全 文 ：微波法和法多索法提取拳卷地钱中总黄酮的研究
童　星 , 　陈晓青＊ , 　蒋新宇 , 　张莹莹 , 　孙　娟
(中南大学化学化工学院 ,湖南 长沙 410083)
收稿日期:2007-04-12
作者简介:童　星(1982～ ),男 ,硕士研究生 ,研究方向:天然产物化学 ,电话:0731-8830833, E-mail:wal 1314@ 163.com。
＊通讯作者:陈晓青(1965～ ),女 ,教授 ,研究方向:天然产物化学 , E-mail:xqchen@mail.csu.edu.cn。
关键词:拳卷地钱;总黄酮;微波;法多索;正交试验
中图分类号:R284.2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2008)04-附 1-02
　　拳卷地钱(MarchantiaConvoluta), 属苔藓类植物 , 广泛
分布于各地 , 多生于阴暗潮湿的地方 , 是我国比较有名的传
统中药材 , 主要用于治疗皮肤表皮肿胀 , 肝炎等 ,民间还用做
退烧剂。广西 、贵州等地有大量野生地钱植物资源 , 其中拳
卷地钱为我国独产。 拳卷地钱的化学成分主要包括黄酮类
化合物 、三萜类化合物以及类固醇类物质 [ 1] 。其中黄酮类化
合物的提取方法研究较少 [ 2] , 本研究用新颖的微波提取和法
多索溶剂提取拳卷地钱中黄酮类化合物 ,并与传统溶剂提取
比较 , 旨在获得最佳提取效果。
微波(Microwave)是一种波长在 1 ～ 0.001 m、频率在 0.3
～ 300GHz的电磁波。微波提取中药有效成分具有选择性
好 、提高纯度和高效快速的特点 [ 3] 。本实验采用微波法提取
拳卷地钱中的总黄酮 ,重点考察了浸泡时间 、溶剂浓度 、料液
比 、辐射时间等因素对提取效果的影响 , 筛选出了微波提取
总黄酮的最佳工艺。法多索溶剂是一类新的溶剂系统 , 主要
由 1, 1, 1, 2———四氟乙烷组成 , 是一种无色易挥发的液体 ,
有微芳香味 , 无毒不燃 ,在低压下是一种良好的提取溶剂 , 具
有方便 , 无毒 ,易分离 , 易回收等优点 , 国内外已经开始用于
天然药物的提取以及食品开发 [ 3-5] 。本试验利用自制的法多
索提取器进行拳卷地钱中总黄酮的提取初步研究。
1　实验部分
1.1　实验材料　钱卷地钱干燥品 , 广西中医学院提供。经
广西中医学院周子静教授鉴定为拳卷地钱。芦丁对照品由
中国药品生物制品检定所提供;法多索溶剂 , w=99.9%, 由
增城华雪公司提供;氢氧化钾 , AR;三氯化铁 , AR;亚硝酸
钠 , AR;乙醇 , w=95%, AR。
1.2　实验仪器和设备　SanleWP650型微波炉;FW100型
高速万能粉碎机;R-201旋转蒸发仪;TGL-16GA离心机;FD-
TP40 756MC棱光紫外可见分光光度计 , 自制的法多索提取
器(图 1)。该装置参考英国 AdvancedPhytonicsLtd的法多
索提取器自制而成 ,高 12 cm, 外径 2.5 cm, 内径 1.5 cm, 最
多能提取 10g左右的样品。
1.3　总黄酮吸光度的测定　标准曲线的绘制:用芦丁标准
品配制 p(总黄酮)=40 μg/mL的总黄酮 , 用 65%乙醇溶液
定容 ,分别吸取总黄酮乙醇溶液 0、 2.0、3.0、4.0、 5.0、 6.0、
7.0 mL, 置于 25 mL比色管中 ,加入 0.50 mol/LNaNO2溶液
1.00mL, 5 min后 , 加入 0.30 mol/LAlCl3溶液 1.00 mL, 摇
匀 ,加入 1.00mol/LNaOH溶液 5.00 mL, 60%乙醇定容至刻
度 ,以试剂空白作参比 , 用 2 cm比色皿于波长 525 nm处测
其吸光度 ,以吸光度(A)为纵坐标 , 以芦丁标准溶液的浓度
(μg/mL)为横坐标绘制校准曲线 , 标准曲线方程为 Y=
0.037 1X-0.027 8, r=0.999 8, 线性范围为 1.6 ～ 16 μg/
mL。
图 1　法多索提取器
　　拳卷地钱提取液中总黄酮含量测定:从所得的拳卷地钱
100 mL提取液中取 10mL,置于 100mL比色管中 ,按上述方
法测定提取液的吸光度 ,从标准曲线方程可以算出对应的质
量分数 ,并计算出拳卷地钱提取液中总黄酮的含量 , 该测定
方法已被证明准确可靠 [ 6] 。
1.4　溶剂提取法　取拳卷地钱适量 , 用粉碎机粉碎至粗粉
(2 ～ 3 mm)。按照醇提法 [ 7]的最优条件:提取温度 70℃,提
取溶剂为 80%的乙醇 , 料液比(质量∶体积)为 1∶15, 时间
0.5 h,提取次数 3次 ,过滤 ,合并滤液 , 减压蒸馏 , 回收乙醇 ,
浓缩至 100mL,得拳卷地钱总黄酮提取物。
1附
2008年 4月
第 30卷　第 4期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
April2008
Vol.30　No.4
1.5　微波提取法　精确称取 10 g拳卷地钱中加入乙醇溶
液 , 浸泡后放入微波炉(功率为 650 W), 按照一定的辐射时
间进行微波照射 , 滤出溶液 ,再加入提取剂 ,微波照射 , 过滤 ,
合并两次提取液。减压浓缩 , 回收溶剂。用 65%的乙醇定
容到 100 mL, 通过单因素实验 ,我们发现拳卷地钱粗粉在浸
泡 24 h,辐射时间为 100 s, 溶剂浓度为 90%, 料液比为 1∶15
时总黄酮的含量较高。因此确定正交设计中实验因素水平
(见表 1)。
表 1　 因素水平
水平 A浸泡时间 /h
B
辐射时间 /S
C
提取剂浓度 /%
D
料液比(g∶mL)
1 12 90 85 1∶12
2 24 100 90 1∶15
3 36 110 95 1∶18
1.6　法多索溶剂提取法　精密称取 1 g拳卷地钱粉末 , 放
入带滤膜的法多索提取器中 , 加入法多索溶剂 , 室温下反复
振摇 1h,然后将法多索提取器倒置 ,让提取液流入一密闭容
器。回收法多索溶剂。用 65%乙醇溶解提取物 , 过滤 , 连续
提取 3次 ,合并提取物 , 定容到 100 mL, 吸取 1 mL提取液到
25 mL比色管 , 待测。
2　实验结果与讨论
2.1　微波提取最优条件确定　为优化微波提取拳卷地钱中
总黄酮的工艺条件 ,采用正交试验法 ,考察浸泡时间 、溶剂浓
度 、料液比 、辐射时间 4个因素 , 以总黄酮的含量为参考指
标 ,按照 L9(34)正交实验表安排实验 ,微波提取正交实验结
果见表 2和表 3。
表 2　 微波法正交试验及结果
因素
实验号
浸泡时间 /h
A
辐射时间 /s
B
提取剂浓度 /%
C
料液比
D
吸光度
/A
总黄酮提
取率 /%
1 1 1 1 1 0.582 1.644
2 1 2 2 2 0.401 1.156
3 1 3 3 3 0.330 0.906 4
4 2 1 2 3 0.559 1.582
5 2 2 3 1 0.401 1.156
6 2 3 1 2 0.560 1.584
7 3 1 3 2 0.365 1.059
8 3 2 1 3 0.437 1.253
9 3 3 2 1 0.460 1.315
含量
k1 123.5 142.8 149.4 137.2
k2 144.1 118.8 135.2 126.6
k3 120.9 126.8 104.0 124.7
R 23.20 24.00 45.40 12.50
表 3　 微波法正交试验方差分析
方差来源 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A 964.770 2 0.299 19.00
B 895.787 2 0.278 19.00
C 3 221.750 2 1.000 19.00 ＊
D 269.723 2 0.084 19.00
　　由表 2,表 3可知 , 各因素对拳卷地钱中总黄酮提取率的
影响程度依次为 C>A>B>D, 其中提取剂浓度对总黄酮提
取率的影响最大 , 具有显著性的差异 , 料液比的影响最小。
在实验范围内 , 最佳条件为 A2B1C1D1 ,即取拳卷地钱粗粉 10
g, 浸泡 24 h, 用 85%乙醇提取 , 料液比为 1∶12, 微波辐射 90
s。
用以上确定的最佳条件 , 取同一批拳卷地钱粗粉分成 5
份 , 每份 10 g进行微波提取 , 提取率分别为 1.674%、
1.658%、1.682%、1.677%、1.665%,平均提取率为 1.671%,
结果说明此提取条件稳定可行。
2.2　法多索溶剂提取最优条件确定　因实验提取装置所限
制 , 只考察了提取剂用量单因素的影响 , 以总黄酮的提取率
为参考指标。实验结果见表 4。
表 4　 法多索料液比单因素提取实验结果
样品 /g 料液比 /g∶g 吸光度 /A值 浓度 /μg/mL 提取率 /%
1 1∶10 0.109 3.687 0.921 8
1 1∶20 0.112 3.768 0.942 0
1 1∶30 0.116 3.876 0.969 0
　　由表 4可知 , 增大提取剂用量 , 不能有效提高总黄酮的
提取率。考虑到法多索溶剂与黄酮类化合物极性相差较大 ,
是提取率不高的主要原因 ,我们通过改变法多索溶剂极性方
法来验证 , 采用法多索-丙酮为 2∶1的混合溶剂 , 料液比为 1
∶30。总黄酮提取率得到明显改善 ,达到 1.130%。这说明极
性差异较大是法多索提取法对于拳卷地钱中总黄酮提取效
果较差的一个主要原因 ,法多索提取法在提取极性较小的天
然有效成分时如生物碱川芎嗪 [ 4] , 木脂素五味子甲素 [ 5]有比
较好的效果 , 对于极性较大的黄酮类化合物提取不尽如人
意。
2.3　微波提取法 , 法多索溶剂法和溶剂提取法的比较　测
定按照溶剂提取最优条件所得的拳卷地钱提取液的吸光度
值 , 根据标准曲线并计算出拳卷地钱提取液中总黄酮的含
量。将微波提取总黄酮的工艺与法多索溶剂法 、溶剂法提取
总黄酮的工艺进行比较 ,结果见表 5。
2附
2008年 4月
第 30卷　第 4期
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表 5　 微波 , 法多索提取法与溶剂提取法的比较
提取方式 拳卷地钱质量 /g
提取总时
间 /h
提取剂用
量 /mL
提取率
/%
微波提取 10 0.075 240 1.671
溶剂提取 10 1.5 450 1.790
法多索提取 10 3 248 0.972 0
　　由表 5可知 , 微波提取法与溶剂提取法相比大大缩短了
提取时间 , 减少了提取剂用量 , 而产品收率相差不大。可见 ,
微波提取法可以提高生产效率 ,降低成本 ,减少能耗 , 在提取
速率方面有着非常显著的优势。
3　结论
与溶剂提取法相比 ,微波提取技术应用于总黄酮的提取
具有提取速度快 、提取效率高 , 能量消耗低等特点 , 应将其进
行推广。
通过实验找到了微波提取总黄酮的最佳工艺条件∶拳卷
地钱粗粉 10g浸泡 24 h, 用 85%乙醇提取 , 料液比为 1∶12,
微波辐射 90s。
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化学与工业, 2004, (2):69-72.
HPLC测定舒筋定痛片中柚皮苷的含量
才　谦 , 　刘玉强
(辽宁中医药大学药学院 ,辽宁 大连 116600)
收稿日期:2007-05-21
作者简介:才　谦(1972～ ),女 ,副教授 ,从事中药活性成分分离与新药开发研究 ,电话:0411-87586014。
关键词:柚皮苷;舒筋定痛片;HPLC
中图分类号:R927.2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2008)04-附 3-02
　　舒筋定痛片是由骨碎补 、当归 、乳香(醋制)、土鳖虫 、自
然铜(醋制)、硼砂(煅)、红花 、没药(醋制)、大黄等 9味中药
组成 , 具有活血散瘀 , 消肿止痛的功效 , 其中骨碎补补肾强
骨 , 续伤止痛 ,是该制剂的主药之一 ,该制剂原标准中无含量
测定内容 , 为更好地控制该制剂的质量 , 我们采用高效液相
色谱法测定君药骨碎补中柚皮苷的含量 ,报道如下。
1　方法与结果
1.1　仪器与试药　仪器:日本岛津 LC-10A高效液相色谱
仪 , SPD-10A可见紫外检测器。试药与试剂:柚皮苷对照品 ,
批号 110722-200309(中国药品生物制品检定所提供)。自制
舒筋定痛片样品(5份样品编号分别为自制 1, 自制 2, 自制
3,自制 4,自制 5), 市售舒筋定痛片样品(市售 1,市售 2)。
1.2　色谱条件　色谱柱为 DiamonsilTMC18 , 5 μm, 150 mm×
4.6 mm;将 2005年版药典 “骨碎补”项下的流动相应用于本
复方制剂 ,分离效果不好 ,经多次摸索 , 最终确定流动相为甲
醇-0.025 mol/L磷酸溶液(35∶65);检测波长为 283 nm;柱
温:25 ℃;流速:1 mL/min。柚皮苷在此条件下的保留时间
为 21 min左右 , 理论板数 N=2 720,分离度 R=1.5。
1.3　对照品溶液的制备　精密称取在 105 ℃干燥至恒重的
柚皮苷对照品 15 mg, 置 250 mL量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 , 制成每 1 mL含 0.06 mg的溶液 , 作为柚皮苷
对照品溶液。
1.4　试品溶液的制备　取本品 1.5 g, 精密称定 ,加甲醇 30
mL, 加热回流 3h,放冷 , 滤过 ,滤液置 50 mL量瓶中 , 用少量
甲醇分次洗涤容器 ,洗液滤入同一量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,即
得。
1.5　空白试验　取除去骨碎补以外的其它 8味药材 , 按样
品制备方法制成阴性液。 精密吸取供试品溶液 、阴性液各
3附
2008年 4月
第 30卷　第 4期
中 成 药
ChineseTraditionalPatentMedicine
April2008
Vol.30　No.4