全 文 ：实验研究
青风藤及青藤碱对吗啡依赖小鼠位置偏爱效应及脑内组胺水平的影响＊
莫志贤 ,周吉银
(南方医科大学中医药学院 ,广州　510515)
　　摘　要　目的:探讨青风藤及其有效成分青藤碱对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱(CPP)及脑内组胺(HA)水平的影响。方
法:连续给予吗啡 (9 mg/kg, sc)6d, 引起小鼠产生显著的条件性位置偏爱效应。在位置偏爱训练的第 4天开始每天 sc吗啡前 45
min分别给予青风藤醇提液(10 g/kg, ig)、青藤碱 (60 mg/kg, im)、苯海拉明组(30 mg/kg, ip)、CP48/80组(5mg/kg, sc)或 L-组氨
酸组(750 mg/kg, ip),连续给药 3天。用荧光分光光度法测定脑内组胺含量。同时检测对小鼠的奖赏效应或厌恶效应。结果:吗
啡模型组小鼠在伴药箱中停留的时间明显延长 , 小鼠脑内 HA水平显著升高。青风藤或青藤碱可显著抑制吗啡引起的小鼠位置偏
爱的形成 , 降低脑内的 HA含量。青风藤 、青藤碱及 L-组氮酸对正常小鼠脑内组脑水平有升高作用 , 但三药本身并不使小鼠产生奖
赏或厌恶效应。 CP48/80对正常及吗啡依赖小鼠脑内组胺含均有明显减少作用 ,但该药对 CPP无明显影响。结论:吗啡诱导的小
鼠位置偏爱效应与脑内 HA水平升高 、中枢组胺能神经系统激活有关。青风藤及青藤碱能消除吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的
形成 , 对脑内组胺水平的改变具有调节作用。
　　关键词　青风藤;青藤碱;吗啡;条件性位置偏爱;组胺
　　青风藤是防己科植物青藤 Sinomeniumacutum(Thunb.)et
Wils.或毛青藤 Sinomeniumacutum(Thunb.)etWils.varcinere-
umRehd.etWils.的干燥藤茎 , 具有祛风通络 , 镇痛镇静等功
效。主要用于治疗风湿痹痛 、关节肿胀 、麻痹搔痒等病症。在我
们以前的研究中 , 青风藤用于中药戒毒复方中已获得较好的临
床和实验效果 [ 1 ～3] 。青藤碱(Sinomenine)是青风藤的主要活性
成分 , 结构类似吗啡 ,对机体具有强大的组织胺释放作用。我们
在临床研究的基础上 ,对青风藤及其活性成分进行了系列的戒
毒实验研究。本文观察了青风藤和青藤碱对吗啡诱导的小鼠
条件性位置偏爱及脑内组胺含量的影响 , 探讨阿片类精神依赖
与中枢组胺神经系统的关系以及药物治疗精神依赖的作用机
制。
1　材料与方法
1.1　试验药物　青风藤 ,广东省药材公司提供。青风藤醇提液
制备方法:500g青风藤用 80%乙醇回流提取 2h,共 2次。合并
两次药液 , 回收乙醇后过滤 , 浓缩至 1.0 g生药 /ml,置 4℃冰箱
备用 , 使用时用蒸馏水配成所需浓度。盐酸青藤碱 , 广州白云山
制药总厂提供 , 批号:000822,用蒸馏水溶解后配制成所需浓度。
盐酸吗啡(粉剂), 解放军总后勤部药品供应站提供 , 用蒸馏水
配制成所需浓度备用。盐酸苯海拉明 , 天津药业集团提供 , 批
号:03031901。 CP48/80, Sigma产品。 L-组胺酸(L-histidine),
中国医药集团上海化学试剂公司提供。批号:F20001215。
1.2　试剂　磷酸组胺(Histamine, HA)为 Sigma公司产品 , 用
双蒸水配制的 0.01mol/L盐酸配制成 200μg/ml的储备液 ,存于
4C冰箱 , 临用时配制成标准应用液。
1.3　动物　SPF级昆明种小鼠 , 雄性 , 体重 18 ～ 22 g,由南方医
科大学实验动物中心提供 ,合格证号:粤检证字 2001A058号。
1.4　仪器　条件性位置偏爱箱仿文献 [ 5]制作 , 箱体由 15cm×
15cm×15cm的两个正方体组成 , 中间有一可活动的隔板 ,将隔
板抽起后 ,小鼠可在两个箱体之间自由活动。箱体的一侧除玻
璃面板外内侧各面均漆成黑色 , 底板用柔软毛毯底面制成粗糙
面 ,另一侧除玻璃面外漆成白色 , 底板制成光滑面 , 整个实验箱
具有视觉和触觉两种线索。 RF-5000荧光分光光度计 , 日本岛
津公司产品。
1.5　方法
1.5.1　动物的预处理　领回小鼠后在动物实验房适应性饲养
2天 , 第 3天将箱体隔板抽出 , 把小鼠逐只放入箱体中间 , 观察
15分钟 ,以小鼠的头部为准记录小鼠在各箱体停留时间。观察
过程在隔音条件下进行。在整个实验期间 ,小鼠饮水进食自由 。
剔除对箱体某一侧有显著偏爱的小鼠 , 以排除非条件性位置偏
爱对实验结果的影响。结果显示 , 几乎所有小鼠偏爱黑箱。由
此 ,将白箱作为非偏爱侧。
1.5.2　药物奖赏效应或厌恶效应的测定　取达到实验要求的
小鼠 60只随机分 6组 ,即空白对照组 、青风藤组(10g生药 /kg,
ig)、青藤碱组 (60mg/kg, im)、苯海拉明组 (30 mg/kg, ip)、
CP48/80组(5 mg/kg, sc)、L-组氨酸组(750 mg/kg, ip), 每组
10只动物。除空白对照组两次均 ip生理盐水外 , 其余各组小鼠
每天分别按剂量给予上述各药和生理盐水各一次 , 两次给药间
隔 8 h(8:00, 16:00)。小鼠给药后置于非偏爱侧白色箱体 , 给
生理盐水后置于偏爱侧黑色箱体。 小鼠在箱内逗留时间为
40min。共给药训练 6 d。在实验的 d7进行位置偏爱检测。将
偏爱箱隔板抽出 ,把小鼠逐只放入箱体中间 , 观察 15 min,以小
鼠的头部为准记录小鼠在各箱体的停留时间。
20 中药药理与临床 2006;22(1)
＊ 国家自然基金资助项目(No.30271610)
1.5.3　吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱的测定　取达到实验
要求的小鼠 70只随机分 7组 , 即空白对照组 、吗啡模型组(9
mg/kg)、吗啡 +青风藤组(10 g生药 /kg, ig)、吗啡 +青藤碱组
(60mg/kg, im)、吗啡 +苯海拉明组(30 mg/kg, ip)、吗啡 +CP
48/80组(5 mg/kg, sc)、吗啡 +L-组氨酸组(750 mg/kg, ip),每
组 10只动物。除空白对照组两次均 sc生理盐水外 , 其余各组
小鼠每天分别 sc盐酸吗啡和生理盐水各一次 , 两次给药间隔 8h
(8:00, 16:00)。小鼠注射盐酸吗啡后置于非偏爱侧白色箱体 ,
注射生理盐水后置于偏爱侧黑色箱体。小鼠在箱内逗留时间
为 40 min。共训练 5d, 小鼠即形成条件性位置偏爱。从给吗啡
的第 4天开始 , 各组在给吗啡前 45 min按上述剂量给予相应的
药物 , 空白对照组和吗啡模型组给予同容量生理盐水 , 连续给
药 3天。在最后一次注射吗啡 24 h后进行位置偏爱检测。将
偏爱箱隔板抽出 , 把小鼠逐只放入箱体中间 , 观察 15 min, 以小
鼠的头部为准记录小鼠在各箱体的停留时间。每天给药前称
小鼠的体重。
1.5.4　小鼠脑组织 HA含量测定　完成位置偏爱时间测定后 ,
将小鼠断头处死 , 迅速取出脑组织 , 切除小脑 , 剔除大脑的脑膜
及血管 , 用 1/万电子天平称量后 , 加酸化正丁醇 4ml在低温下
将小鼠大脑组织制成匀浆 , 漩涡振荡 5 min, 3000rpm离心 5min。
取上清液 1.2 ml,加入 4mol/LHClO4 0.6 ml, 混匀 , 3000 rpm离
心 5 min, 取上清液 1.7 ml, 加 3mol/LNaOH(用 NaCl饱和)0.3
ml和正丁醇 1.3 ml, 漩涡振荡 5 min, 离心 , 3000 rpm×5 min。
取正丁醇相 2ml,加入 0.1mol/LHCl1.6ml和正庚烷 2ml, 漩涡
振荡 5 min, 离心 , 3000 rpm×5 min。 取水相 1.6 ml, 加 1mol/L
NaOH1.6ml, 摇匀 ,移至荧光分光光度计前 ,加入 0.2 ml0.1%
邻苯二甲醛 , 在 4min内加入 3mol/LHCl0.05 ml终止反应 ,在
λEX:360 nm, λEM:450 nm条件下测 HA荧光值。以标准品荧
光值减去标准品空白管荧光值后 , 以荧光值对浓度求出回归方
程。样品管荧光值减去样品空白管荧光值后用回归方程计算
出样品管浓度 , 然后换算出每 g脑组织中所含组胺的量。
2　结果
2.1　药物对正常小鼠奖赏效应或厌恶效应的影响及脑内 HA
含量变化　各组小鼠给药前在白箱侧的逗留时间无明显差异。
各药物连续使用 6d并伴药箱训练后 ,各组小鼠在白箱的逗留时
间差异均也无显著性意义 ,给药后小鼠在白箱侧的时间与给药
前比较 , 亦无明显差异 , 表明小鼠对各药均不产生奖赏效应或
厌恶效应。小鼠脑组织 HA测定 CP48/80可使小鼠脑内 HA含
量明显下降。 L-组氨酸 、青藤碱及青风藤给药后 , 小鼠脑内 HA
水平明显升高。苯海拉明对小鼠脑组织 HA水平无明显影响 ,
见表 1。
　　表 1　对正常小鼠在伴药箱侧的逗留时间及脑组织 HA含量的影响
( x±s, n=10)
组别 剂量(mg/kg)
小鼠在伴药箱(白箱)侧的逗留时间(s)
给药前 给药后
脑HA含量
(ng/g脑组织)
空白对照 407±134 428±80 27.82±5.91
CP48/80 5 394±94 412±111 17.80±5.92＊＊
L-组氨酸 750 433±124 428±102 35.81±5.72＊＊
苯海拉明 30 431±88 394±104 26.02±6.64
青藤碱 60 422±119 432±138 36.74±7.06＊＊
青风藤 10g/kg 459±93 417±99 37.83±8.57＊＊
　　与对照组比较 ＊＊ P<0.01
2.1　药物对吗啡诱导小鼠位置偏爱效应及脑内 HA水平的影
响　空白对照组小鼠药后在白箱侧停留的时间与药前无明显
差异。吗啡模型组与空白对照组比较 , 小鼠在白箱停留的时间
显著延长;与给药前相比 , 小鼠在白箱中停留的时间也显著延
长 ,显示小鼠产生了明显的位置偏爱。连续给药 3天 , 苯海拉
明 、青藤碱及青风藤与吗啡模型组比较 , 小鼠在白箱中停留的时
间显著缩短 ,以上 3组与本组给药前相比 , 小鼠在白箱中停留的
时间未见明显延长 , L-组氨酸组与与空白对照组比较 , 小鼠在白
箱中的停留时间显著延长 , 但与给药前相比 , 则无显著差异。
CP48/80组小鼠药后在白箱的停留时间与空白组比较 , 未见显
著延长;与给药前相比 , 亦无显著差异。 吗啡模型组小鼠脑内
HA含量较空白对照组显著升高。 CP48/80、苯海拉明 、青藤碱
及青风藤连续用药 3d,小鼠脑内的 HA水平明显较吗啡模型组
降低。L-组氨酸组小鼠脑内 HA含量未见明显改变 ,见表 2。
　　表 2　对吗啡诱导小鼠位置偏爱及脑组织 HA水平的影响( x±s, n
=10)
组别 剂量(mg/kg)
小鼠在伴药箱侧的逗留时间(s)
给药前 给药后　　
脑 HA含量
(ng/g脑组织)
空白对照 404±82 418±109 28.48±5.45
吗啡模型 9 403±108 551±79＊＊■■ 40.98±7.11＊＊
吗啡 +CP48/80 5 404±87 475±74 20.64±7.90＊＊##
吗啡 +L-组氨酸 750 436±100 503±45＊ 37.57±8.86＊＊
吗啡 +苯海拉明 30 397±90 461±65# 31.59±6.27##
吗啡 +青藤碱 60 414±90 423±57## 34.12±6.85#
吗啡 +青风藤 10g/kg 396±78 413±117## 33.10±8.80#
　　与空白对照组比较 ＊＊P<0.01;与吗啡模型组比较 #P<0.05, ##P<0.
01;与给药前比较 ■■P<0.01
3　讨论
　　条件性位置偏爱(CPP)试验是一项检测药物奖赏特性的行
为药理学方法 ,是目前评价药物精神依赖性潜力的一种简单而
有效方法 [ 4] 。本研究在连续小剂量(9 mg/kgsc)使用吗啡后 ,
小鼠在伴药箱的停留时间明显延长 , 形成与人类阿片类依赖者
相似的精神依赖 ,即渴求用药行为。因此 CPP能较好地反映小
鼠对吗啡的精神依赖状态。本实验结果表明 , 青风藤及青藤碱
本身并不使小鼠产生奖赏或厌恶效应 , 但青风藤及青藤碱均能
明显抑制吗啡诱导的条件性位置偏爱的形成 , 与我们以前的研
究结果一致 [ 5] 。
　　哺乳动物中枢神经系统存在组胺 、组胺受体和组胺能神经 ,
组胺在脑内具备了神经递质的功能。脑内组胺系统直接参与边
缘系统功能 ,调节中枢的诸多神经行为 , 如学习记忆 、自发运动 、
觉醒与睡眠 、情感控制等 [ 6 , 7] 。本研究结果表明 , 青风藤及青藤
碱 、组胺的前体 L-组氨酸用于正常小鼠后 , 小鼠脑内的组胺含
量明显升高 ,而组胺耗竭剂 CP48/80使用后则使小鼠脑内组胺
下降 ,但小鼠对这 4个药物均不产生显著的位置偏爱效应 , 即药
物本身对动物无奖赏作用也无厌作用。吗啡(9 mg/kg)在诱导
小鼠产生位置偏爱的同时 , 小鼠脑内组胺含量明显增多。青风
藤或青藤碱用药后可使吗啡依赖小鼠脑内升高的组胺水平降
低。脑内组胺主要存在组胺神经元和肥大细胞中 , 约各占
50%[ 6, 8] 。吗啡引起小鼠脑内组胺升高的机理主要是通过促进
中枢组胺的代谢和促进肥大细胞释放组胺 [ 6] 。青藤碱也有促
组织胺释放作用。由于青藤碱能通过血脑屏障进入大脑 ,在脑
中具有相当的浓度 [ 9] 。因此 , 青风藤及青藤碱也能通过促进脑
21中药药理与临床 2006;22(1)
内肥大细胞释放组胺而引起正常小鼠脑内组胺水平的升高。
但对于吗啡依赖的小鼠 , 给予青藤碱或青风藤后 , 脑内组胺并
没有明显升高 , 反而显著下降。 其机理可能是由于青藤碱与吗
啡的共同作用促进脑内组胺大量释放 , 这高浓度的组胺激活了
中枢的组胺 H3受体 , 反馈性抑制组胺能神经元释放组胺递质
而使脑内组胺水平下降 ,从而抑制了 CPP的形成。苯海拉明是
H1受体抑制剂 ,通过阻断中枢 H1受体而抑制了吗啡诱导的小
鼠位置偏爱。 CP48/80是组胺耗竭剂 [ 8] , 能特异性作用于肥大
细胞 , 导致细胞内组胺耗竭 , 因此引起脑内组胺含量降低。但
CP48/80对吗啡诱导的位置偏爱并没有明显影响 ,提示肥大细
胞内的组胺水平可能对吗啡依赖的形成无明显影响。 L-组氨酸
是脑内组胺合成的主要前体物 , 能通过血脑屏障 , 在组胺脱羧
酶的作用下合成组胺 。给予 L-组氨酸后 , 正常小鼠及吗啡依赖
小鼠脑内的组胺水平均明显升高 ,但在本实验使用的剂量下 , L-
组氨酸对 CPP未见明显影响。
　　大量的研究结果表明 [ 10 ～ 12] , 中枢组胺系统参与了药物依
赖的形成过程。但关于中枢组胺在阿片类依赖中的作用和地
位尚存在许多争议 , 有不少完全相反的实验结果。本研究结果
提示 , 小剂量吗啡在诱导小鼠位置偏爱形成的过程中伴有脑内
组胺水平的升高 , 中枢组胺系统在吗啡依赖的形成过程中可能
起着抑制和促进的双重作用。 H1受体可能与药物依赖的形成
有关 , 而 H3受体的激活可能抑制了 CPP的形成。中枢组胺水
平可能通过作用于不同脑区及不同的组胺受体而表现不同的
作用。虽然目前还没有直接的实验室和临床的证据来证明组
胺是通过何种途径在药物依赖形成中发挥着抑制或促进的作
用 , 但药物依赖是多个神经系统及多种神经递质共同参与的复
杂过程是目前较一致的认识。中枢组胺系统在药物依赖中的
作用如能被进一步证实 ,将可能成为药物依赖形成的一种新机
制 , 而通过对该机制的干预又可能带来治疗上的突破。
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EffectsofCaulisSinomeniandsinomenineonbrainhistaminelevelinplacepreferencemice
MoZhixian, ZhouJiyin
(ColegeofTraditionalChineseMedicine, SouthernMedicalUniversity, Guangzhou　510515)
　　Objective:ToexploretheeffectsofCaulissinomeniandsinomenineonbrainhistaminelevelofconditionedplacepreferenceinducedby
morphineinmice.Methods:Morphinewasinjected(9 mg/kg, sc)tomicefor6 days.Thestrongplacepreferencewasobservedinmice.
Fromd4tod6 oftrainingphasemicewerepretreatedwithCaulissinomeni(10 g/kg, ig), sinomenine(60 mg/kg, im), diphenhydramine
(30mg/kg, ip), CP48/80 (5 mg/kg, sc)orL-histidine(750 mg/kg, ip), respectively, in45 minbeforeinjectionofmorphinefor3
days.Thecontentofhistamine(HA)inmousebrainwasmeasuredbyfluorospectrophotometry.Results:Inmorphinecontrolgroup, the
timeofstayinginmorphine-pairedcompartmentofmicewassignificantlyextended.ThecontentofHAinmousebrainwasmarkedlyin-
creased.AftertreatmentwithCaulissinomeniandsinomenine, thetimeofstayinginmorphine-pairedcompartmentandHAlevelinmice
weresignificantlyreduced.Conclusion:TheconditionedplacepreferenceinducedbymorphineinmicewasresponsibleforincreasedHA
levelinthebrain.Caulissinomeniiandsinomeninecouldsuppresstheacquisitionofplacepreferenceinducedbymorphineandadjustthe
disorderofneurotransmitterofbraininmorphine-dependentmice.
Keywords　Caulissinomenii;sinomenine;morphine;conditionedplacepreference;histamine
22 中药药理与临床 2006;22(1)