全 文 ：收稿日期:2007-10-18;　修订日期:2008-01-15
作者简介:杨卫丽(1979-),女(汉族),黑龙江佳木斯人 ,现任河南医学院
助教 ,硕士学位 ,主要从事药学研究工作.
＊通讯作者简介:刘明生(1960-), 男(汉族),内蒙古武川人 ,现任河南医
学院教授 ,博士学位 ,主要从事热带药用植物活性成分研究工作.
牛耳枫与辣蓼提取物药效学研究
杨卫丽 ,曾祥周 ,张俊清 ,任守忠 ,陈　峰 ,刘明生＊
(海南医学院 ·海南省热带药用植物研究开发重点实验室 ,海南 海口　571101)
摘要:目的 研究牛耳枫与辣蓼提取物的抗急性胃肠炎的作用。方法 采用冰醋酸致小鼠毛细血管通透性法 、热板法 、豚
鼠回肠平滑肌运动法和 95%乙醇致大鼠胃溃疡法来观察提取物的抗炎 、镇痛 、解痉和抗胃溃疡作用。结果 牛耳枫与辣
蓼提取物对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著抑制作用(P<0.01), 而无镇痛作用 , 对 BaCl2引起的肠痉
挛有明显的解痉作用(P<0.001),对乙酰胆碱引起的肠痉挛无解痉作用 ,同时具有减小 95%乙醇对大鼠胃粘膜损伤的
作用。结论 牛耳枫与辣蓼提取物具有很好的抗炎 、解痉及抗乙醇引起的胃粘膜损伤作用 ,对胃肠道有很好的保护作用。
关键词:牛耳枫;　辣蓼提取物;　抗炎;　镇痛;　解痉
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2229-02
PharmacodynamicStudyofExtractofDaphniphulumcalucinumBenthandPolygonnm
HydropiperLinn
YANGWei-li, ZENGXiang-zhou, ZHANGJun-qing, RENShou-zhong, CHENFeng,LIUMing-sheng＊
(FacultyofPharmacology, HainanMedicalColege, HainanProvincialKeyLaboratoryofR＆ DofTropical
Herbs, HainanHaikou571101, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheanti-acutegastroenteritiseffectofNuerfengLialiaoWaterextract(NLWE)ofmouse.Meth-
odsTheanti-inflammatoryandanalgesiceffectofNLWEwasobservedbythepermeabilityofabdominalcapillarybyinjecting
glacialaceticacidandhotplaterespectively.EffectofNLWEonthecontractionofsmoothmusclesinducedbyacetylcholine
(Ach)orbariumchloride(BaCl
2
)wasinvestigatedinileuminvitro.ProtectiveeffectofNLWEwasobservedonabsoluteethanol
-inducedgastricmucosadamage.ResultsNLWEhadtheactionofreducingthepermeabilityofabdominalcapilarybyinjecting
glacialaceticacid(P<0.01), andhadnoanalgesiaeffect.NLWEcouldmarkedlyrestrainthecontractionofileumsmoothmus-
clescausedbyBaCl2(P< 0.001), buthadlitleinfluenceonthatcausedbyAch.NLWEcouldsignificantlyinhibittheforma-tionofacutegastriculcerinducedbyabsoluteethanolinrats.ConclusionNLWEhassignificantanti-cnflammatoryeffect.Itcan
nhibitscontractionofsmoothmusclesandprotectsstomachofmousefrominjuryinducedbyethanol.
Keywords:NuerfengLialiaoWaterextract;　Anti-inflammation;　Analgesia;　Spasmolysis
　　枫蓼肠胃康颗粒剂由牛耳枫 DaphniphulumcalucinumBenth
和辣蓼 PolygonnmHydropiperLinn两味中药组成 , 临床用其治疗
急性胃肠炎 、食滞胃痛等症 ,具有良好效果 ,但该产品药效物质尚
不明确 , 不能很好地阐明其作用机理。本实验针对此问题按照原
处方对牛耳枫和辣蓼的提取物上大孔吸附树脂后的水洗脱部分
(NuerfengLaliaoWaterExtract简称 NLWE)进行药效学研究 , 进
一步明确肠胃康颗粒剂的药效部位 ,为新药研发提供依据。
1　材料与仪器
1.1　试药 肠胃康颗粒剂(海口市制药厂生产 , 批号 060709, 规
格:每袋袋装 8g);牛耳枫与辣蓼提取物(NLWE)(黑色粉末 ,自
制 , 每克样品相当于原生药 10.0 g);阿司匹林肠溶片(昆明云健
制药有限公司生产 , 批号 20060320, 规格 25 mg);硫酸阿托品注
射液(天津药业集团新郑股份有限公司生产 , 批号 0601181, 规
格:2 ml∶1mg);伊文思蓝(中国医药集团上海试剂公司生产 ,批
号 20030714, 规格 1.0 g);乙酰胆碱(Ach)(上海三爱思试剂有限
公司生产 , 批号 20030620, 规格:1);氯化钡(BaCl2)(广州化学试
剂厂生产 , 批号 040503-2,规格 500 g)。
1.2　动物 昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 22 g, 合格证号 2006A070;
Wistar大鼠 ,体重 180 ～ 220 g,合格证号 2006A07;豚鼠 ,体重 250
～ 300g,合格证号 2006A067。以上动物均由中山大学实验动物
中心提供。适应环境一周 ,自由饮水进食。
1.3　仪器 YLS-6B智能热板仪(山东省医学科学院设备站);
BL-420E生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司);ZH-Z
型离体器官测量系统(安徽省淮北正华生物仪器设备有限公
司);
UV22401PC紫外分光光度计(日本岛津);分析电子天平(北
京瑞利 ,精度 0.1mg)。
1.4　统计学方法 本实验数据结果均以 x±s表示 , 剂量资料比
较 , 采用 t检验 , 统计软件为 SPSS13.0。
2　方法及结果 [ 1 , 2]
2.1　对醋酸致小鼠毛细血管通透性增加的影响 实验方法:取
50只昆明种小鼠 , 体重 18 ～ 20 g, 雌雄各半 , 随机分为 5组(n=
10), 正常对照组:灌胃(ig)给予等容生理盐水;肠胃康颗粒阳性
对照组 10.0g· kg-1 ig;阿司匹林阳性对照组 0.2 g· kg-1 ig;牛
耳枫与辣蓼提取物剂量为生药 20.0和 10.0 g· kg-1 ig高 、低剂
量组(以下简称提取物高 、低剂量组)。各组动物按 0.5 ml/20 g
体重给药 ,每天分别给药 1次 ,连续给药 3 d, 末次给药后 0.5 h,
各鼠尾静脉注射 0.5%伊文思兰盐水溶液 0.1 ml/10 g随即腹腔
注射醋酸溶液 0.2 ml/只 , 20 min后处死动物 ,轻揉腹部 1 min吸
取 4ml冲洗液 , 于 3 000r/min离心 10min,取上清液于 610 nm处
比色测定吸光度 ,记录 A值 , 计算抑制率 , 进行组间比较。结果见
表 1。
抑制率(%)=(对照组 A-给药组 A)/对照组 A×100%
结果表明:牛耳枫与辣蓼提取物高剂量 、提取物低剂量组 、阿
司匹林组均对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著
抑制作用(P<0.01), 肠胃康颗粒组对醋酸诱导的小鼠腹腔毛细
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血管通透性增高无抑制作用。
表 1　肠胃康颗粒及提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 A值 抑制率(%)
正常对照 - 1.818±0.316 -
提取物高剂量 20.0 1.422±0.365■ 21.80
提取物低剂量 10.0 1.305±0.340 ■ 10.23
肠胃康颗粒 10.0 1.827±0.390■■ -0.50
阿司匹林 0.2 0.734±0.224■ 59.65
　　与正常对照组比较 , ■P< 0.01, ■■P> 0.05;n=10
2.2　对热板所致小鼠疼痛的影响 [ 3] 实验方法:筛选痛阈值为 5
～ 30 s之间的雌性昆明小鼠 75只 , 体重 18 ～ 20 g, 随机分成 5组
(n=15), 正常对照组 ,肠胃康颗粒阳性对照组 ,阿司匹林阳性对
照组 , 牛耳枫与辣蓼提取物剂量高 、低剂量组。各组动物给药方
法 , 给药途径及剂量均同 “ 2.1”项 ,每天分别给药 1次 , 连续给药
3 d后 ,末次给药后 15, 30, 60, 90, 120 min用热板法测量痛阈值。
结果见表 2。
表 2　肠胃康颗粒及提取物对热板法所致小鼠疼痛的影响( x±s)
组别 痛阈 t/s药前 15min 30min 60min 90 min 120min
正常对照 14.57±3.54 10.29±3.62＊＊ 14.86±7.73＊ 12.12±3.65＊ 12.86±5.90＊ 13.26±5.36＊
提取物高剂量 13.55±3.01 10.25±2.83＊＊ 13.78±4.89＊ 12.70±3.42＊ 16.10±8.08＊ 11.47±6.44＊
提取物低剂量 15.93±4.06 11.08±3.66＊＊ 9.83±4.17＊＊ 9.15±2.86＊＊ 11.16±3.89＊＊ 9.54±3.83＊＊
肠胃康颗粒 14.61±3.65 11.98±5.16＊ 10.00±4.57＊＊ 10.14±3.09＊＊ 11.12±4.95＊＊ 10.42±4.38＊＊
阿司匹林 12.06±4.15 13.72±5.79＊ 10.94±3.67＊ 14.05±6.53＊ 18.15±5.98＊＊ 20.35±14.9＊
　　与自身药前痛阈比较 , ＊＊P< 0.01, ＊P>0.05
　　结果表明 , 正常对照组实验过程中无变化 , 阿司匹林组 90
minP<0.05, 均值大于自身给药前痛阈值;而其他组 , P> 0.05
或 P<0.05但其平均痛阈值均小于自身给药前痛阈值。结果显
示 , 除阿司匹林外 ,其他组受试药均无镇痛作用。
2.3　对离体豚鼠回肠平滑肌的影响 [ 4 , 5] 取豚鼠 ,按常规法制备
离体回肠标本 , 标本置于 18 ml盛有台氏液的浴槽中 , 通氧 ,
(38.0±0.5)℃恒温 ,张力负荷 1 g,用记录仪描记运动曲线 , 平
衡 30min,稳定后加入 0.1 ml0.1% Ach, 记录收缩高度;随后用
台氏液清洗回肠及浴槽两次 , 5min后注入 0.5 ml10%牛耳枫与
辣蓼提取物高剂量溶液 , 30s后 ,再注入 0.1% 0.1 mlAch,记录
反应高度 ,用台氏液清洗浴槽两次 ,更换回肠 , 按照以上方法进行
多次实验 ,记录数据作为一组数据值。随后将牛耳枫与辣蓼提取
物低剂量溶液 0.5ml组 、26%肠胃康颗粒溶液 0.5ml组及 0.05%
阿托品 0.05 ml组 ,按以上实验同法操作。对 0.6ml1%BaCl2组
所致豚鼠回肠收缩的影响 ,亦按上述方法进行实验操作 , 记录实
验结果 ,进行组间比较 ,计算抑制率。结果见表 3 ～ 4。
抑制率(%)=(给药前收缩幅度 -给药后收缩幅度)/给药
前收缩幅度 ×100%
表 3　肠胃康颗粒及提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用( x±s)
组别 浓度(%) 体积 V/ml 收缩高度 m/gBaCl2　　　　　给药后
抑制率
(%)
提取物高剂量 10 0.5 1.36±0.91 0.31±0.61＊ 43.0
提取物低剂量 1 0.5 1.07±0.57 0.21±0.31＊# 36.6
肠胃康颗粒 26 0.5 1.33±0.68 0.67±0.55＊ 36.2
　　与 BaCl2比较 , ＊P< 0.001;与提取物高剂量组比较 , #P>0.05;n=10
表 4　肠胃康颗粒及提取物对豚鼠回肠平滑肌的作用( x±s)
组别 浓度(%) 体积V/ml
收缩高度 m/g
Ach　　　　　　给药后
抑制率
(%)
提取物高剂量 10 0.5 2.36±0.71 2.32±0.57# -3.2
提取物低剂量 1 0.5 2.21±1.08 1.95±0.75# 6.9
肠胃康颗粒 26 0.5 2.21±0.79 2.48±1.13# -10.3
阿托品 0.05 0.05 1.75±0.64 0.38±0.40＊ 79.9
　　与 Ach比较 , #P>0.05, ＊P<0.001;n=10
结果表明:肠胃康颗粒 、提取物高剂量 、提取物低剂量皆对
BaCl2引起的肠痉挛有明显的解痉作用(P<0.001), 提取物高剂
量组 、提取物低剂量组作用结果无明显差别(P> 0.05), 颗粒组
亦无明显差别 , 对乙酰胆碱引起的肠痉挛均无解痉作用。
2.4　对乙醇致胃粘膜损伤的作用 [ 6 , 7] 取 40只 Wistar大鼠随机
分为 4组(n=10), 雌雄各半 , 正常对照组 , 灌胃(ig)给予等容
生理盐水;肠胃康颗粒阳性对照组 10.0 g· kg-1 ig;牛耳枫与辣
蓼提取物剂量为生药 5.0 g和 10.0 g· kg-1 ig剂量组。各组动
物按 2 ml/200g体重给药 ,每天分别给药 1次 , 连续给药 3 d, 禁
食 48h,最后 1次给药后 1 h灌胃 95%乙醇 1 ml, 正常饮水 , 1 h
后处死大鼠 , 结扎贲门和幽门 , 取出注入 5 ml生理盐水 , 于 10%
甲醛溶液中固定 10min,沿胃大弯剪开冲洗观察结果。计算腺胃
部出现溃疡点的数目及测量溃疡长度 ,依据 GUTH法计算胃黏膜
损伤指数 , (每个出血点计 1分 , 糜烂计 2分 ,溃疡长度小于 1 mm
计 3分 , 大于 1 mm小于 2 mm计 4分 ,长度在 2mm以上计 5分)
将计分相加即为该只动物的溃疡指数 ,比较组间差异并计算出溃
疡抑制率。结果见表 5。
抑制率(%)=(空白对照组溃疡指数 -药物治疗组溃疡指数)空白对照组溃疡指数 ×100%
表 5　肠胃康颗粒及提取物抗乙醇引起胃粘膜损伤的作用( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 溃疡指数
正常对照 - 70.99±39.14
提取物高剂量 10 28.97±25.52＊■
提取物低剂量 5 43.01±30.20＊#■
肠胃康颗粒 10 7.65±8.47＊
　　与正常对照组比较 , ＊P<0.05;与提取物高剂量组比较 , #P>0.05 ;
与肠胃康颗粒组比较 , ■P<0.05;n=10
结果表明 ,各组与空白组比较均有效(P< 0.05), 但肠胃康
颗粒组效果最好。而且提取物高低剂量组作用结果无明显差别
(P> 0.05),与肠胃康颗粒比较差别较大(P<0.05)。
3　讨论
本实验结果表明 , 牛耳枫与辣蓼提取物具有降低毛细血管通
透性 、解痉及抗乙醇引起的胃粘膜损伤作用 ,但无镇痛作用 ,可用
于急性胃肠炎的治疗。
Ach是胆碱受体激动剂 ,激动胃肠道平滑肌上的 M胆碱受
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体 , 可引起平滑肌收缩。阿托品是胆碱受体阻断药 , 通过阻断 M
受体而拮抗 Ach对平滑肌的收缩作用。离体豚鼠回肠实验结果
显示 , NLWE对 Ach引起的肠痉挛则无解痉作用 , 提示其无阻断
M受体的作用。 Ca2+在介导平滑肌收缩反应中起核心作用 , 平滑
肌收缩通过兴奋 -收缩偶联过程而实现 [ 8] 。 BaCl2是通过释放
细胞内的 Ca2+而引起肠管平滑肌痉挛 [ 9] 。 NLWE对 BaCl2引起
的肠痉挛有明显的解痉作用 ,提示其具有钙拮抗作用。 因此 , 可
以推测NLWE是通过拮抗Ca2+而不是通过阻断 M胆碱受体来起
到解痉作用的。
参考文献:
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收稿日期:2007-08-30;　修订日期:2008-01-20
作者简介:江海涛(1980-),男(汉族),安徽霍丘人 ,现任南京晓庄学院生
命科学系助教 ,硕士学位 ,主要从事天然产物功能性研究工作.
＊通讯作者简介:吴京燕(1955-), 女(汉族),天津人 ,现任江苏吴中大自
然生物工程有限责任公司高级工程师 ,学士学位 ,主要从事保健食品的研
发工作.
灵芝提取物在睡眠改善中的功能性研究
江海涛 1 , 任源浩1 , 虞蔚岩 1 , 周泉澄1 , 崔　伟 1 , 蔡　珺1 , 吴京燕 2, 3＊
(1.南京晓庄学院 ,江苏 南京　211171;
2.江苏吴中大自然生物工程有限责任公司 , 江苏 南京　210097;
3.南京师范大学生命科学学院 ,江苏 南京　210097)
摘要:目的 研究灵芝提取物对睡眠的改善作用。方法 通过直接睡眠实验 、延长戊巴比妥钠睡眠时间 、戊巴比妥钠阈下
催眠剂量实验和缩短巴比妥钠睡眠潜伏期实验观察灵芝提取物对睡眠的作用。结果 灵芝提取物在延长戊巴比妥钠睡
眠时间 、戊巴比妥钠阈下催眠剂量实验 、缩短巴比妥钠睡眠潜伏期实验均有一定的作用。结论 灵芝提取物对睡眠有一
定的改善作用。
关键词:灵芝提取物 ;　生理活性;　睡眠调节
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2231-02
FunctionalResearchofGanoderrmalucidumExtractonSleepofRats
JIANGHai-tao1 , RENYuan-hao1 ,YUWei-yan1 ,ZHOUQuan-cheng1 , CUIWei1 ,CAIJun1 , WUJing-yan2, 3
(1.DepartmentofLifeScienceofNanjingXiaozhuangUniversity, Nanjing211171, China;2.JiangsuWuzhong
NaturalBiotechCo.Ltd.Nanjing210091, China;3.ColegeofLifeScienceofNanjingNormalUniversity, Nan-
jing210097, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheefectofGanoderrmalucidumextractonsleep.MethodsItsefectonsleepwasobserved
throughtheexperimentsofsleepinduceddirectly, prolongingsleepingtimeinducedbypentobarbitalsodium, affectingsleepingrate
underthethresholdhypnogenesisdosageofpentobarbitalsodium, shorteningsleepdelitescenceinducedbytobarbitalsodium.Re-
sultsGanodermalucidumextracthadsignificanteffectonsleepimprovementduringtheexperimentsabove.ConclusionGanoder-
rmalucidumextracthasefectonsleepofrats.
Keywords:Ganoderrmalucidum sextraction;　Biologicalactivity;　Sleepconditioning
　　灵芝 Ganodermalucidum为担子菌纲灵芝属真菌 , 药用价值
极高 , 具有益气安神 、扶正固本之功效 [ 1] ,被视为珍贵的中药材 ,
是中医药宝库中的珍品。现代药理学证明:灵芝含有多种生理活
性物质 , 灵芝多糖是主要的有效成分 ,具有防辐射 、抗肿瘤 、调节
血糖 、降血脂 、护肝等作用 [ 2 ～ 4] 。
本文主要以灵芝提取物为实验材料结合相关实验方法来验
证灵芝在睡眠改善中的作用 ,为研究灵芝的产品开发提供可靠的
依据 , 充分发挥灵芝天然无毒以及在人类疾病治疗和身体调理中
的作用 。
1　材料
1.1　原料和试剂 灵芝提取物:江苏吴中大自然生物工程有限责
任公司提供 ;戊巴比妥钠(AR):中国医药(集团)上海化学试剂
公司;巴比妥钠(AR):天津市科密欧化学试剂开发中心。
1.2　动物 雄性 ICR小鼠 ,体重(22±4)g, 江苏省药检所提供。
2　方法
2.1　直接睡眠实验 选取 60只小鼠 , 随机分成 4组 , 分别为 3个
实验组和对照组。实验组给予不同剂量灵芝提取物:(低剂量
150mg/kg· bw、中剂量 450mg/kg· bw和高剂量 1 500 mg/kg·
bw),对照组给予等量的蒸馏水。连续灌胃 30 d, 观察各组小鼠
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