全 文 ：第 21卷 ,第 2期 光　谱　实　验　室 Vo l . 2 1 , No . 2
2 0 0 4年 3月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory March , 2 0 0 4
地钱中总黄酮含量的测定①
① 广西省科技攻关项目 ,编号:桂科攻 0235022-1B
② 联系人 ,电话: ( 0731) 8879672(办 ) ; E-mai l: newfou rtharmy@ 163. com
作者简介:朱华 ( 1960— ) ,男 ,广西南宁市人 ,中南大学应用化学在读博士 ,广西中医学院副教授 ,长期从事医药方面的研究。
收稿日期: 2003-11-06
朱 华a ,b　肖建波a　钟世安a　周春山② a　任秀莲a
a (中南大学化学化工学院　长沙市岳麓山　 410083)
b (广西中医学院　南宁市　 530001)
摘　　要
　　采用改进的铝盐显色分光光度法 ,在 525nm 波长下 , N aNO2-AlCl3-NaO H为显色剂 ,常温显色 ,
15min内测定地钱黄酮提取物中总黄酮的含量。在 40— 400μg /mL范围内线性关系良好 ,回归方程为 A=
0. 0300C- 0. 0153, RSD= 0. 16% ,相关系数为 0. 9997,加标回收率在 97. 61%— 101. 59%范围内。本法用
于地钱中总黄酮含量的测定 ,方法准确、可靠 ,结果令人满意。
关 键 词　地钱 ,总黄酮 ,紫外分光光度法。
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: A　　　文章编号: 1004-8138( 2004) 02-0373-04
1　前言
地钱 (Marchant ia Polymorpha )又名地衣 ,广泛分布于各地 ,多生长于阴暗潮湿的地方。药用始
载于《名医别录》 ,《本草纲目》中谓之“石衣” ,味淡 ,性凉 ,归肝经。清热利湿 ,解毒敛疮 [1 ]。地钱化学
成分主要包括黄酮类、联苄类、香豆素类及几萜类化合物等 [2 ]。地钱中黄酮类化合物以芹菜素、木犀
草素、槲皮素及其甙为主 [ 2]。目前天然药用植物中黄酮类化合物测定方法主要有紫外可见分光光度
法 [3 ]、高效液相色谱法 [4 ]、薄层色谱法 [5— 7 ]等。国内外文献中关于地钱中总黄酮的测定方法尚未见
报道 ,本文采用改进的铝盐显色分光光度法 ,线性关系良好 ,加标回收率在 97. 61%— 101. 59% ,平
均加标回收率为 99. 28% ,可作为地钱总黄酮含量的测定方法。
2　实验部分
2. 1　仪器与试剂
756型紫外可见分光光度计 (上海精密仪器有限公司 ) ; CQ-6型超声波发生器 (江苏昆山超声
仪器厂 ) ; R-201型旋转蒸发器 (上海申科公司 )。
芦丁对照品 (纯度 99. 2% ,中国药品生物制品检定所 ) ;地钱干燥样品 (广西中医学院 ) ;甲醇、
乙醇、石油醚、乙酸乙酯等试剂均为分析纯 ;硅胶 G(青岛海洋化工厂 ,分析纯 ) ;实验用水为蒸馏水。
2. 2　地钱中黄酮类化合物的提取和纯化
准确称取地钱干燥品 170g , 80%乙醇渗浸提取 4天 ,过滤 ,回收乙醇 ,蒸至约 100mL,用 50m L
石油醚萃取 3次 , 50mL乙酸乙酯萃取 3次 ,萃余液拌入硅胶 ,蒸干 ,干法装柱 , 1L甲醇洗脱 ,洗脱液
浓缩得地钱的黄酮提取物 100mg。
2. 3　最大吸收波长的选择
配制 40μg /mL芦丁乙醇溶液 250mL准确移取 5. 00mL于 25mL容量瓶中 ,加入 0. 50mol /L
NaNO2溶液 1. 00mL,摇匀 , 5min后 ,加入 0. 30mol /L AlCl3溶液 1. 00mL,摇匀 ,加入 1. 00mol /L
NaOH溶液 5. 00mL,用 60%乙醇水溶液定容至刻度 ,用 1cm比色皿在波长 400— 700nm区间扫
描 ,确定最大吸收波长为 525nm。
2. 4　标准曲线绘制
准确移取 40. 00μg /m L芦丁标准乙醇溶液 0、 2. 00、 3. 00、 4. 00、 5. 00、 6. 00、 7. 00、 8. 00、 9. 00、
10. 00、 11. 00、 12. 00、 13. 00mL,分别置于 25. 00m L容量瓶中 ,加入 0. 50mol /L NaNO2溶液
1. 00m L,摇匀 , 5min后 ,加入 0. 30mol /L AlCl3溶液 1. 00m L,摇匀 ,加入 1. 00mol /L NaOH溶液
5. 00m L, 60%乙醇水溶液定容至刻度 ,配制成系列芦丁乙醇标准溶液。以 60%乙醇作参比 ,用 1cm
比色皿在波长 525nm处测其吸光度。
3　结果与讨论
3. 1　吸收曲线
芦丁标样显色后扫描曲线如图 1所示 ;地钱黄酮提取物显色后扫描曲线如图 2所示。
图 1　芦丁标样显色后扫描曲线 图 2　地钱黄酮提取物显色后扫描曲线
黄酮类化合物在紫外区 ( 200— 300nm, 300— 400nm )有两个主要吸收带 ,而在 400nm以上几无吸
收。地钱黄酮提取物的 60%乙醇水溶液直接在 400— 700nm之间扫描 ,几乎没有吸收峰 ,而地钱的
黄酮提取物显色后扫描曲线和芦丁标样显色后扫描曲线峰形相似 ,都有 3个大的吸收峰 ( 487nm、
525nm、 622nm) ,在 525nm处吸收最大 ,且峰形对称 ,故选择λ= 525nm为测定波长。芦丁标准液显
色后扫描曲线峰形比地钱黄酮提取物显色后扫描曲线更锐一些 ,可能由于芦丁标样含杂质较少。
3. 2　线性范围的确定
在相同体积下不同浓度的芦丁标准显色液的吸光度见表 1。
表 1　芦丁显色液的测定数据
芦丁浓度 (μg /m L) 40 80 120 200 280 360 400 440 480 520
吸光度 0. 018 0. 046 0. 074 0. 163 0. 197 0. 254 0. 285 0. 294 0. 294 0. 294
374 光谱实验室 第 21卷
　　从表 1的数据可知 ,当显色液中芦丁乙醇标准浓度超过 400μg /mL时 ,再增加芦丁浓度 ,显色
液的吸光度几乎无变化 ,故本方法选用较佳的线性范围是显色液中芦丁标准浓度在 40—
400μg /m L之间。
3. 3　校准曲线的绘制与回归方程
据所测数据 ,以吸光度为纵坐标 ,以显色液中芦丁乙醇标准溶液的浓度 (μg /m L)为横坐标 ,绘
制校准曲线 ,如图 3所示。用最小二乘法进行回归 ,得到吸光度值 A与显色液中芦丁乙醇标准溶液
的浓度 C (μg /mL)的回归方程: A= - 0. 0153+ 0. 03003C ,回归系数 r= 0. 9997, RSD为 0. 16% 。
图 3　校准曲线 图 4　显色液的稳定性曲线
3. 4　显色液的稳定性
由图 4可知 ,显色后显色液在 15min内稳定 , 20min后显色液吸光度开始下降 ,在空气中 ,且强
碱性条件下 (本方法显色液的 pH值为 12. 89)黄酮类化合物很易被氧化 ,随时间延长吸光度下降严
重 ,故最佳测定时间是显色后 15min内完成。
3. 5　地钱总黄酮含量的测定
　　准确称取地钱的黄酮提取物 0. 0010g ,用 60%
乙醇水溶液超声溶解 ,并定容至 50m L,然后移取
该溶液 3mL,共 5份测定地钱总黄鲷含量的结果
见表 2。
从表 2可知 ,本方法测定地钱总黄酮含量相对
标准偏差 1. 13% ,达到一般分光光度法的精密度
要求 ,可以作为地钱总黄酮含量的测定方法。
表 2　地钱总黄酮含量测定结果 (μg)
测定结果 平均值 相对误差 RSD(% )
47. 452 - 0. 0198
48. 772 0. 0132
47. 892 48. 043 - 0. 0088 1. 13
47. 768 0. 0131
48. 332 0. 0018
3. 6　加标回收试验
　　准确移取配制的地钱黄酮提取物
待测溶液 3. 00mL 4份于 25mL容量
瓶中 ,分别加入 40μg /m L芦丁乙醇标
准溶液 1. 00mL、 2. 00mL、 3. 00mL、
4. 00m L,按 2. 4法操作 ,测定总黄酮
含量 ,计算加标回收率。结果见表 3。
表 3　加标回收试验 (μg)
测得量 加标量 加标测得量 回收率 (% ) 平均回收率 (% )
48. 04 40 87. 082 97. 61
48. 04 80 127. 736 99. 62
48. 04 120 169. 948 101. 59
48. 04 160 206. 264 98. 89
99. 28
从表 3可见 ,总黄酮含量在线性范围 ( 40— 400μg /mL)之内 ,回收率在 97. 61%— 101. 59%之
间 ,平均回收率达 99. 28% ,本法可作为地钱总黄酮含量的测定。
375第 2期 朱 华等:地钱中总黄酮含量的测定
参考文献
[1 ]谢宗万 ,余有芩 .全国中草药名鉴 [M ] .北京:人民出版社 , 1996. 34.
[2 ]刘吉开 ,陈陇梅 ,吴大刚等 .苔藓植物活性成分研究 [ J ].化学通报 , 1993, (2): 1— 5.
[3 ]魏循 .马齿苋总黄酮含量的测定 [ J] .光谱实验室 , 2003, 20( 1): 128— 129.
[4 ]李梅青 ,盛旋 .反相高效液相色谱法用于葛根黄酮提取物的分离与主要活性成分的测定 [ J] .分析化学 , 2003, 31( 2): 178— 180.
[5 ]鲁建江 .微波辅助测定黄芪中总黄酮和多糖的含量 [ J ].中成药 , 2003, 25(3): 246— 247.
[6 ]刘金旗 .菊花叶黄酮类化合物的实验分析 [ J ].中草药 , 2002, 9( 4): 611— 612.
[ 7 ] Markh am K R, Porter L J. Flavonoids of th e Liverwo rt March antia Cyclic Bis ( Biben zyls ) f rom th e German Liv erw ort
March antia Polymorpha [ J] . Phytochemist ry, 1990, 29( 5): 1577— 1584.
Determination of Flavonoids inMarchantia Poymorpha
ZHU Hua
a ,b　 XIAO Jian-Boa　 ZHON G Shi-Ana　 ZHO U Chun-Shana　 REN Xiu-Liana
a(Col leg e of Chemistr y and Chem ical Engineerin g ,Central South University ,Changsh a 410083, P. R. China)
b( Guang xi Chinese Medical Un iversity, Nannin g 530001, P. R.China )
Abstract
The f lav onoids in Marchantia poymorph were determined by ult rav iolet spect ropho tometry at
525nm. The co rrelation coefficient of the stand curv e is 0. 9997 and the relativ e standa rd deviation
is 0. 16% . Beer s law is obeyed in the range of 40— 400μg /mL. The recoveries are in the range of
97. 61%— 101. 59% . The method w as used to determine the f lav onoids in Marchantia polymorpha
w ith sa tisfacto ry resul ts.
Key words　Marchantia Poymorpha , Flavonoids, UV Spect roph tometry.
(上接 368页 ) 美国化学文摘 ( CA)选登本刊论文的最近情况
序号 作　者　姓　名 论　文　题　目 《光谱实验室》发表的年、卷 (期 )、页 CA选登的卷 (期 )、编号
208
杨孝容曹秋娥 丁中涛朱洪友李祖碧 5-( 4-氯苯基偶氮 )-8-苯磺酰氨基喹啉与钴 (Ⅱ )的显色反应及其应用 2002, 19( 3) , 373- 376 137( 22): 332483d
209 包玉敏付戈妍 齐建平 毛细管电色谱中固定相的选择以及固定相粒度对柱效的影响 2002, 19( 4) , 470- 473 137( 22): 332570e
210
李政军钟志光 林华山
黄　伟 傅里叶红外光谱法直接测定丙二醇含量 2002, 19( 4) , 448- 450 137( 22): 332581j
211 粟　智 M ATL AB图形技术在物质结构教学中的应用 2002, 19( 2) , 165- 170 137( 23): 337391g
212
何宏山刘　勇 林岩心
黄理耀 尾式铁 (Ⅲ )卟啉的合成及其光谱性质研究 2002, 19( 2) , 148- 152 137( 24): 361818x
213 程德翔 光谱标准物质标准值的应用不确定度 2002, 19( 5) , 647- 649 137( 25): 379290d
214 杨景广司卫东 翁永和 富氧空气 -乙炔火焰原子吸收光谱法测定钨 2002, 19( 5) , 596- 598 137( 26): 379377h
215 蔡文联何　红 刘佳铭 聚丙烯酸钠增敏抑制高碘酸钠氧化夜蓝褪色光度法测定痕量锡 2002, 19( 5) , 614- 616 137( 26): 379378p
216 何纯莲任凤莲 陈　蓉 过氧化氢氧化溴邻苯三酚红催化光度法测定痕量钴 2002, 19( 5) , 687- 690 137( 26): 379379q
217
屈元雨欧阳叙龙戴云信 卡尔曼滤波紫外光度法同时测定酱油、食醋中的山梨酸和苯甲酸 2002, 19( 2) , 186- 188 137( 26): 383935k
218
吴　辉吴伟端 赵　煌
吴志华刘　洋 机械力化学改性硅酸盐矿物的 FTIR研究 2002, 19( 5) , 573- 575 137( 26): 388047g
376 光谱实验室 第 21卷