全 文 ：J TCVM
年第 4 期2015
高乌头炮制前后镇痛作用比较及生物碱含量测定
李 芸 1，苗小楼 2，吴平安 1，李 康 1，刘峰林 1
（1.甘肃中医药大学 甘肃省中药药理与毒理学重点实验室 甘肃省高校中藏药化学与质量研究省级重点
实验室，甘肃兰州 730000；2.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050）
摘 要：目的：比较高乌头生品和炮制品的镇痛作用及其中总生物碱与高乌甲素的含量。方法：采用小鼠
热板法和扭体法对高乌头炮制前后的镇痛作用进行研究；分别采用酸性染料比色法和高效液相色谱法测定样
品中总生物碱和高乌甲素的含量。结果：在扭体法实验中，高乌头炮制前后的镇痛率分别为 16.84%和 50.52%，
炮制品明显高于生品，但无统计学意义；在热板法实验中，给药后 30 min、45 min、60 min，高乌头生品及炮制品
的痛阈提高百分率分别为 37.78%、74.34%、109.05%及 76.04%、111.59%、111.13%，与正常对照组比较差异显著
（P＜0.05），但炮制品与生品比较差异不显著。高乌头炮制前后总生物碱和高乌甲素的质量分数分别为 2.06%、
7.75%和 1.170%、0.596%。结论：高乌头炮制后镇痛作用增强，表明以甘草汁炮制能够增强高乌头的镇痛作用，
且是通过增加总生物碱的含量，而不是增加高乌甲素的含量而达到增效作用。
关键词：高乌头；炮制；总生物碱；高乌甲素；镇痛作用
中图分类号：S853.7 文献标志码：A 文章编号：1000- 6354（2015）04- 0036- 04
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2015.04.011
收稿日期：2015- 03- 31
基金基金：甘肃省自然科学基金项目（编号 1107RJZA242）；甘
肃中医学院中青年基金项目（编号 ZQ2011- 8）
作者简介：李 芸(1973- )，女，副教授，硕士生导师，主要从事中
药材加工炮制、中药活性成分提取分离和质量标准
研究，E- mail：liyunherb@163.com
高乌头是毛莨科乌头属植物高乌头（Aconitum sinom－
ontanum Nakai）的干燥根，别名麻布七、口袋七、辫子七、蓑
衣七，是甘肃、四川、陕西太白地区、湖北神农架地区及云
南、贵州等地珍稀名贵的“七药”之一，主要用于风湿疼
痛、关节疼痛、跌打损伤、劳伤、骨伤、肢体麻木等 [1-5]，现收
载于《甘肃省中药材标准》（2009 年版）[6]。高乌头主要有效
成分为二萜类生物碱，是镇痛作用的物质基础 [7]。由于高
乌头有毒，临床应用受限制，需要炮制以减毒，课题组前期
首次对高乌头进行炮制，优选出最佳炮制工艺（加入 10%
甘草汁加压蒸制 5 h），并对其炮制前后的毒性进行研究，
结果表明用甘草汁炮制确实能降低高乌头的毒性，但药效
还存在不明确性。笔者等在前期研究基础上，首次对高乌
头炮制前后的生物碱成分及镇痛作用进行比较，从物质基
础和药理学的角度对其用甘草炮制的效果进行评价，为高
乌头的临床用药提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 药品和试剂 高乌头（购自甘肃省天祝藏族自治县农
贸市场、野生），经甘肃中医学院杨抚德教授鉴定为麻布七
(Aconitum sinomontanum Nakai)的根。氢溴酸高乌甲素对照
品（购自甘肃神龙药业股份有限公司，批号：20001001，含
量 97.50 %）。0.9%生理盐水；甲醇、乙腈为色谱纯；冰醋
酸、溴甲酚绿等其他试剂均为分析纯；水为蒸馏水；0.05 M
NaOH 溶液、0.1%溴甲酚绿、醋酸-醋酸钠缓冲溶液自配。
高乌头生品饮片、炮制品饮片均为实验室自制。
1.1.2 仪器 Waters-2695型高效液相仪、2998二极管阵列
检测器（PAD）；UV-3300型紫外可见分光光度计（上海美谱
达仪器有限公司）；101A-2电热鼓风干燥箱（上海市实验仪器
总厂）；BT 125D电子天平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；
LDZX-30FA立式压力蒸汽灭菌器（上海中安医疗器械厂）；
秒表；RB-20智能热板仪（成都泰盟科技有限公司）；SB-5200
DTD 超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；
DT1000型电子天平（常熟市恒佳天平有限公司）；PHS-430型
pH计（方舟电子科技有限责任公司）。
1.1.3 实验动物及环境 SPF 级昆明种小鼠及饲料均由
甘肃中医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：
SCXK（甘）2011-0001，实验设施合格证：SYXK（甘）2011-
0001。实验室温度 20-24 ℃，相对湿度 40%～70%。
1.2 方法
1.2.1 供试饮片的制备 生品饮片：将原药材净制，润法
软化，然后切制为 2-4 mm，自然干燥，筛去碎屑，即得。
甘草炮制品：取高乌头生品饮片适量，用 10%甘草汁
（饮片 ∶甘草汁为 1 ∶3），加适量水浸透后，置立式压力蒸汽
灭菌器内，在 127 ℃、0.15 Mpa 蒸制 5 h，取出，晾干，筛去
碎屑，即得。
1.2.2 供试样品的制备 取高乌头生品饮片粉碎，过 100目
筛，称取样品 1.5 g，加蒸馏水配制成浓度为 15 mg/mL 的
混悬液备用（以下称为高乌头生品）。同法制备浓度 25 mg/mL
高乌头炮制品混悬液（以下称为高乌头炮制品）。
1.2.3 用药剂量的确定 《毒药本草》、《中药大辞典》均
记载临床上高乌头处方剂量为 1-2钱（即 3-6 g），设定 3 g
为成人的用药剂量，成人标准体质量以 60 kg计，成人每天
的剂量为 3×103 mg/60 kg=50 mg/kg，小鼠以 20 g计，由成人
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换算成小鼠的用药剂量（一般为人的 5倍）即为 250 mg/kg，
但作为毒性中药，因为 LD50值一般较小，设计剂量时以 1/5
LD50作为小鼠的最高有效剂量。课题组前期研究结果显示，
高乌头生品的半数致死量（LD50）为 1.424 g/kg（按 1.5 g/kg
计），1/5 LD50为 300 mg/kg（相当于人临床用药量 3.6 g）；炮
制品的半数致死量（LD50）为 2.625 g/kg（按 2.7 g/kg 计），
1/5 LD50约为 500 mg/kg。故确定单只小鼠高乌头生品及炮
制品每天灌胃剂量分别为 300 mg/kg和 500 mg/kg。
1.2.4 小鼠扭体法镇痛实验 [8] 取小鼠 30 只，雌雄各半，
体质量为 18-22 g，按性别、体质量分层随机分为 3组，即高
乌头生品组、高乌头炮制品组和正常对照组。各给药组按
20 mL/kg 分别灌胃不同高乌头混悬液，正常对照组灌胃等
体积的生理盐水，1 次/d，连续给药 3 d，末次给药 1 h 后，
每只小鼠腹腔注射 0.6％冰醋酸溶液 0.2 mL，分别测定
15 min 内小鼠的扭体次数，小鼠扭体次数越少，表明小鼠
对疼痛的耐受能力越强，其所给药物的镇痛效果越佳。按
下式计算镇痛率，并进行统计分析。
镇痛百分率 = 生理盐水组扭体均数 - 试药组扭体均数
生理盐水组扭体均数
×100％
1.2.5 小鼠热板法镇痛实验[8] 取体质量为 18-22 g 雌性小
鼠 80 只，放于热板测痛仪上，温度控制在（55.0±0.5）℃，
记录自放入热板仪至小鼠舔后足所需时间（s），作为给药
前的基础痛阈值（重复测定 3 次的均值，每隔 5 min 测量
一次），若 30 s内不出现舔后足者，剔除不用，共选出 30 只
合格小鼠。将选出的 30 只小鼠随机分为 3 组，即高乌头生
品组、高乌头炮制品组和生理盐水组（正常对照组）。各给
药组按 20 mL/kg 分别灌胃不同高乌头混悬液，正常对照
组灌胃等体积的生理盐水，1 次/d，连续给药 3 d，末次给
药后 30 min、45 min、60 min 按上述基础痛阈值测定方法
分别测定小鼠痛阈值。若小鼠在热板上 60 s 仍无疼痛反
应，即取出按 60 s 计。按下式计算痛阈提高百分率，并进
行统计分析。
痛阈提高百分率= 给药后痛阈值 - 基础痛阈值
基础痛阈值
×100％
1.2.6 高乌头中总生物碱含量测定 取高乌头粉末 0.2 g，
精密称定，加入乙醚 ∶氯仿（3 ∶1）20 mL、氨试液 1 mL，摇匀
放置过夜，过滤，药渣用乙醚∶氯仿（3∶1）洗涤 3 次，合并滤
液，减压回收溶剂，水浴 60 ℃蒸干，残渣用氯仿定容至
25 mL。取供试品溶液 1 mL置于分液漏斗中，加醋酸-醋酸
钠缓冲液至 10 mL，加入 0.1%溴甲酚绿溶液 10 mL，振摇
5 min，以下同标准曲线方法依法测定。炮制品含量测定中
需扣除甘草的干扰。
精密量取对照品贮备液（浓度为 0.22 mg/mL）0.5、1.0、1.5、
2.0、2.5、3.0、4.0 mL，分别置分液漏斗中，分别加醋酸-醋酸
钠缓冲液至 10 mL，另取醋酸-醋酸钠缓冲液 10 mL，置于
分液漏斗中作为空白对照。在上述分液漏斗中分别加入
0.1%溴甲酚绿溶液 10 mL，振摇 5 min，静置 10 min，用氯
仿提取 3 次，每次 10 mL，合并氯仿层，用干燥滤纸滤过于
50 mL 量瓶中，并用氯仿稀释至刻度，在 413 nm 处测定
吸光度，以吸光度(A)对质量浓度(C)进行线性回归，氢溴酸
高乌甲素在 4.44-17.76 μg/mL 范围内线性关系良好，回
归方程为：A=41.977C-0.1004，r=0.995 2。
1.2.7 高乌头中高乌甲素含量测定 取高乌头样品（过 50
目筛）约 0.5 g，精密称定，置三角瓶中，加甲醇 15 mL，超声
15 min，滤过，滤渣再加甲醇 10 mL，超声 15 min，滤液合并于
25 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液经
0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。同时制备甘草
阴性对照溶液。
精密称取氢溴酸高乌甲素对照品 7.5 mg，置 25 mL 量
瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
色谱条件：色谱柱为 ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，
5 μm)；以甲醇-0.05 mol/L NaH2PO4溶液(45∶55)为流动相；
流速为 1.0 mL/mL；进样量 10 μL；检测波长 252 nm；柱温
为 30 ℃。
1.3 数据整理与统计学分析
实验数据均以平均值±标准差表示，多组间比较采用
单因素方差分析（One-way ANOVA），两组间比较采用 t 检
验；采用 SPSS17.0 统计软件进行统计学分析，P<0.05 为差
异有统计学意义。
2 结果
2.1 高乌头炮制前后对小鼠镇痛效果（扭体法）
结果见表 1。由表 1 可知，高乌头生品和炮制品均能
降低小鼠因醋酸刺激引起的扭体反应次数，且炮制品的镇
痛百分率明显高于生品，但无统计学意义。
表 1 高乌头炮制前后对小鼠的镇痛作用（扭体法，X±S）
Table 1 Analgesic effect of Aconitum sinomontanum Nakai
in mice before and after processing (writhing test, X±S)
2.2 高乌头炮制前后对小鼠镇痛效果（热板法）
结果见表 2、表 3。由表 2、表 3 可知，给药后 30 min，
45 min、60 min，高乌头炮制品组、高乌头生品组均可明显
提高小鼠的痛阈值，与正常对照组比较，差异显著（P＜0.05）；
但炮制品组与生品组比较无显著性差异。
表 2 高乌头炮制前后对小鼠的镇痛作用（热板法，X±S）
Table 2 Analgesic effect of Aconitum sinomontanum Nakai
in mice before and after processing (hot plate test, X±S）
注：“*”表示与生理盐水组比较差异显著(P<0.05)。
Notes:“*”meant significant difference (P<0.05) compared with NS
treated group.
给药后痛阈值 /s
组别
生理盐水组
高乌头生品组
高乌头炮制品组
30min 45min 60min
剂量
/mg·kg-1
基础痛阈
/s
-
300
300
6.40±2.30
6.31±2.31
6.11±2.23
7.19±1.34
8.69±2.33*
10.76±3.20*
6.87±1.81
11.00±2.59*
12.93±4.98*
8.13±1.35
13.19±3.08*
12.90±4.72*
组别 小鼠数量 /只 扭体次数 /次 镇痛百分率 /%
生理盐水组
高乌头生品组
高乌头炮制品组
10
10
10
-
16.84
50.52
14.43±8.54
12.00±1.15
7.14±3.58
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由表 1-3 可知，高乌头生品和炮制品均具有镇痛作
用，且炮制后镇痛作用较强。
表 3 高乌头炮制前后小鼠痛阈提高百分率（热板法）
Table 3 The improved analgesic threshold of mice
treated with Aconitum sinomontanum Nakai before and
after processing (hot plate test)
2.3 高乌头中总生物碱及高乌甲素的含量测定结果
结果见表 4。由表 4 可知，与高乌头生品相比，炮制品
中总生物碱的含量增加近 4 倍，而高乌甲素的含量减少近
一半。高乌头炮制后总生物碱含量大幅增加，同时高乌甲
素含量大幅减少，可能与高乌头炮制“毒减效不减”的药理
作用密切相关。
表 4 高乌头生品及炮制品中总生物碱及高乌甲素的含量
（n=3）
Table 4 Contents of alkaliods and Lappaconitine in
Aconitum sinomontanum Nakai before and after processing
3 讨论
热刺激致小鼠舔足反应实验和冰醋酸致小鼠扭体反应
是用于镇痛药物筛选的经典方法。本实验采用此两种方法，
从中枢和周围两方面对高乌头生品及炮制品的镇痛作用进
行了比较。结果显示，高乌头生品和炮制品均具有镇痛作
用，说明炮制对高乌头的镇痛作用影响不大。
实验表明，高乌头经炮制后，总生物碱的含量大幅增
加（提高近 4 倍），可能与甘草的助溶作用有关，使生物碱
易于溶出，从而增强了镇痛作用，但降低了毒性成分高乌
甲素 [9-12]的含量，这正是用甘草炮制高乌头来降低毒性、保
证疗效的原因。
笔者等首次对高乌头炮制前后的生物碱成分变化、急
性毒性和镇痛作用进行了初步比较研究。研究结果显示，
高乌头经甘草炮制确能起到“减毒存效”的作用，这也是炮
制毒性中药的理想目的。本研究从化学、毒理、药效三方面
验证了前期研究所优选的炮制工艺的合理性和可靠性，能
保证临床用药安全和有效。
致谢：2013届药物制剂专业本科生马贝红、徐婷同学在
实验中给予帮助和大力支持，在此表示感谢！
参考文献：
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210-213.
痛阈提高百分率 /%
组别
生理盐水组
高乌头生品组
高乌头炮制品组
30min 45min 60min
12.36
37.78
76.04
7.41
74.34
111.59
27.06
109.05
111.13
高乌头 总生物碱含量 /% 高乌甲素含量 /%
高乌头生品
高乌头炮制品
1.170
0.596
2.06
7.75
Study on analgesic effect and determination of alkaloids in Aconitum sinomontanum
Nakai before and after processing
LI Yun1, MIAO Xiao-lou2, WU Ping-an1, LI Kang1, LIU Feng-lin1
(1. Key Laboratory of Pharmacology and Toxicology for Traditional Chinese Medicine of Gansu Province, Key Laboratory of
Chemistry and Quality for Traditional Chinese (Tibetan) Medicine of Universities in Gansu Province, Gansu University of
Traditional Chinese Medicine, Lanzhou Gansu 730000; 2.Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of
Chinese Academic Agricultural Sciences, Lanzhou Gansu 730050, China)
Abstract：Objective: To compare the analgesic effect and the contents of total alkaloids and Lappaconitine in the
unprocessed Aconitum sinomontanum Nakai and processed product, and to provide a basis of for discussion of processing
mechanism of Aconitum sinomontanum Nakai. Methods: The analgesic effect test of Aconitum sinomontanum Nakai was carried
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out by hot-plate test and writhing test in mice, and the determination of alkaliods and Lappaconitine in the two samples was
performed by acidic dye colorimetry and high performance liquid chromatography（HPLC）, respectively. Results: In mice, the
analgesia percentage treated with the unprocessed sample and the processed one was 16.84% and 50.52%, respectively, for
the writhing test. Although the analgesia percentage of the processed was obviously higher than that of the unprocessed, there
was not statistically significance. The improved analgesic threshold of the unprocessed sample and the processed one was
37.78%, 74.34%, 109.05%, 76.04%, 111.59% and 111.13%, respectively, for the hot-plate test at 30, 45, 60 min after
drug administration. The pain threshold of mice treated with the processed sample and the unprocessed one was significantly
increased (P<0.05) compared with the normal control group. Although improved percentage of pain threshold of the processed
product was obviously higher than that of the unprocessed, there was not statistically significance. The contents of the general
alkaloid and Lappaconitine in the unprocessed product and the processed one was 2.06%, 7.75% and 1.170%, 0.596%,
respectively. Conclusion: The analgesic effect of processed Aconitum sinomontanum Nakai is higher than that of the original
rude drug. It showed that the analgesic effect of Aconitum sinomontanum Nakai can be improved by processing with licorice
juice, and the increasing analgesic effect of the processed product is achieved by enhancing the content of general alkaloids,
but not increasing the content of Lappaconitine.
Key words：Aconitum sinomontanum Nakai; processing; general alkaloids; analgesic effect
脂必妥片微生物限度检查方法研究
郭利群 1，张丽玲 2，杨永红 3
（1.云南医药工业股份有限公司，云南昆明 650106；2.云南植物药业有限公司，云南昆明 650109；
3.云南农业大学植物保护学院 教育部农业生物多样性和病虫害防治重点实验室 云南省植物病理重点实
验室，云南昆明 650201）
摘 要：目的：建立脂必妥片微生物限度检查方法。方法：按照《中华人民共和国药典 2部》2010年版微生
物限度检查方法。结果：脂必妥片对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用，对其他试验菌均无抑制作
用。结论：本品对细菌的计数方法应采用培养基稀释法，霉菌及酵母菌计数方法、控制菌检查可用常规检验法。
关键词：脂必妥片；微生物限度检查；培养基稀释法；抑菌作用
中图分类号：R927.33 文献标志码：A 文章编号：1000- 6354（2015）04- 0039- 03
DOI:10.13823/j.cnki.jtcvm.2015.04.012
收稿日期：2015- 04- 26
基金项目：企业资助
作者简介:郭利群（1960-），女，高级工程师，执业药师，主要从
事中药质量监管。
通讯作者：杨永红，女，教授，主要从事中药资源及其相关研究；
Tel: 13700656671，E- mail: yyh831994@163.com
中成药脂必妥片的主要成分是红曲，既是食品又是药
品，有健脾消食、除湿祛痰、活血化瘀的作用，广泛用于脾
瘀阻滞症见气短、乏力、头晕、头痛、胸闷、腹胀、食少纳呆
等，也可用于高脂血症及动脉粥样硬化引起的其他心脑血
管疾病的辅助治疗。
药品微生物限度是药品安全性的重要指标之一。随着
药品剂型的日益发展和药品标准的不断提高，及时有效地
进行药品微生物限度检查是势在必行，药品微生物限度检
查方法为 1995年版《中华人民共和国药典 2部》首次收载，
并在 2005 年版《中华人民共和国药典 2 部》增订了方法验
证试验，2010 年版《中华人民共和国药典 2 部》又作了进
一步的修订 [1-4]。为保证药品微生物限度检查结果的可靠
性，在进行微生物限度检查时，经常发现有抑菌作用，对有
抑菌作用的药物是否按常规法进行微生物限度检查，通过
微生物验证以确定所采用的方法是否适合该样品的微生
物限度检查，有必要对此进行研究 [5-10]。
目前，脂必妥滴丸和胶囊都有质量标准研究，其滴丸
和胶囊都参照了脂必妥片质量标准，但对于脂必妥片的检
验方法验证研究尚未完善。现行的《中华人民共和国药典
2 部》收载的各种中成药品种检查项下，未规定具体各品
种的微生物限度检查方法。笔者等对脂必妥片的微生物限
度检查方法进行了验证，以确认方法的有效性，并判断药
品成分是否具有抑菌作用 [1-4]。
1 材料与方法
1.1 材料
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