全 文 ：HAINAN MEDICAL JOURNAL《海南医学》2012年第23卷第15期 Vol.23 No.15 August 2012
特点，在预防治疗的过程中应根据这些数据有针对性
地进行预防治疗等。
再者，对于检出病原菌的标本的研究，发现主要
检出标本以痰液最多，其次为尿液、创口分泌物及胸腹
腔积液等，说明了感染部位的比例情况，在预防感染中
也有一定的提示性。另外，分别对革兰阴性菌、革兰阳
性菌和真菌的耐药性进行分析，发现各类病原菌的耐
药性存在一定的差异，从表2~4中可以看出，大多数常
见的病原菌对常见的抗生素的耐药性较高，大多达到
了50%以上，这对于临床用药治疗是一个提示，也是一
个警示，提醒我们在临床用药中要避免抗生素的滥用，
以免进一步发生多重耐药菌。综上所述，我们认为
135例医院感染患者病原菌以革兰阴性菌所占比例最
高，而不同病原菌耐药性均较明显，应引起重视。
参考文献
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(收稿日期：2012-02-09)
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作者简介:李海龙(1978—)，男，河南省开封市人，实验师，硕士，主要从事热带药用植物的研究与开发工作。
*通讯作者：陈 峰(1980—)，男，讲师，博士，主要从事中药药物代谢与动力学研究工作。E-mail：cy.chen508@gmail.com
牛耳枫药材中总黄酮含量测定
李海龙，刘明生，张俊清，符乃光，陈 峰*
(海南医学院药学院 海南省热带药用植物研究开发重点实验室，海南 海口 571101)
【摘要】 目的 建立测定牛耳枫药材中总黄酮的含量方法。方法 以芦丁为对照，显色后采用分光光度法
于510 nm 处测定总黄酮含量。结果 总黄酮在7.84~47.04 µg/ml (r=0.999 8)范围内线性关系良好；总黄酮的平
均回收率为98.51%，RSD=2.48%。结论 建立的方法可用于牛耳枫总黄酮的测定。
【关键词】 牛耳枫；分光光度法；总黄酮；含量；测定
【中图分类号】 R28 【文献标识码】 B 【文章编号】 1003—6350（2012）15—106—03
Determination of total flavonoids in Daphniphylium calycinum. LI Hai-long, LIU Ming-sheng, ZHANG Jun-qing,
FU Nai-guang, CHEN Feng. Key Laboratory of R&D on Tropical Medicinal Plants, College of Pharmacy, Hainan
Medical University, Haikou 571101, Hainan, CHINA
【Abstract】 Objective To establish the methods for the determination of total flavonoids in Daphniphylium
calycinum. Methods The total flavonoids was determined by visable spectrophotometry with the detection wave-
length of 510 nm after color development reaction, using rutin as the control. Results The standard curve was linear
in the range of 7.84~47.04 µg/mL for total flavonoids (r=0.999 8), and the average recovery of total flavonoids was
98.51% with RSD of 2.48%. Conclusion The method established can be used to determine the content of total flavo-
noids in Daphniphylium calycinum and to control the quality of Daphniphylium calycinum.
【Key words】 Daphniphylium calycinum; Spectrophotometry; Total flavonoids; Content; Determination
·药物与临床·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2012.15.047
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牛耳枫又称老虎耳，南岭虎皮楠，为交让木科
(Daphniphyllaceae)交让木属 (Daphniphyllum)植物牛
耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)的干燥全株 [1]，
味苦涩，性平，有清热解毒、活血化瘀、消肿止痛等功
能，主治痢疾、痨咳热泻、感冒发烧等，主要含有芦丁、
槲皮素等黄酮类成分及一些生物碱类成分。芦丁是
一种分布广泛的黄酮类化合物，略溶于水，能溶于热
水及乙醇，具有抗炎、抗病毒和抑制醛糖还原酶作用，
是治疗高血压、心血管疾病、胃病、皮肤病、糖尿病等
多种疾病的良药[2-4]，在牛耳枫药材中含量较高，且为
该药材的有效成分。何远景等[5]采用高效液相色谱
法(HPLC)测定了牛耳枫中芦丁的含量，目前尚未见
有牛耳枫中总黄酮含量测定的报道，本实验建立分光
光度法测定牛耳枫中总黄酮的含量，为控制牛耳枫药
材质量提供依据。本文建立的以芦丁为对照，采用分
光光度法测定牛耳枫药材中总黄酮含量的方法，将为
牛耳枫药材的质量控制提供实验依据。
1 资料与方法
1.1 仪器 JASCO-V650紫外可见分光光度计
(日本分光公司)；CascadeIX 超纯水器(美国 PALL 公
司)；FA-1104 型电子天平(110 g/0.000 1 g，德国赛多
利斯仪器有限公司)。
1.2 实验材料及试剂 牛耳枫由中国医学科学
院药用植物研究所海南分所提供，经陈伟平研究员
鉴定为牛耳枫。芦丁对照品(由中国药品生物制品
检定所提供，批号：100080-200707)；水为去离子水；
磷酸、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、乙醇等试剂均为
分析纯。
1.3 方法
1.3.1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取干燥
至恒重的芦丁适量，置于容量瓶中，加 60%乙醇制成
芦丁含量为0.196 mg/ml的溶液作为对照。
1.3.2 供试品溶液的制备 取牛耳枫药材粗粉
(过 20 目筛)约 0.5 g，精密称定，加入 60%乙醇溶液
100 ml回流提取 75 min，过滤，滤液转移至 100 ml容
量瓶中，放冷至室温，以 60%乙醇定容至刻度，摇匀，
即得供试品溶液。
1.3.3 显色溶液的制备 取芦丁对照品溶液或
牛耳枫供试品溶液 6.0 ml，置于 25 ml 容量瓶中，加
入 5% NaNO2溶液 1 ml，混匀，放置 6 min，加入 10%
Al(NO3)3溶液 1 ml，混匀，放置 6 min，加入 NaOH 试
液 10 ml，加水至刻度，混匀，放置 15 min，即得显色
溶液。
2 结 果
2.1 测定波长的选择 分别取芦丁对照品溶
液和牛耳枫供试品溶液 3.0 ml，制备芦丁对照品和
牛耳枫供试品显色溶液，分别在 400~600 nm波长范
围内扫描。结果表明，对照品和供试品显色溶液均
在 510 nm 波长处有最大吸收，文献报道[6-7]以芦丁为
指标的亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠体系化学络合比
色法的最大吸收波长，最终确定510 nm为测定波长，
见图1、图2。
2.2 标准曲线的制备 分别吸取芦丁对照品溶
液 1 ml、2 ml、3 ml、4 ml、5 ml、6 ml，制备系列芦丁对
照品显色溶液。以0 µg/ml的芦丁对照品显色溶液为
空白，于 510 nm波长测定上述系列芦丁对照品显色
溶液的吸光度[4]，以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐
标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=12.882 ×
C-0.0129 (r=0.999 8)，结果表明，芦丁对照品溶液在
浓度为7.84~47.04 µg/ml时线性关系良好。
2.3 精密度试验 取一份样品，制备供试品溶
液。精密吸取供试品溶液 3 ml，制备供试品显色溶
液，在510 nm处测定吸光值，并根据回归方程求得总
黄酮的含量；同法操作 5 次，相对标准偏差(RSD)为
1.05% (n=5)，结果表明精密度良好。
2.4 重复性试验 取同一批样品，按“2.2”项描
述的方法制备 5份供试品溶液。分别取供试品溶液
3.0 ml 按“2.3”项描述的方法制备供试品显色溶液，
在 510 nm处测定吸光值，根据回归方程求得总黄酮
图1 芦丁对照品波长-吸光度吸收曲线
图2 牛耳枫供试品波长-吸光度吸收曲线
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的含量，RSD为 1.91% (n=5)，结果表明重复性良好。
2.5 稳定性试验 取一份样品制备供试品溶
液。精密吸取供试品溶液 3 ml 制备供试品显色溶
液，分别在放置 0 min、5 min、10 min、15 min、20 min
后，在510 nm处测定吸光度。结果表明，供试品溶液
显色后，在20 min内基本稳定，RSD=1.80% (n=5)。
2.6 加样回收率试验 精密量取已知总黄酮
百分含量 (28.67%)的牛耳枫供试品溶液 3 ml 置于
25 ml 容量瓶中，共 9 份，分别加入一定量的芦丁对
照品溶液，从加入 5% NaNO2溶液 1 ml起开始操作，
即得供试品显色溶液，510 nm处测定吸光度，从回归
方程求得总黄酮的含量，由表1结果表明以芦丁为对
照品，加样回收率为 98.51%，RSD为 2.48% (n=9)，均
符合要求。
2.7 样品测定 水份测定参照中国药典一部
2005版附录ⅨH的方法进行，结果见表 2。取三批牛
耳枫药材，每批取3份制备供试品溶液。分别取供试
品溶液 3.0 ml，而后制备供试品显色溶液，在 510 nm
处测定吸光值，从回归方程求得总黄酮的含量。
3 讨 论
通过对牛耳枫药材总黄酮超声提取及热回流提
取的考察，确定了热回流提取的方式；并进一步考
察了乙醇及甲醇分别作为提取溶媒时，溶媒浓度、
提取时间等因素，确定了合适的提取条件为 60%乙
醇热回流提取 75 min。本研究参考《中国药典》2010
版一部中测定沙棘总黄酮的方法[6]。芦丁对照品溶
液及牛耳枫供试品溶液在 510 nm 处有最大吸收。
通过对该方法进行了线性关系、精密度、稳定性及
耐用性进行方法学考察，结果表明，总黄酮含量测
定的方法简便合理、重复性好、结果准确，可用于牛
耳枫总黄酮的测定。
从稳定性试验可知，供试品溶液在显色后稳定时
间较短，而芦丁对照品溶液显色后可稳定1 h以上，这
可能与牛耳枫中所含黄酮成分的类型与纯度有关，应
在显色后尽快测定。
参考文献
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(收稿日期：2012-02-06)
表2 牛耳枫样品测定结果(n=3)
批号
200704
200705
200707
总黄酮含量
(mg/g)
41.33
43.07
43.89
RSD
(%)
0.22
0.04
0.08
水份含量
(%)
7.28
6.86
8.01
以干燥品计，总黄酮含量
(mg/g)
44.58
46.24
47.71
表1 总黄酮加样回收率测定
序号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
样品黄酮
含量(mg)
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
0.8600
加对照品量
(mg)
0.6880
0.6880
0.6880
0.8600
0.8600
0.8600
1.032
1.032
1.032
测得量
(mg)
0.6651
0.7089
0.6887
0.8285
0.8265
0.8374
1.011
1.037
1.042
回收率
(%)
96.67
103.0
100.1
96.33
96.11
97.37
97.96
100.5
101.0
平均回收率
(%)
98.51
RSD
(%)
2.48
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