全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2014，29(6)∶680 ～ 682
1． 2． 6 干燥时间对银杏叶有效成分的影响 采用
所确定的银杏叶的最佳干燥方法和干燥温度，即用
恒温鼓风干燥 140 ℃来处理银杏鲜叶，干燥 6 min
后，取出打粉过筛，装托盘均匀散开，继续干燥;每隔
3 min取样 1 次，直至银杏叶中水分为 1% ～ 3%时
停止干燥。取样品，按“1． 2． 3”“1． 2． 2”项方法制备
供试品溶液并进样测定，结果见图 2。在 9 ～ 12、
24 ～ 27 min 时，有效成分的含量大量减少，而干燥
24 min 时银杏叶的含水量已降至约 8%，故将鲜叶
干燥约 24 min即可。
6 9 12 15 18 21 24 27 30
2.00
1.60
1.20
0.80
0.40
0
Co
nt
en
ts/
%
总黄酮醇苷
总萜类内酯
t/min
图 2 总黄酮醇苷和萜类内酯的含量随时间的变化
Figure 2 Contents changes of flavonol glycosides and ginkgo
terpens with the different time
2 讨论
银杏叶中的黄酮类化合物对温度较敏感，在受热
时，酚羟基易发生氧化反应。采用低温烘干和鼓风干
燥时，温度相对较低，有利于黄酮类活性成分的保存。
采用直接烘烤、晒干后干燥及杀青后干燥的方法时，
有效成分的损失均较大;采用微波干燥法时，水分挥
发快，有效成分损失较少，但干燥鲜叶量较少，不适用
于大生产。相比于 60 ℃长时间的干燥，140 ℃短时
间的鼓风干燥大大减少了黄酮和内酯的损失量。干
燥过程对银杏叶中总黄酮醇苷和总萜类内酯含量的
影响较大，故银杏叶宜直接采用鲜叶来提取加工。
参考文献:
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类内酯测定［J］．中成药，2012，34(5) :875 － 877．
收稿日期:2013 － 09 － 13
基金项目:四川省教育厅科研项目(13ZB0315) ;成都中医药大学科研基金(ZＲMS201240)
作者简介:吴珊(1987—) ，女，正攻读药剂学专业的硕士学位。Email:wushan2007@ 163． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:lixiaofang918@ 163． com
大孔树脂纯化山香圆叶中的总黄酮
吴 珊，李小芳* ，罗 佳，刘 玲，文怡静，舒 予，冉茂莲
(成都中医药大学药学院，四川 成都 611137)
摘要:目的 研究大孔树脂纯化山香圆叶中总黄酮的工艺条件。方法 采用静态吸附法筛选 6 种大孔树脂，再用动态吸附法
优化山香圆叶中总黄酮的纯化工艺。结果 山香圆叶中总黄酮的最佳纯化工艺为:上样浓度为 0． 1 g·mL －1(以生药计) ，上样
速率为 2 BV·h －1，上样体积为 2 BV，用 2 BV去离子水洗脱、5 BV 50%乙醇以 2 BV·h －1的速率洗脱;在此工艺下，总黄酮的转
移率为 60． 48%，产物中总黄酮的纯度为 41． 11%。结论 HPD400 型大孔树脂对山香圆叶中总黄酮有良好的纯化效果。
关键词:山香圆叶;总黄酮;HPD400 型大孔树脂;纯化
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2014)06 － 0680 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2014． 06． 026
Purification of the total flavonoids from leaves of Turpinia arguta by macroporous resin
WU Shan，LI Xiao － fang* ，LUO Jia，LIU Ling，WEN Yi － jing，SHU Yu，ＲAN Mao － lian
(College of Pharmacy，Chengdu University of TCM，Chengdu，Sichuan，611137 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To study on the purification technology conditions of total flavonoids from the leaves of Turpinia arguta
Seem． by macroporous resin． METHODS Six models of the macroporous resins were selected by static adsorption and purification
technology of the total flavonoids from leaves of Turpinia arguta with the macroporous resin were optimized by dynamic adsorption．
ＲESULTS The optimum purification technology was as follows:sample concentration of 0． 1 g·mL －1(equivalent to raw material) ，
sample velocity of 2 BV·h －1，sample volume of 2 BV，eluted with 2 BV deionized water and abandoned elute，then eluted with 5 BV
50% ethanol at speed of 2 BV·h －1，and elute was collected． The recovery rate of total flavonoids was 60． 48% at this technology condi-
tions，and yield of total flavonoids was 41． 11% ． CONCLUSION HPD400 macroporous resin could purify the total flavonoids from
leaves of Turpinia arguta effectively．
Key words:Leaves of Turpinia arguta;Total flavonoids;HPD400 macroporous resin;Purification
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2014)06 － 0680 － 03
山香圆叶为省沽油科植物山香圆 Turpinia argu-
ta Seem．的干燥叶，其味苦、性寒，产于江西赣南地
区，是 2010 年版《中国药典》中新收载的地方习用
药材。山香圆叶中的黄酮类成分具有抗炎和增强免
疫的作用，临床上常用于治疗咽喉炎、扁桃体炎
等［1 － 2］。目前对该药材中黄酮类化合物的研究较
少，有利用大孔树脂分离纯化中药材中总黄酮的报
道［3］。现从 6 种大孔树脂中筛选出 HPD400 型大孔
树脂，用于山香圆叶中总黄酮纯化工艺的优化。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
UV －6100 型紫外可见分光光度计(上海美谱
达仪器有限公司)。山香圆叶(四川省祥云中药饮
片进出口有限公司) ;芹菜素对照品(成都曼斯特生
物科技有限公司) ;大孔吸附树脂 D101、AB － 8、
HPD500、HPD400、HPD450、HPD826(沧州宝恩吸附
材料科技有限公司) ;其余试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 山香圆叶总黄酮提取液的制备 称取一定
量经脱脂处理的山香圆叶粗粉，用 70%乙醇溶液回
流提取(1 h × 2) ，料液比 1∶10，过滤提取液，回收
乙醇至无醇味，加入适量去离子水制成山香圆叶总
黄酮提取液。
1． 2． 2 标准曲线的制备［4］ 精密称取干燥至恒重
的芹菜素对照品 10． 11 mg，加入少量甲醇，在水浴
中微热溶解，放冷，转移至 50 mL 量瓶中，用甲醇定
容，取 5 mL 置 50 mL 量瓶中，用甲醇定容，得
20． 22 μg·mL －1对照品溶液。精密量取 1、2、3、4、5、
6 mL对照品溶液，置 10 mL量瓶中，加甲醇定容，以
甲醇为空白对照，在 340 nm处测定吸光度。以芹菜
素浓度为横坐标、吸光度为纵坐标进行线性回归，得
回归方程为:Y = 0． 0689X + 0． 0499(r = 0． 9993) ，芹
菜素 2． 022 ～ 12． 132 μg·mL －1与吸光度的线性关系
良好。
1． 2． 3 大孔树脂的预处理［5］ 分别取 D101、AB －
8、HPD500、HPD400、HPD450、HPD826 树脂，加入
95%乙醇浸泡 24 h，充分溶胀后，除去破碎及细小树
脂，用湿法装柱，继续用 95%乙醇冲洗，直至流出液
与水以 1∶5 混合后不浑浊时，再用去离子水洗至无
醇味，浸泡于去离子水中，备用。
1． 2． 4 大孔树脂的筛选 称取预处理好的 D101、
AB － 8、HPD500、HPD400、HPD450、HPD826 湿树脂
(滤纸吸干表面水)各 1． 0 g，置 50 mL 具塞锥形瓶
中，加入山香圆叶总黄酮提取液 20 mL，振摇 2 h，每
10 min振摇 1 次，每次 30 s，放置过夜，过滤，测定滤
液中总黄酮的浓度。计算得 6 种树脂的静态饱和吸
附量分别为 21． 8、24. 1、21． 8、25． 2、22． 1、25． 0 mg·
g －1。将上述已达饱和状态的树脂分别置 50 mL 具
塞锥形瓶中，加入 70%乙醇 20 mL 静态洗脱，振摇
2 h，每 10 min振摇 1 次，每次 30 s，放置过夜，过滤，
测定滤液中总黄酮的浓度。计算得 6 种树脂在室温
下的 静 态 解 吸 率 分 别 为 74． 01%、66． 66%、
64. 22%、72． 26%、60. 01%、57． 40%。HPD400 型大
孔树脂对样品中总黄酮的吸附和解吸均较好，故选
择 HPD400 型大孔树脂纯化山香圆叶总黄酮。
1． 2． 5 总黄酮纯化工艺的优化 取 5 根 HPD400
型大孔树脂柱(1． 4 cm × 7 cm) ，将“1. 2. 1”项下的
山香圆叶总黄酮提取液稀释成 0． 05、0． 1、0． 2、0． 3、
0. 4 g·mL －1(以生药计)的上样液。每个浓度取 20
mL，以 2 BV·h －1的流速通过树脂柱，收集流出液;用
2 BV去离子水洗掉树脂中未吸附的样液，合并两次
流出液，测定其中总黄酮的含量。计算得树脂的动
态吸附率分别为 74． 18%、73． 05%、67． 34%、
63. 54%、50. 66%。上样浓度为 0． 05、0． 1 g·mL －1
时，吸附率较高，随着上样浓度的增大，吸附率明显
下降，故最佳上样浓度为 0． 1 g·mL －1。取相同规格
的树脂柱 5 根、0． 1 g·mL －1上样液 5 份，每份 20
mL。分别以 1、2、3、4、5 BV·h －1的流速上样，收集流
出液;用 2 BV去离子水洗脱，合并流出液，计算得到
动态吸附率分别为 75． 01%、74． 48%、66． 32%、
60. 46%、49． 68%。上样速率为 1、2 BV·h －1时，总
黄酮的吸附率均较大，继续增大上样速率，吸附率明
显下降，故选则上样流速为 2 BV·h －1。取 0． 1 g·
186第 6 期 吴 珊，等。大孔树脂纯化山香圆叶中的总黄酮
mL －1上样液适量，以 2 BV·h －1的流速上样，分段收
集流出液(5 mL) ，测定流出液中总黄酮的含量，绘
制动态吸附穿透曲线(图 1A)。上样体积为 20 mL
时，样品溶液中的总黄酮开始透过树脂柱;当上样体
积达 75 mL时，树脂柱的吸附达饱和，故选择上样量
为 20 mL。采用乙醇 －水系统为洗脱溶剂。取 0． 1
g·mL －1上样液 20 mL，以 2 BV·h －1的流速通过树脂
柱进行动态吸附。先用 2 BV去离子水洗脱，再依次
用 20%、30%、50%、70%、80%乙醇各 50 mL 洗脱，
分段收集洗脱液，测定其总黄酮的含量，绘制洗脱曲
线(图 1B)。总黄酮主要集中在 30%、50%乙醇部
位。另取两根相同规格的树脂柱，分别同法上样、水
洗除杂，再分别用 30%、50%乙醇各 50 mL 洗脱，收
集洗脱液，测定洗脱液中总黄酮的含量。计算得洗
脱率分别为 83． 45%、92． 73%，纯度分别为 41．
35%、39. 72%，故选择 50%乙醇作为洗脱溶剂。
V/mL
To
ta
lf
la
vo
no
id
s/
m
g·
m
L-
1
0 20 40 60 80 100
1.2
0.8
0.4
0
Ethanol concentration/%
0 20 40 60 80 100
0.06
0.04
0.02
0
A B
图 1 HPD400 大孔树脂的吸附穿透(A)和洗脱(B)曲线
Figure 1 Penetration curve of dynamic adsorption(A)and elution
curve(B)by HPD400 macroporous resin
取 3 份 0． 1 g·mL －1上样液各 20 mL，以 2 BV·
h －1的流速上样，用 2 BV 去离子水冲洗，再用 5 BV
50%乙醇洗脱。洗脱流速分别为 1、2、3 BV·h －1，收
集洗 脱 液。计 算 得 洗 脱 率 分 别 为 93. 22%、
92. 13%、80. 05%。以 1、2 BV·h －1洗脱时，洗脱率
较高;当洗脱速度增大至 3 BV·h －1时，洗脱率明显
下降，因此，选择 2 BV·h －1作为洗脱速度。取0． 1 g·
mL －1上样液 20 mL，以 2 BV·h －1流速上样，用 2 BV
去离子水洗脱，再用 50%乙醇以 2 BV·h －1流速洗
脱。按柱体积分段收集洗脱液。计算得每段洗脱液
中总黄酮的含量分别为 6. 66%、16． 05%、12． 39%、
5． 39%、1． 88%、0． 05%。总黄酮主要集中在前 4 段
洗脱液中，在第 5 段洗脱液中的含量已经很低，所以
洗脱剂的用量为 5 BV。
因此，用 HPD400 大孔树脂纯化山香圆叶中总
黄酮的最佳工艺为:上样液浓度 0． 1 g·mL －1(以生
药计)，上样体积为 2 BV，上样速率为 2 BV·h －1，用
2 BV去离子水洗脱，再以 5 BV 50%乙醇洗脱，洗脱
速率为 2 BV·h －1。
1． 2． 6 工艺的验证 取 3 份 0． 1 g·mL －1上样液 20
mL，根据“1． 2． 5”项下优选出的条件进行验证性实
验。收集洗脱液并监测其总黄酮的含量，计算得转
移率分别为 61． 46%、59． 76%、60． 23%。将洗脱液
旋转蒸发，真空干燥，计算产物中总黄酮的纯度为
41． 84%、39． 72%、41． 76%，平均 41． 11%。
2 讨论
文献［6］以芦丁为对照品，用 NaNO2 － Al(NO2)－
NaOH显色后，采用 UV法测定山香圆叶中总黄酮的
含量。作者采用该法时，供试溶液显色后不呈特征酒
红色，且在 500 nm 处与对照品无相似的吸收峰。
NaNO2 － Al(NO2)－ NaOH 显色法要求黄酮 B 环 3，
4位具有特殊的邻二酚羟基结构，且具有邻二酚羟基
结构的非黄酮类成分会呈假阳性，而不具有邻二酚结
构的黄酮类成分会呈假阴性。山香圆药材的黄酮类
物质中不含芦丁，主要含芹菜素及其苷类等［7］。芹菜
素为 5，7，4 －三羟基黄酮，其苷类的取代一般发生在
5或 7位上，不存在特殊的邻二酚结构，因此，不能用
该文献的方法测定山香圆叶总黄酮的含量。文中以
芹菜素为对照品按紫外分光光度法直接测定了山香
圆叶中总黄酮的含量。
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286 华 西 药 学 杂 志 第 29 卷