全 文 ：反相高效液相色谱法用于
地钱中黄酮类化合物的分离与测定
肖建波 1 , 朱　华1 ,2 , 钟世安1 , 周春山1 , 黄海滨2
(1.中南大学化学化工学院 , 长沙 410083;2.广西中医学院 , 南宁 530001)
摘　要:采用反相高效液相色谱 , 在 RP-C18柱上以乙酸-甲醇-乙腈-磷酸-水为多
元流动相 ,等度洗脱 , 在 30 min内对地钱的黄酮提取物进行分离与测定 , 检测
波长 350 nm , 流速 0.60 mL/min , 采用校准曲线法对实际样品中的芹菜素 、槲皮
素和木犀草素进行定量分析 。结果表明:平均加标回收率 96.79%～ 101.13%,
相对标准偏差 0.66%～ 1.52%。
关键词:地钱;芹菜素;槲皮素;木犀草素;反相高效液相色谱
中图分类号:O657.7　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-0720(2005)04-0017-03
　　地钱(Marchantia Polymorpha L.)又名地衣 ,属
苔藓类植物 , 广泛分布于各地 , 多生于阴暗潮湿
的地方 。我国苔藓植物资源十分丰富 , 已报道的
约有 3000种 , 而药用的不到1.8%, 极少作为正式
药材使用 , 原因是国内对苔藓植物的研究工作做
得较少 , 对苔藓植物的化学成份研究更少 。地钱
的药用始载于《名医别录》 , 《本草纲目》中谓之“石
衣” , 味淡 , 性凉 , 归肝经。有清热利湿 , 解毒敛
疮 , 清心明目之功效 。广西 、贵州有大量野生地钱
植物资源 , 要利用好这些植物资源 , 还需在分类 、
植物化学 、分离提取 、药理药效 、临床等方面广泛进
行研究。
地钱的化学成分主要包括黄酮类化合物 、联苄
类化合物 、香豆素类及萜类化合物等。黄酮类化合
物以芹菜素 、木犀草素 、槲皮素及其甙为主[ 1] 。目
前天然药用植物中黄酮类化合物的测定方法主要
有紫外分光光度法 、铝盐显色分光光度法 、梯度洗
脱反相高效液相色谱法[ 2 ～ 4]等 。地钱中黄酮类化
合物的分离与测定 ,国内外尚未见文献报道。本文
采用反相高效液相色谱法 ,多元混合溶剂作流动
相 ,采用等度洗脱 ,直接对地钱的黄酮提取物进行
分离与测定 ,优化了分离条件 ,并采用校准曲线法
对其中的主要活性成分芹菜素 、槲皮素和木犀草素
进行定量分析 。结果表明该法可用于地钱中黄酮
类化合物的准确分析。
1　实验部分
1.1　仪器和试剂
BT8100 高效液相色谱仪(Biotronic 公司);
BT8200UV检测器;756MC 紫外可见分光光度计 ,
(上海分析仪器厂);旋转蒸发仪 ,(上海申科仪器公
司)。乙醇 、石油醚 、乙酸乙酯等试剂均为 AR级;
硅胶AR级 ,青岛海洋化工厂;甲醇和乙腈为色谱
纯。芹菜素 、槲皮素和木犀草素对照品由中国药品
生物制品检定所提供;药材地钱 ,广西中医学院提
供 ,经广西中医学院周子静教授鉴定为拳卷地钱 。
1.2　对照品和供试品液的制备
1.2.1　对照品溶液的制备　准确称取适量的芹菜
素 、槲皮素及木犀草素对照品 ,加甲醇制成混合对
照品溶液 , 其质量浓度分别为 26.00 、25.00 、30.00
μg/mL。
1.2.2　供试品溶液的制备　称取 20 g 地钱干燥
品 , 粉碎 , 用体积分数80%乙醇 100mL 74 ℃下回
流提取 3 h ,重复 3次 , 过滤 , 合并滤液 , 减压回收
乙醇 , 浓缩至约 100 mL , 再用 50 mL石油醚萃取 3
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第 24 卷第 4期
2005 年 4月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analy sis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.24.No.42005-4
收稿日期:2004-04-12;修订日期:2004-06-07
基金项目:桂科攻(0235022-1B), 桂科回(0009004)
作者简介:肖建波(1979-), 男 , 硕士研究生
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2005.0082
次 , 50 mL乙酸乙酯萃取 3次 , 萃余液用体积分数
60%甲醇定容至 100 mL , 即得地钱黄酮提取物的
供试品溶液。
1.3　色谱条件
色谱柱为 Kromasil C18柱(250×4.6 mm i.d , 5
μm , 汉邦色谱科技公司);流动相为 V(乙酸)∶V
(甲醇)∶V(乙腈)∶V(磷酸)∶V(水)=10∶200∶100∶
10∶200;流速 0.60 mL/min , 检测波长 350 nm;柱温
25 ℃;进样量 6.0 μL。
2　结果与讨论
2.1　色谱分离
用甲醇分别配制芹菜素 、槲皮素和木犀草素对
照品溶液 ,进行紫外扫描 ,由芹菜素 、槲皮素和木犀
草素的紫外扫描图谱可知:测定波长可选 270 nm
或350 nm 。由于在 350 nm , 各个成分的吸收最强 ,
故使用波长350 nm 。
本文发现流动相中甲醇和乙酸用量对被分析
物质保留时间的影响较大 , 随流动相中甲醇量的
增大 , 各标准物质保留时间减少 , 而少量乙酸即
能很大地改变各物质的保留时间 。
在1.3拟定的色谱条件下 ,得到芹菜素 、槲皮
素及木犀草素的标准色谱图(图 1(b))以及地钱黄
酮提取物的色谱图(图 1(a))。由图 1(a)可见 ,样
品中芹菜素 、槲皮素 、木犀草素与相邻组分的分离
度 RS>1.5 , 达到基线分离。
2.2　校准曲线与检出限
分别量取 1.2.1混合对照品溶液适量 , 加甲
醇稀释制成标准系列进样测定 。以标准溶液质量
浓度ρ(mg/L)对色谱峰面积 Y 进行线性回归。结
果表明:各组分在各自浓度范围内线性关系良好 。
回归方程 、线性范围 、相关系数及检出限(S/N=3)
见表 1。
图 1　样品高效液相色谱图
Fig.1　Chromatograms of samples
(a)地钱药材样品谱图;(b)标准色谱图
1.槲皮素;2.木犀草素;3.芹菜素
表 1　校准曲线及检出限
Tab.1　Calibration curve and detection limits
对照品种类 线性范围ρ/(mg/ L) 回归方程 相关系数 r 检出限 m/μg
芹菜素 0.4～ 30.0 Y=-1127+7484ρ 0.9997 0.2
槲皮素 1.0～ 20.4 Y=-1204+4212.5ρ 0.9992 0.4
木犀草素 0.6～ 26.8 Y=-2986+13792ρ 0.9995 0.2
2.3　方法的精密度与重复性
在1.3色谱条件下 , 对同一对照品溶液重复
进样 5次 ,测得峰面积的 RSD为芹菜素 2.5%, 槲
皮素 0.33%,木犀草素 1.21%(n =5)。并对供试
品溶液平行测定 3次 ,分别进样 6.0 μL , 同时取混
合对照品溶液 6.0 μL 进行测定 , 按外标法测定其
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2005年 4 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.24.No.42005-4
含量并计算 RSD , 芹菜素为 2.8%, 槲皮素为
2.9%, 木犀草素为 3.6%。
2.4　方法回收率
取供试品溶液 5.00 mL 3份 ,以高中低三浓度
水平各加入一定量的芹菜素 、槲皮素和木犀草素对
照品 ,分别进样 6.0 μL ,同时取相应浓度的对照品
溶液 6.0μL 进行测定 ,按外标法测定其量 ,计算加
标回收率和 RSD ,结果见表 2。平均加标回收率芹
菜素为 101.13% (RSD =1.5%), 槲 皮素为
97.52%(RSD =0.66%), 木犀草素为 96.79%
(RSD=0.89%)。结果表明该法可用于地钱黄酮
提取物的准确分析 。
2.5　实际样品的定量分析
按 2.2.2供试品溶液的制备方法制备供试品
溶液 ,在上述色谱条件下 ,分别进样6.0μL ,同时取
相应浓度的对照品溶液 6.0μL 进样测定 , 按外标
法测定 , 结果见表 3。
表 2　加标回收试验结果(n=9)
Tab.2　Recoveries of samples(n=9)
样品种类 原测定值 m/μg 加入量 m/μg 测得量 m/μg 回收率/ % RSD/ %
芹菜素 4.91 1.04 2.08 4.16 5.92 7.21 9.21 98.72 103.19 101.48 1.5
木犀草素 3.58 1.20 2.40 4.80 4.66 5.85 8.09 97.53 98.46 96.57 0.66
槲皮素 8.57 1.00 2.00 4.00 9.18 10.37 12.11 95.92 98.10 96.34 0.89
表 3　样品测定结果
Tab.3　Analytical results of samples
样品种类 测定值 w/ % 平均值 w/ % RSD/ %
芹菜素 0.0045 0.0048 0.0049 0.0047 2.8
木犀草素 0.0034 0.0036 0.0036 0.0035 2.8
槲皮素 0.0077 0.0085 0.0082 0.0081 3.6
参考文献
[ 1] 　Kheywal K S.Herhahung.1985 , 24(1):23
[ 2] 　张　丹 , 蒋心惠.分析化学 , 2003 , 31(4):459
[ 3] 　李梅青 , 盛　旋 , 邵学广.分析化学 , 2003 , 31(2):
178
[ 4] 　马翠英 , 戴宝成 , 林瑞超.药物分析杂志 , 2003 , 23
(2):83
Separation and determination of active compo-
nents of marchantia polymorpha flavonoids extract
by RP-HPLC XIAO Jian-bo＊ , ZHU Hua , ZHONG
Shi-an , ZHOU Chun-shan (Central South University ,
Changsha 410083), ZHU Hua and HUANG Hai-bin
(GuangXi Chinese Medical University , Nanning
530001), Fenxi Shiyanshi , 2005 , 24(4):17 ～ 19
Abstract:A method for the separation and determination
of Marchantia Polymorpha flavonoid extract by reversed-
phase high performance liquid chromatography (RP-
HPLC)was proposed.The components can be separated
through a C18 analytical column with acetic acid-
methanol-acetonitrile-phosphoric acid-water as mobile
phase in 30min.Meletin , cyanidenon and versulin were
quantitated by calibration curve method at detection
wavelength of 350 nm.The result shows that the average
recovery is 96.79%～ 101.13%, RSD is 0.66% ～
1.5%.
Keywords: Marchantia Polymorpha; Versulin;
Cyanidenon;Meletin;Reversed phase high performance
liquid chromatography
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