全 文 ：三籽两型豆总黄酮·氨基酸含量测定
姜明华1 , 徐凌川2 , 迟永利2 , 刘玉红2　(1.烟台职业学院化工与环境系 ,山东烟台 264001;2.山东中医药大学, 山东济南 250014)
摘要　测定了泰山自然生长的野生三籽两型豆(Amphicarpaea edgeworthii Benth.)中总黄酮及氨基酸含量。结果表明 ,三籽两型豆总黄酮
含量为 0.025 19%;共测出 18种氨基酸 ,氨基酸总量 214.9mg/ g ,含量最高的为谷氨酸 38.0 mg/ g , 人体必需氨基酸占氨基酸总量的
35%。三籽两型豆有较高的药用和营养价值 ,是一种是比较理想的功能食品新资源。
关键词　三籽两型豆;总黄酮;氨基酸;含量测定;新资源
中图分类号　Q946　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2007)07-01899-02
Determination of Total Flavones and Amino Acid Content in Amphicarpaea Edgeworthii Benth.
JIANGMing-hua et al　(Department of Chemical Industry and Environment , Yantai Vocational College , Yantai , Shandong 264001)
Abstract　The total flavones and amino acids content in seeds of Amphicarpaea edgeworthii Benth.grown naturally in Taishan mountainwas determined.
The results showed that the total flavones was 0.025 19%, and contained 18 kinds of amino acids , total amino acids were 21.49%, in which glutamic
acid content was the highest(38.0 mg/ g)and the 7 kinds of the essential amino acids were 35% of the total amino acid.The seed of A.edgeworthii
Benth.has higher medicine value and nutrition value , and it is a kind of good new resource of functional food.
Key words　Amphicarpaea edgeworthii Benth.;Total flavones;Amino acid;Determination;New resource
　　三籽两型豆为蝶形花科两型豆属植物 Amphicarpaea
edgeworthii Benth.的种子 ,主要分布于河北 、山东 、山西 、陕西 、
江苏 、安徽等省[ 1] 。据记载 ,三籽两型豆种子含有异黄酮类
化合物 ,具有抗炎 、降脂 、抗氧化等功能[ 2-4] ,但未见其黄酮
类成分含量测定的报道。该植物在山东省泰山 、鲁山 、蒙山
等山区均有分布 ,资源较丰富 。10月底采收地下种子煮后食
用 ,香甜可口 ,耐人回味 ,但其营养成分如何 ,至今也未见报
道。为此 ,笔者对三籽两型豆干粉的总黄酮含量和氨基酸成
分进行分析 ,为三籽两型豆的进一步开发提供依据 。
1　材料与方法
植物材料为泰山自然生长的野生三籽两型豆地下种子 ,
去掉外种皮 ,烘干 ,粉碎。供试仪器为 UNICO-UV-2102PC 型
紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司);日立 835-50型
氨基酸自动分析仪。供试试剂为芦丁对照品(中国药品生物
制品检定所);三氯化铝 、乙醇 、石油醚均为分析纯 。
2　结果与分析
2.1　总黄酮测定[ 5]
2.1.1　对照品溶液的制备。取芦丁对照品 10 mg ,用 80%乙
醇溶解 ,转于 25ml量瓶 ,定容至刻度 ,即得对照品溶液。
2.1.2　样品溶液的制备。分别取粉碎成粗粉的三籽两型豆
2.00g ,加石油醚 60ml ,加热回流 4 h ,以去除脂溶性成分 ,滤
过 ,药渣挥干溶剂 ,加 80%乙醇 50ml , 85 ℃提取 2 h ,共 2次 ,
过滤 ,滤液合并 ,转于 250 ml量瓶 ,用 80%乙醇定容至刻度 ,
即得样品溶液。
2.1.3　测定波长的选择。准确量取芦丁对照品溶液 0.8ml、
样品溶液适量 ,转于 10ml量瓶 ,加 10%AlCl3 溶液(80%乙醇
配制)1ml ,用 80%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,室温放置 15 min。
以 80%乙醇溶液作空白对照 ,于 200 ～ 760 nm 下进行扫描。
结果表明 ,芦丁对照品溶液在 415 nm处有最大吸收峰 ,三籽
两型豆的样品溶液在 415nm处均有不同程度的吸收 ,故选择
415nm为测定波长。
2.1.4　标准曲线的制备。分别量取芦丁对照品溶液 0.1、
作者简介　姜明华(1960-),女 ,山东烟台人 ,副教授 ,从事食品资源研
究与开发、药用真菌分类与鉴定。
收稿日期　2006-12-11
0.2、0.4、0.8、1、2ml ,转于 10ml量瓶 ,加 10%AlCl3 溶液 1ml ,用
80%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,室温放置 15min。以 80%乙醇溶液
作空白对照 ,在 415nm处测定吸光度 ,以吸光度(A)对浓度(C)
作图 ,绘制标准曲线 ,得回归方程:C=0.035 5 A-0.000 4 , r=
0.9999。结果表明 ,芦丁的吸光度在 0.1317～2.4031范围A对
C呈良好的线性关系。用外标两点法定量。
2.1.5　样品中总黄酮的测定 。准确量取样品溶液 150ml ,蒸
干 ,用 80%乙醇转于 10ml量瓶 ,加 10%AlCl3 溶液 1 ml ,用
80%乙醇定容至刻度 ,摇匀 ,室温放置 15min 。以 80%乙醇溶
液为空白对照 ,在 415 nm处测定 A 。每个样品测定 3次 ,取
平均值 ,由外标两点法计算得到样品中总黄酮含量为
0.02519%。
2.1.6　精密度试验。取同一样品液 ,依“2.1.5”中方法测定 5
次 ,计算样品中总黄酮含量 ,其 RSD 为 1.35%。说明仪器精
密度良好 ,结果准确可靠。
2.1.7重现性试验。取同一样品 5份 ,各 2.00 g ,依“2.1.5”中
方法提取测定 ,每份测定 3次 ,取平均值 ,得 5份样品的 RSD
为 2.38%。说明该方法重现性好。
2.1.8　稳定性试验。对同一样品液 ,依“2.1.5”中方法分别在
10、20、40、60、80、100、120min时测定 A ,结果表明 ,样品在 10～
120min内 A稳定 ,RSD为 1.74%。说明该方法稳定性好。
2.2　氨基酸测定
2.2.1　样品的制备 。称取样品 35.0mg , 加入 6mol/L盐酸
15ml ,抽真空封口。在 110 ℃条件下水解 22h 。过滤 ,定容至
50ml。取 1 ml滤液在小于 40 ℃条件下减压蒸干。用 0.02
mol/L盐酸定容至 1ml 。得上机分析的待测液。
2.2.2　检测条件 。分离柱 4 mmID×150 mm ,离子交换树脂
2619#,除氨柱 4mmID×150 mm ,柱温 53 ℃,茚三酮流速 0.3
ml/min , 缓冲液(用柠檬酸 、柠檬酸钠 、氯化钠配成 pH值 3.3 、
pH值 4.3和 pH 值 4.9的缓冲溶液)流速 0.225ml/min ,波长
为 570、460 nm。
2.2.3　测定结果 。表 1表明 ,样品中含 18种氨基酸。
3　讨论
(1)试验表明 ,三籽两型豆中总黄酮含量为 0.025 19%。
现代研究证明 ,黄酮类化合物对治疗高血压 、高血脂 、心脑血
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2007 ,35(7):1899-1900　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　陈娟　责任校对　胡先祥
　　表 1 三籽两型豆中氨基酸含量
名称 含量∥mg/ g 名称 含量∥mg/ g
天门冬氨酸 　　　24.15 亮氨酸＊ 　　　17.02
苏氨酸＊ 7.78 酪氨酸 7.32
丝氨酸 7.58 苯丙氨酸＊ 11.11
谷氨酸 38.00 赖氨酸＊ 16.82
甘氨酸 9.07 组氨酸 6.41
丙氨酸 11.12 精氨酸 11.16
胱氨酸 1.55 缬氨酸＊ 11.56
脯氨酸 23.21 蛋氨酸＊ 0.66
鸟氨酸 0.39 异亮氨酸＊ 9.99
总和 214.9
　注:＊为人体必需氨基酸。
管病 、肝病等有较好疗效 ,豆科植物所含的黄酮类 、异黄酮类
化合物已广泛用于开发对人类有益的药品和功能食品及美
容护肤品等 。三籽两型豆是豆科药用植物中新发现的野生
资源 ,其特征性化学成分 、药理活性成分尚待进一步研究 。
(2)研究表明 ,三籽两型豆中含有 18 种氨基酸 ,氨基酸
总量为 214.9 mg/g ,其中天门冬氨酸 、谷氨酸 、丙氨酸 、缬氨
酸 、苯丙氨酸 、赖氨酸 、精氨酸和脯氨酸含量较高 ,特别是谷
氨酸含量高达 38.0 mg/g。三籽两型豆的爽口美味与这些营
养丰富的氨基酸含量较高是分不开的 。谷氨酸可以促进人
体内消化液的分泌 ,具有预防贫血和解毒作用;精氨酸可以
促进生长激素的分泌并能防治中老年人动脉血管粥样硬化;
赖氨酸为碱性必需氨基酸 ,其对保持脑活力极为有利 ,且为
合成肉碱提供结构组分 ,能使肌肉更强健有力;胱氨酸具有
促进毛发生长和防止皮肤衰老的作用;苏氨酸在人体内有平
衡氨基酸的作用 。合理的利用三籽两型豆中的氨基酸成分 ,
也是充分发挥三籽两型豆食疗作用和药用价值的重要方面。
(3)试验表明 ,三籽两型豆含人体必需氨基酸总量为
74.9mg/g(不含色氨酸),必需氨基酸含量(EAA)占氨基酸总
量(TAA)的 35%。三籽两型豆中蛋白质含量虽低于大豆 ,但
高于普通小麦 2倍以上 、为黑小麦的 1.15倍 ,与菜豆 、豇豆 、
刀豆相近[ 6] ,是理想的功能食品新资源。
参考文献
[ 1] 中国植物志编辑委员会.中国植物志[M] .北京:科学出版社, 1995.
[ 2] 黄芸,秦民坚 ,余国奠.异黄铜类化合物在植物界的分布及药理作用
[ J] .中国野生植物资源 ,2001,20(1):5-7.[ 3] 李桂兰 ,乔亚科,臧少先,等.三籽两型豆地下种子的发生及在自然种
群繁育中的作用[ J] .种子, 2004 ,23(2):38-40.
[ 4] 乔亚科 ,李桂兰, 王文颇, 等.三籽两型豆生长发育及栽培技术研究
[ J] .中国中药杂志, 2003,28(10):918-920.
[ 5] 刘玉芬 ,夏海涛,杨树平.紫外分光光度法测定剑麻花中总黄酮的含量
[ J] .食品科学, 2005 , 26(9):107-108.
[ 6] 邱仲华 ,常涛 ,郭凤霞.八种豆类特菜栽培技术[M] .北京:中国农业出
版社 , 2003.
(上接第 1897页)
图 2　酶标抑制素α片段(1-26)标记物酶活性
图 3　抑制素-HRP活性鉴定
素α片段(1-26)-HRP 。
3　讨论
(1)抑制素是由动物性腺分泌的 ,其主要功能是抑制
FSH的分泌 ,反映动物的繁殖力水平 ,因此 ,通过测定抑制
素水平来改良家畜育种[ 4] 。此外 ,抑制素水平测定可应用
于生殖医学 ,如检测一些恶性肿瘤[ 5] 。
　　(2)目前 ,抑制素测定方法有放射免疫法[ 6]与酶联免疫
法 ,但操作繁琐 ,成本较高 ,不适于推广应用 ,而国内尚未建
立抑制素测定方法 ,因此 ,在很大程度上限制了抑制素研究
的机型进行。
(3)酶联免疫测定技术利用抗原抗体反应的高度特异
性和酶促反应的信号放大作用 ,其特异性和灵敏度都和放
射免疫测定法相当 ,并且无引起放射性污染的危险 ,无需昂
贵的仪器 ,有望在动物生产现场推广。由于抑制素来源比
较困难 ,因此 ,用与其具有相似性质的抑制素α片段来代替
它 。由于其分子量较小 ,为了提高其免疫原性将其与辣根
过氧化物酶进行偶联 ,采用操作简便 ,偶联效果好的EDC法
进行偶联。
(4)由试验结果可知 ,酶标记物的酶活性与免疫活性较
好 ,可用于建立测定抑制素水平的酶联免疫吸附法 ,以利于
抑制素研究的顺利进行。
参考文献
[ 1] ROBERTSON DM , PRUYSERS E , BURGER HG , et al.Inhibins andovarian
cancer[ J] .Mol Cell Endocrinol ,2004, 225(1/ 2):65-71.
[ 2] EVANS L W, MUTTUKRISHNA S , GROOME N P.Development , validation
and application of an ultra-sensitive two-site enzyme immunoassay forhuman fol-
listatin[ J] .J Endocrinol , 1998 ,156(2):275-282.
[ 3] 杨利国 刘胜江.孕酮辣根过氧化物酶标记物的制备和鉴定[ J] .南京
农业大学学报 , 1986(3):127-129.
[ 4] 田允波.抑制素与家畜繁殖[ J] .黑龙江动物繁殖 ,1996(2):39-42.[ 5] HEALY D L , BURGERH G , MAMERA P RN , et al.Elevated serum inhibin
concentrations in postmenopausal women with ovarian tumors[ J] .N Engl J
Med, 1993, 329:1539-1542.
[ 6] JOBLING T ,MAMERS P , HEALY D L , etal.A prospective study of inhibinin
granulosacell tumors of the ovary[ J] .Gynecol Oncol , 1994, 55:285-289.
1900 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2007年