQ, S/N=10) were 0.8μg/ml and 2.7μg/ml respec vely. The recoveries
were between 99.6%～104.3%. The method can be applied for the determination of formononetin in the Mill ttla nitida B th.
var. hirsutissima. Z.Wei because of its briefness, rapidity, good sensitivity and recovery.
Key words：HPLC-MS；Millettla nitida Ben h. var. hirsutissima. Z.Wei；formononetin
中图分类号：O657.63 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)11-0415-04
收稿日期：2006-06-12
基金项目：国家自然科学基金资助项目(20262004；20562008)；江西省教育厅资助项目(赣财教[2003]73号)
作者简介：余燕影(1963-)，女，副教授，研究方向为天然产物分离分析及生物活性研究。
丰城鸡血藤，又名香花崖豆藤Millettla nitida
Benth.var. hirsutissima Z.Wei，是传统地产中药材，入
药历史悠久。中医认为其有补血活血、舒经活络之功
效，用于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风
湿痹痛等症[1]。文献报道丰城鸡血藤主要含黄酮类活性
成分，且多为异黄酮甙元[1,2]。黄酮类化合物是天然产
物中活性成分之一，具有较高的药用价值，其高效分
离和分析方法对新的黄酮类活性成分的发现和药理、药
效研究具有十分重要的意义。刺芒柄花素(结构式见图1)
是丰城鸡血藤中含量较高的特征成分之一，具有抗脂质
过氧化、抑制螺杆菌等活性[3,4]，在其它食用及药用植
物资源(如豌豆、豇豆、大豆、刺果甘草、野葛根和
红三轴草等)中有着广泛的分布[5～9]。LC/MS联用技术是
20世纪90年代成熟起来的一项新技术，具有灵敏度高、
选择性强、分离和结构确证一次完成等特点[10,11]，因而
在天然产物分离分析中得到广泛的应用[9][12]。本文旨在
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研究HPLC-MS分离分析丰城鸡血藤中刺芒柄花素的条
件，并建立相应的分析测定方法。该方法的建立对于
丰城鸡血藤黄酮类化合物的分离鉴定及中药材质量控制
具有一定的指导意义。
1.4刺芒柄花素标准溶液的制备
精密称取干燥至恒重的刺芒柄花素适量，用无水乙
醇配制成浓度300.0mg/ml的储备液。精密移取一定量的
储备液于10ml容量瓶中，用70%乙醇配制成一系列不
同浓度的对照品混合溶液，进样量为10μl。
2 结果与分析
2.1色谱条件优化
刺芒柄花素B环上有一个甲氧基，根据文献报道，
黄酮类化合物的B环羟基被甲基化，其物质的极性急剧
降低，在极性较大的甲醇-甲酸体系下，图谱基线漂
高，刺芒柄花素与相邻峰重叠严重，分离效果差。
本实验选用乙腈-甲酸作流动相，采用恒梯度洗脱
时刺芒柄花素的分离效果不理想，峰形不对称，拖尾
严重；梯度洗脱时不仅刺芒柄花素的分离效果较理想，
而且其它组分也能得到较好分离，结果见图2。
1 材料与方法
1.1仪器与试剂
Waters 2695色谱/ZQ 2000质谱联用仪，DAD检
测器，采用MassLynx 4.0化学工作站和数据处理软件对
信号进行采集和数据处理。
刺芒柄花素(≥98%，HPLC测定) 陕西慧科植物
开发有限公司；乙腈(色谱纯) Merck公司；水为超纯
水；其他试剂均为分析纯。
丰城鸡血藤采自江西丰城市罗山乡，经南昌大学生
物系杨柏云教授鉴定为丰城鸡血藤。
1.2色谱与质谱条件
1.2.1色谱条件
色谱柱：Spherisord ODS(250mm×4mm，5μm)；
流速：0.8ml/min；柱温：20℃；检测波长：250nm；
进样量：10μl；流动相：乙腈(A)-0.1% HCOOH (B)；
梯度洗脱条件：A：0～8min 0%～10%，8～13min
10%～15%，13～19min 15%， 9～28min 15%～20，
28～38min 20%～ 5，38～42min 25%～30，42～
47min 30%，47～57min 45%，57～60min 60%， ～
61min 60%～0%。
1.2.2质谱条件
Waters ZQ2000质谱仪，离子源为电喷雾源，脱溶
剂气温度为350℃，流速为250L/h，离子源温度：150℃，
毛细管电压：3000V，锥孔电压30V，锥孔气流量50L/h，
六级杆透镜电压0.5V，采用正离子和负离子模式同时检
测，雾化气、气帘气、碰撞气及加热辅助气均为N2。
1.3供试品溶液的制备
丰城鸡血藤干料用90%乙醇和2% HCl回流提取，
过滤，滤液用NaHCO3中和后再过滤，滤液减压蒸除乙
醇，剩余物用乙酸乙酯回流提取，提取液减压浓缩至
干，所得提取物浸膏真空干燥备用。称取适量真空干
燥后的上述提取物浸膏用70%乙醇溶解并定容，微孔滤
膜(0.45μm)过滤，即得供试样品。
2.2定性鉴定及质谱检测模式
采用HPLC和LC/MS复合定性法对刺芒柄花素进行
鉴定。首先采用保留时间对照法和标准追加法进行初步
定性，进而用二极管阵列紫外检测技术采集各色谱峰的
紫外光谱图，将所得图谱的形状、吸收带位置及相对
强度与标准品图谱比较对照定性，再进一步将LC/MS联
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用仪所得质谱与标准质谱图对照定性，结果表明，丰
城鸡血藤含有刺芒柄花素。紫外光谱和质谱见图3。
刺芒柄花素的保留时间为54.118min，紫外吸收峰
为305nm和248nm，分子离子：[M+H]+=268.64(100)，
[M－H]－=266.56 (100)。
由测试样的离子流图(图4)可知，负离子源模式的
离子流图基线较稳，响应值高，检测刺芒柄花素采用
负离子源模式比正离子源模式效果更佳。
2.3方法检出限、线性范围和加标回收率
以S/N=3求得方法的检出限(LOD)为0.8μg/ml。以
S/N=10求得方法的定量下限(LOQ)为2.7μg/ml。对6.0～
126.0μg/ml范围内的刺芒柄花素标准溶液进行检测分
析，记录色谱图和样品峰面积As，以As对标准样品
质量浓度M进行线性回归，得到刺芒柄花素标准曲线回
归方程：As=65916.972M－20.250，相关系数r=0.9999。
取5ml样品三份，分别加入0.25、1.00、2.00ml刺
芒柄花素标准储备液于10ml容量瓶中，用70%乙醇定
容。测量结果见表 1。
2.4精密度试验
取同一份供试溶液，重复5次进样，测得刺芒柄
花素峰面积RSD为1.01%，精密度良好。
2.5稳定性试验
取存放了24h的供试液进行测定，测得刺芒柄花素
样品含量 加入量 测得量 回收率 平均回 RSD
(μg) (μg) (μg) (%) 收率(%) (%)
614.6 75.0 689.3 99.6
614.6 75.0 691.7 102.8
614.6 75.0 692.8 104.3
614.6300.0 921.6 102.3 101.5 1.5
614.6300.0 920.8 102.1
614.6300.0 915.5 100.3
614.6600.0 1218.7100.7
614.6600.0 1221.8101.2
614.6600.0 1216.3100.3
表1 刺芒柄花素加标回收率
Table 1 The recoveries of formononetin
的峰面积RSD为1.74%，结果表明供试液在24h内稳定。
2.6重现性试验
取5份测试样品，按实验方法测定，样品中刺芒
柄花素的含量RSD为1.66%，该方法重现性好。
2.7样品测定
取供试样品5份，测得样品中刺芒柄花素平均含量
(以丰城鸡血藤干基计)为0.1725mg/g。
3 结 论
本文建立了反相高效液相色谱-质谱联用法分离测
定丰城鸡血藤中刺芒柄花素的方法。实验结果表明，采
用LC/MS联用方法分离测定丰城鸡血藤中刺芒柄花素具
有分析时间短、样品用量少和灵敏度高等特点，减少
了样品分离、纯化、制备等繁琐过程，为丰城鸡血藤
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和其它食用及药用植物资源中刺芒柄花素的分离、鉴定
和定量分析提供了一种简便、快速的方法。
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收稿日期：2006-08-10
基金项目：辽宁省教育厅科学技术基金资助课题(2024201050)
作者简介：回瑞华(1945-)，女，教授，主要从事有机分析及天然产物化学教学与研究。
玉米油的制备及脂肪酸的分析
回瑞华，侯冬岩，李学成，刘晓媛，韩 阳
(鞍山师范学院化学系，鞍山 114005)
摘 要：以辽宁地区玉米种子为原料制备玉米油。对玉米油进行甲酯化处理，以气相色谱-质谱联用仪进行了分
析，共分离鉴定出7种脂肪酸。其中主要成分为：棕榈酸、油酸和亚油酸。用高效液相色谱法对亚油酸进行了
定量分析。
关键词：玉米油；脂肪酸；气相色谱-质谱联用；高效液相色谱法
Preparation of Corn Oil and Determination of Fatty Acids in Corn Oil
HUI Rui-hua，HOU Dong-yan，LI Xue-cheng，LIU Xiao-yuan，HAN Yang
(Department of Chemistry, Anshan Normal University, Anshan 114005,China)
Abstract ：Corn oil was extracted from corn in Liaoning. The fatty acids in the corn oil were estirified and analyzed by GC-MS.
8 fatty acids were separated and identified . Of them the major fatty acids were: hexadecanoic acid; 13-octadecenoic acid and 9,
12-octadecadienoic acid. The content of 9,12-octadecadienoic acid in corn oil was determinated by HPLC.
Key words：corn oil；fatty acid；GC-MS；HPLC
中图分类号：Q949.783.5 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2006)11-0418-03
中国近年年产玉米1.06亿～1.33亿吨，居世界第二
位。主要用于饲料消费，约占玉米总量的59%～79%。
2002年工业加工量，包括酒精、酿酒、淀粉、淀粉
糖、味精、柠檬酸等深加工产品，不包括饲料工业及
主食加工，大约加工玉米1500万吨，约占玉米总量的
13%。玉米含油在4.5%～4.8%，因此生产潜力巨大[1]。