全 文 ：[饮片炮制 ]
莱菔子炮制前后成分群变化的初步研究
任　涛 1 , 　吕文海 1＊ , 　张　欣2 , 　贾京京 1
(1.山东中医药大学 ,山东 济南 250355;2.中国药科大学 ,江苏 南京 210009)
收稿日期:2008-11-07
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30672665)
作者简介:任　涛(1984-),男 ,硕士研究生 ,从事中药炮制研究。 Tel:13658611056E-mail:rentao-sd@163.com
＊通讯作者:吕文海 ,教授 ,研究方向:饮片炮制理论与制备规范化。 E-mail:luwenhaitcm@163.com
关键词:莱菔子;炮制;成分群;高效液相色谱
摘要:目的:探讨炮制对莱菔子饮片中成分群的影响。方法:通过不同制备方法莱菔子供试样品 HPLC图谱的比较和相
似度计算 , 分析其成分群的变化规律。结果:发现莱菔子炒制具有抑制酶解机制 , 确认了能够产生新化合物 A209、B221
的前体物质 C3。结论:莱菔子炮制可通过影响煎煮过程使生 、炒品煎出成分不同而产生不同的临床疗效。
中图分类号:R283　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2009)11-1715-04
Preliminarystudyofcomponentsgroupchangebetweenbeforeandafterpro-
cessingSemenRaphani
RENTao1 , 　L Wen-hai1＊ , 　ZHANGXin2 , 　JIAJing-jing1
(1.ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine, Jinan250355 , China;2.ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210009 , China)
KEYWORDS:SemenRaphani;processing;componentsgroup;HPLCMap
ABSTRACT:AIM:ToexploretheefectsofprocessingoncomponentsgroupofSemenRaphani.METHODS:
BycomparingHPLCmapsofSemenRaphanisamplespreparedwithdiferentmethodsandcomputingsimilarity,
analysisthechangelawofthecomponentsgroup.RESULTS:Themechanismofinhibitingtheenzymebyprocess-
ingSemenRaphaniwasfoundandC3 wasabletoproducenewcompoundsA209, B221.CONCLUSION:Pro-
cessingSemenRaphanicanchangethecomponentsgroupthroughinfluencingthedecoctionprocess, eventualy
producediferentclinicalefects.
　　莱菔子是具 “生熟异治 ”、“生升熟降 ”药性特点
的常用中药 [ 1] 。笔者曾对其气味与挥发性成分 、脂
肪油部位进行了 GC-MS分析 ,发现了生 、炒莱菔子
挥发性成分的量变与质变特征[ 2] ,在进一步对非油
部位的系统分析中 ,发现并分离鉴定了莱菔子炒制
前后具显著量变的两个新化合物 , 暂定名为 A209
与 B221,并建立了其含测方法。
鉴于中药以多组分发挥综合作用的特点 ,本试
验借用 HPLC指纹图谱分析方法 [ 3]对莱菔子生 、炒
品成分群进行了对比分析 ,初步证明了其炒制过程
中可能存有 “杀酶保苷”机制 , A209和 B221两化合
物系同一成分 C3在不同条件下的次生产物 , C3可
能系其苷类成分的酶解产物 ,实验为揭示莱菔子
“生熟异治”的炮制机理提供了一定依据。
1　实验材料
1.1　供试饮片
莱菔子 ,购于鄄城良海中药饮片有限公司 ,经山
东中医药大学药学院生药系周凤琴教授鉴定为十字
花科植物萝卜 RaphanussativusL.的干燥成熟种子 ,
符合 《中国药典 》(2005版)药用规定 。按前期研究
确定的净制工艺净选 ,作为生莱菔子备用。
炒莱菔子 ,取净莱菔子 ,用 “莱菔子炮制工艺与
质量标准的规范化研究”中确定的工艺炒至质地鼓
起 ,易脱皮 ,富油性并有爆裂声和特有香气溢出时 ,
取出 ,晾凉 。生 、炒品均粉碎成粗粉备用 。
1.2　仪器与试剂
高效液相色谱仪 Agilent1100(美国 安捷伦科技
有限公司);乙腈为色谱纯;娃哈哈纯净水(潍坊娃
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哈哈饮料有限公司制造);其它试剂均为分析纯 。
高效液相图谱相似度分析软件:国家药典委员
会开发的 “中药色谱高效液相图谱相似度评价系统。
2　实验方法与结果
2.1　莱菔子炮制中抑制酶解机制的初步验证
2.1.1　供试样品的制备
按照水煎法 、沸水煎法 、沸水煎后加生品粉末浸
泡法制备样品 ,以期分析不同样品成分群发生变化
的环节 ,探索莱菔子炒制中是否存有 “杀酶保苷 ”
机制。
生 、炒品水煎提样品:取生 、炒莱菔子粉末各约
1 g, 精密称定 , 加 25 mL水 , (40 ±2)℃温浸 60
min,加热回流 60min,过滤。
生 、炒品沸水提样品:取样同上 ,将其直接加入
25 mL沸水中 ,加热回流 60 min,过滤 。
生 、炒品沸水提后加生品水浸样品:取生 、炒品
沸水提取样各 10mL,取 0.05g生莱菔子粉末 ,精密
称定 ,加入提取液中 , (40±2)℃温浸 12h,过滤 。
生品温浸样品:取生莱菔子粉末 0.05 g,精密称
定 ,加 10 mL水 , (40±2)℃温浸 12h,过滤 。
2.1.2　色谱条件及结果
PhenomenexC18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色
谱柱;流动相:乙腈-0.2%醋酸水溶液梯度洗脱:0
min(5∶95), 25 min(30∶70);流速为 1 mL/min;进样
量 20μL,检测波长依据出峰较多 ,分离效果最好的
原则最终确定样品检测波长为 240 nm,样品带宽 4
nm;参比波长为 400nm,参比带宽 100 nm。
指纹图谱软件分析条件:时间窗:0.4min;生成
对照图谱方法:中(以参与匹配的图谱之一作为对
照图谱)。
依据样品是否炮制 ,将 6份供试样品分为生品
水提组 ,炒品水提组。用 Agilent1100工作站将每
组 3个样品的液相图谱叠加比较分析 ,结果见图 1、
图 2。
图 1　莱菔子生品水提组
(由上至下:生品沸水提 、生品沸水提后加生品水浸 、生品水煎提)
图 2　莱菔子炒品水提组
(由上至下:炒品沸水提后加生品水浸 、炒品沸水提 、炒品水煎提)
　　实验表明 ,叠加图谱显示各成分峰分离效果较
好 ,可清晰看出各样品的特征峰及不同样品间指纹
峰的变化 。分析二组图谱可见存在相同的变化规
律 ,将图谱中峰高大于 100 mAU且不同样品间具有
明显区别的色谱峰整理记录 ,结果见表 1。
表 1　 莱菔子供试样品 HPLC图谱色谱峰出峰时间
峰
编
号
生品水提组 /min
生品水
煎提
生品沸
水提
生品沸水提后
加生品水浸
炒品水提组 /min
炒品水
煎提
炒品沸
水提
炒品沸水提后
加生品水浸
1 2.331 — 2.308 — — 2.310
2 — 4.859 — 4.857 4.783 —
3 — — 6.537 — — 6.465
4
8.359
(A209) — — — — —
5 9.097 — — — — —
6 13.488 — — — — —
7 18.126 — 18.154 — — —
8
22.844
(C3) — 22.801 — — 22.812
　　表 1结果表明 , 2号峰存在于生品沸水提 、炒品
水煎提和炒品沸水提样品中 ,在生 、炒品沸水提样品
提取液中加入少量生莱菔子粉末 (40 ±2)℃温浸
12h, 2号峰消失 ,产生了 3号和 8号(C3)两个色谱
峰。
由 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A
版”分析相关 HPLC图谱 ,可以得到以下结果 ,见表
2、表 3,图谱匹配结果见图 3、图 4。
图 3　莱菔子生品沸水提 、炒品水煎提 、炒品
沸水提样品 HPLC图谱匹配结果
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表 2　 图 3三种样品 HPLC图谱间相似度
样品名 生品沸水提 炒品水煎提 炒品沸水提 对照 HPLC图谱
生品沸水提 1.000 0.959 0.964 0.984
炒品水煎提 0.959 1.000 0.997 0.994
炒品沸水提 0.964 0.997 1.000 0.996
对照 HPLC
图谱 0.984 0.994 0.996 1.000
图 4　莱菔子生 、炒品沸水提后加生品
温浸样品 HPLC图谱匹配结果
表 3　 图 4两种样品 HPLC图谱间相似度
样　品 生品沸水提后加生品温浸
炒品沸水提后
加生品温浸
对照 HPLC
图谱
生品沸水提加生品温浸 1.000 0.901 0.974
炒品沸水提加生品温浸 0.901 1.000 0.976
对照 HPLC图谱 0.976 0.974 1.000
　　图 3、表 2表明:莱菔子生 、炒品省略水温浸过
程 ,直接用沸水提取与炒莱菔子水煎样品间有高度
相似性(相似度 >0.95),三者图谱中均有 2号峰 ,
生品经过温浸过程能使 2号峰消失 ,产生 3与 8号
峰 ,炒制 、沸水提取则 2号峰不消失 ,提示生莱菔子
在温浸过程中可能存有某类成分的酶解反应 ,经沸
水提或炒制加热有可能破坏分解酶的活性而抑制这
一反应的进行。
图 4、表 3表明:莱菔子生 、炒品沸水提取后 ,再
加入定量生品粉末温浸 ,所得样品 HPLC图谱高度
相似(相似度 >0.90),同样使 2号峰消失 ,并产生 3
号和 8号峰 ,该结果表明在合适温度和酶存在的条
件下 ,有可能使酶解反应发生 ,再次证明 ,生莱菔子
在温浸过程中有酶解反应发生 ,炒制过程可能具有
“杀酶保苷”的作用 ,能抑制该酶解反应的进行 。
2.2　生炒莱菔子量变成分 A209、B221产生机制的
初步研究
A209、B221两新化合物主要存在于生莱菔子
中 ,在对莱菔子生 、炒品成分群的 HPLC指纹图谱研
究过程中 , A209与 B221含量在回流提取中大幅升
高 ,并伴随另一成分 ,暂定名 C3含量的大幅降低 。
见图 5、图 6。
图 5　莱菔子水回流前后样品图谱
(上:回流前　下:回流后)
图 6　莱菔子乙醇回流前后样品
(上:回流前下:回流后)
　　结合 2.1项下莱菔子炮制抑制酶解机制的研究
结果 ,提示莱菔子中苷类成分在温浸过程中发生酶
解反应产生成分 C3, C3在不同溶剂回流条件下进
一步反应得到 A209与 B221,为验证 A209、B221与
C3之间的转化关系 ,进行了如下试验。
2.2.1　A209与 C3转化关系验证样品的制备
取生莱菔子粉末约 2g,精密称定 ,加 50mL水 ,
(40±2)℃温浸 4h,超声提取 20min,抽滤 ,滤液置
250 mL圆底烧瓶中 ,加热回流 ,分别于回流 0 min、
15 min、30min、60 min、90 min时取样。
2.2.2　B221与 C3转化关系验证样品的制备
取生莱菔子粉末约 2g,精密称定 ,加 10mL水 ,
(40±2)℃温浸 4h,加入 40 mL无水乙醇 ,超声提
取 20min,抽滤 ,滤液置 250mL圆底烧瓶中 ,水浴加
热回流 ,分别于回流 0h、0.5 h、1.0 h、2.0 h、4.0 h
时取样。
2.2.3　色谱条件的选择
2.2.3.1　A209与 C3转化关系验证色谱条件
PhenomenexC18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色
谱柱;流动相:乙腈 -0.2%醋酸水溶液梯度洗脱:0
min(5∶95), 25min(30∶70);流速为 1 mL/min;进样
量 20 μL,根据 A209与 C3均有较大吸收确定检测
波长为 240 nm, 样品带宽 4 nm;参比波长为 400
nm,参比带宽 100nm。
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2.2.3.2　B221与 C3转化关系验证色谱条件
PhenomenexC18(4.6 mm×250 mm×5 μm)色
谱柱;流动相:乙腈-水梯度洗脱:0 min(10∶90), 30
min(27∶73);流速为 1 mL/min;进样量 20 μL,根据
B221与 C3均有较大吸收 , 确定检测波长为 244
nm,样品带宽 4 nm;参比波长为 400 nm,参比带宽
100nm。
2.2.3.3　实验结果
将 2.2.1项中制备的样品 ,按 2.2.3项中的色
谱条件进样 ,对各成分峰面积进行统计 , 分别以
A209与 B221的峰面积为 X轴 ,以 C3的峰面积为 Y
轴 ,进行线性回归 ,结果见表 4、表 5。
表 4　 莱菔子中 A209与 C3峰面积比较
化合物 峰面积 /(mAU＊s)
0min 15min 30min 60min 90min
A209 1 353.9 2 068.6 2 405.9 3 378.4 4 017.1
C3 7 892.4 6 645.2 5 544.2 4 064.9 1 769.4
　　表 4结果表明 ,在水回流过程中 ,随 C3的峰面
积的不断降低 , A209的峰面积依次升高 ,二者变化
呈良好的线性相关 ,回归方程为 Y=-2.218 3X+
11 050,相关系数 μ=0.989 2。提示 A209为 C3在
水回流条件下的次生产物 。
表 5　 莱菔子中 B221与 C3峰面积比较
化合物 峰面积 /(mAU＊s)
0h 0.5h 1.0h 2.0h 4.0h
B221 26.4 257.2 305.6 592.7 683.2
C3 203.0 169.3 135.0 77.3 67.9
　　表 5结果表明 ,在乙醇回流过程中 ,随 C3的峰
面积不断降低 , B221的峰面积依次升高 ,二者变化
呈良好的线性相关 ,回归方程为 Y=-4.510 5X+
961.64,相关系数 μ=0.987 0。提示 B221为 C3在
乙醇回流条件下的次生产物。
3　小结与讨论
3.1　莱菔子不同样品成分群 HPLC图谱对比分析
表明 ,其生品沸水提 、炒品水提和沸水提都可产生 2
号峰 。生品经水浸泡 、沸水提 ,或炒品沸水提后再加
生品粉末温浸都会使 2号峰消失 ,同时产生 3号和
8号峰(C3)。提示 2号峰物质在生品中经水温浸或
有生品粉末存在温浸的条件下被分解 ,同时产生 3
号和 8号峰物质 ,莱菔子炒制可将参与这一过程的
酶破坏 ,使 2号物质不被分解 ,当再次给炒品提供反
应需要的酶(加入生品粉末)和适合的条件 (40 ℃
±2 ℃温浸),反应又得以进行。说明莱菔子炒制过
程中可能存有 “杀酶保苷 ”机制。
3.2　莱菔子中新成分 A209、B221与 C3的峰面积
变化分别在水 、乙醇加热回流条件下呈线性增减关
系 ,提示 C3为莱菔子中苷类成分在适宜条件下的
酶解产物 ,从另一个侧面证明了莱菔子炒制中 “杀
酶保苷”机制的存在 ,参照硫代葡萄糖苷研究的相
关文献[ 4]及 A209与 B221的结构 ,分析此苷类可能
为硫代葡萄糖苷类成分 。
3.3　HPLC图谱相似度分析显示 ,莱菔子炒制未对
所含成分群产生直接影响 ,而是通过影响煎煮过程
造成了成分的差别 ,其中水浸过程是关键因素。
3.4　莱菔子中成分 C3的单体分离 ,结构鉴定以及
与 A209、B221转化关系的进一步验证试验正在进
行中 。
参考文献:
[ 1] 　龚千锋.中药炮制学 [ M].北京:中国中医药出版社 , 2005:
109.
[ 2] 　张　欣 ,王爱武 ,宿廷敏 ,等.莱菔子生制品挥发性成分 GC-MS
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2005:12.
[ 4] 　李　鲜 ,陈昆松 ,张明方 ,等.十字花科植物中硫代葡萄糖苷的
研究进展 [ J] .园艺学报 , 2006, 33(3):675-679.
《实用中西医结合临床 》征订 、征稿
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