全 文 ：毛乌素沙地中间锦鸡儿根瘤菌的多样性及其抗逆性 3
高丽锋　邓　馨　王洪新　胡志昂 3 3
(中国科学院植物研究所 ,北京 100093)
【摘要】　从内蒙古毛乌素沙地优势物种中间锦鸡儿收集根瘤 ,分离根瘤菌 15 株 ,对其进行同工酶电泳 ,聚
类分析证明中间锦鸡儿的遗传多样性. 对其耐盐性、耐酸碱性、生长温度范围、产酸产碱性、过氧化氢酶活
性以及唯一碳源利用能力进行比较研究 ,结果表明 ,所有中间锦鸡儿根瘤菌均分泌 H + ,都具有过氧化氢
酶活性 ,73. 3 % 的菌株可以在含 3 %NaCl 的 YMA 培养基上生长 ,80 %的菌株可以抵抗 50 ℃高温 ,除对乳
糖和淀粉利用表现出差异外 ,中间锦鸡儿根瘤菌对其余碳源没有选择性 ,证明中间锦鸡儿根瘤菌具有较强
的抗逆性 , 但仍存在菌株间差异 ,是对毛乌素沙地多种景观生态类型的适应. 作为一种新的种质资源 ,中
间锦鸡儿根瘤菌可用于恶劣生境固氮.
关键词 　中间锦鸡儿根瘤菌 　多样性 　抗逆性
文章编号 　1001 - 9332 (2004) 01 - 0044 - 05 　中图分类号 　Q939. 9 , S154. 3 　文献标识码 　A
Diversity and resistance of rhizobia isolated from Caragana intermedia in Maowusu sandland. GAO Lifeng ,
DEN G Xin , WAN G Hongxin and HU Zhiang ( Institute of Botany , Chinese Academy of Sciences , Beijing
100093 , China) . 2Chin. J . A ppl . Ecol . ,2004 ,15 (1) :44～48.
Fifteen rhizobia strains were isolated from wild shrubby legume Caragana intermedia in Maowusu sandland. A
dendrogram was constructed based on esterase profiles , showing a rich diversity of these rhizobia. Many bio2
chemical characteristics were detected , including acid or alkali production , catalase activity , utilization of sole
carbon sources , and resistance to salt , acid2alkali and temperature variation. The results indicated that all the
rhizobia strains isolated from Caragana intermedia could excrete H+ on YMA agar and produce catalase. 73.
3 % strains could tolerate NaCl stress at 3 % concentration , and 80 % strains could grow at 50 ℃. Except the dif2
ference in lactose and starch utilization , rhizobia strains had no bias on the rest carbon sources. However , the
difference in resistance to stress existed among strains , which might be related to the adaptation of rhizobia to di2
verse landscapes in Maowusu sandland. It was revealed that rhizobia nodulating Caragana intermedia could be
used as a new germplasm to fix nitrogen under severe environment .
Key words 　Caragana intermedia Rhizobia , Diversity , Resistance.3 国家重点基础研究发展规划项目 (2001CB108900) 和国家自然科
学基金重大资助项目 (39893360) .3 3 通讯联系人. E2mail : huzhiang @ns. ibcas. ac. cn
2002 - 02 - 02 收稿 ,2002 - 5 - 21 接受.
1 　引 　　言
毛乌素沙地位于鄂尔多斯高原黄河河套内 ,地
理位置为 37°30′～39°20′N ,107°20′～113°30′E ,海
拔 1200～1600m ,处于干旱荒漠与草原之间的干旱
荒漠和半干旱典型草原的过渡带 ,大气环流上受西
伯利亚2蒙古高压反气旋与东南季风的控制 ,处于二
者的过渡带. 强劲的西伯利亚2蒙古高压反气旋在本
区活动 ,形成大风 ,吹蚀地表 ,形成风沙. 高压和季风
活动强弱对比影响着降水 ,造成本区干旱. 恶劣的自
然条件严重地制约着当地社会的持续发展[14 ] . 中间
锦鸡儿 ( Caragana i ntermedia) 是当地的优势灌木 ,
不怕沙埋 ,是流沙上建立人工防护林、固定沙丘的先
锋植物 ,同时也是本区草2林2农复合系统中灌木带
的优势组成者. 我们曾对毛乌素沙地中间锦鸡儿遗
传多样性从形态、蛋白质和同工酶以及 DNA 水平
进行过系统的研究 ,结果表明 ,各种分子标记为中性
性质 ,即中间锦鸡儿遗传多样性与生态系统功能间
未发现存在直接关系 [11～13 ] . 于是 ,胡志昂、王洪
新[4 ]提出应以基本功能单位来研究毛乌素沙地生
物多样性的生态系统功能 ,包括最低限度的物种和
遗传多样性 :优势种和关键种. 优势种为豆科植物中
间锦鸡儿 ,关键种之一可能是与其共生的根瘤菌. 在
毛乌素沙地 ,中间锦鸡儿经常处于缺水缺氮的生境 ,
导致地上部分生长量少和低叶面指数. 光合产物 (能
量)能否被有效利用 ,对于植物生长以及在初级生产
量基础上整个生态系统功能的维持至关重要. 而据
关桂兰等[2 ]报道 ,与锦鸡儿共生的根瘤菌具有高固
氮活性 ,是一种积极有效的“碳库”和“氮源”,特别是
锦鸡儿根瘤菌有超乎寻常的高吸氢酶活性 ,可以避
免放氢时大量能量流失. 因此 ,一种有高吸氢酶活
应 用 生 态 学 报 　2004 年 1 月 　第 15 卷 　第 1 期 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
CHIN ESE JOURNAL OF APPL IED ECOLO GY ,Jan. 2004 ,15 (1)∶44～48
性、高效固氮的根瘤菌共生于耐水分胁迫的锦鸡儿
植物 ,适应于缺水少氮的沙地生境 ,构成一种当地最
简单的实现物质和能量循环的功能生态系统[4 ] . 　
　本研究从同工酶和生理生化水平对中间锦鸡儿根
瘤菌的多样性进行研究 ,发掘其抗逆潜力 ,作为新种
质资源用于防治沙漠化.
2 　材料与方法
211 　根瘤收集、细菌菌株分离和植物回接检测
于 1999 年 6 月上旬在内蒙古毛乌素沙地中间锦鸡儿植
物根系采集根瘤. 中间锦鸡儿种子系本所董鸣研究员赠送.
根瘤菌菌株分离、回接检测参考 Vincent 的方法 [10 ] . 所有菌
株均用 YMA (yeast - mannitol) 培养基[10 ]培养. 参考菌株由
中国农业大学陈文新院士馈赠. 供试菌株见表 1.
表 1 　实验菌株及来源
Table 1 Strains tested and their origin
菌号
Strain No.
菌名或宿主名
Strain/ Host name
来源
Origin
CCBAU A21BS Mesorhizobium tianshanense 新疆 Xinjiang
CCBAU 032B M . tianshanense 新疆 Xinjiang
CCBAU 6 M . tianshanense 新疆 Xinjiang
CCBAU I2 R. hainanense 海南 Hainan
CCBAU I66 R. hainanense 海南 Hainan
127 K17 R. leguminosarum 美国 United States
USDA2370 R. leguminosarum 美国 United States
USDA205 Sinorhizobium f redii 美国 United States
USDA1002 S . meliloti 美国 United States
NZP2213 M . loti 新西兰 New Zealand
GH10 , GH29 ,
GH60 , GH74 ,
GH14 , GH4 ,
GH24 , GH2 , Caragana intermedia 内蒙古 Inner Mongolia
GH12 , GH55 ,
GH72 , GH11 ,
GH33 , GH34 , GH6
212 　根瘤菌同工酶分析
21211 粗酶液的提取 　菌种用 YMA 培养基于 28 ℃振荡培
养 24～48h ,离心收集菌体 (5000g , 15～20min) ,用 0. 85 %
NaCl 洗涤菌体 3 次 ,再用 10mmol·L - 1 Tris2Cl (p H 7. 6)洗涤
一次 ,加入 1. 0～1. 5 倍的 10mmol L - 1 Tris2Cl (p H 7. 6) ,样
品置冰浴中 ,超声波破碎菌体 2min (每 15s 间歇一次 ) ,
10000g 离心 5min ,上清液分装 - 70 ℃贮存备用.
21212 电泳及分析 　采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
(PA GE)分离同工酶 ,分离胶浓度为 7. 5 % ,浓缩胶浓度为
3. 5 %.电泳和染色方法参照文献 [9 ] . 根据凝胶中相同位置酶
谱差异 ,有记为“1”,反之记为“0”,以菌株为行 ,带谱为列 ,组
成矩阵 ,用 N TSYS软件中的 U PGMA 进行聚类分析.
213 　根瘤菌生理生化性质检测
21311 耐盐性测定 　在 YMA 培养基中加入 NaCl ,建立浓度
梯度 :1 %、2 %、3 %、4 %、5 %、6 %、7 %、8 %、9 %、10 % ,以含
0. 1 %NaCl 的 YMA 平板为阳性对照 ,28 ℃培养 24～72h. 生
长记为“+ ”,不生长记为“ - ”.
21312 耐酸碱性测定 　高压灭菌的 YMA 培养基用 HCl 和
NaOH 调节 p H 值分别在 4. 0、5. 5、9. 0、10. 0 ,以 p H7. 0 平板
为阳性对照 ,接种、培养、观察记录同上.
21313 生长温度范围测定 　将供试菌株接种于 YMA 平板
上 ,分别在 8 ℃、43 ℃、50 ℃、60 ℃下培养 ,以 28 ℃平板为阳性
对照 ,观察记录同上.
21314 产酸产碱反应 　将溴麝香草酚蓝 (B. T. B) 配制成
0. 05 %和 0. 1 %的乙醇溶液 ,加入 YMA 培养基中 ,使培养基
呈草绿色 ,调 p H 至 7. 0 ,高压灭菌 20min , 倒平板后划线接
种 ,28 ℃下培养 24～72 h ,观察产酸者变黄 ,产碱者变蓝.
21315 过氧化氢酶实验 　将供试菌株接种于 YMA 培养基
上 ,28 ℃下培养 24～72h. 在生长丰满的菌苔上滴加 1ml 3 %
H2O2 溶液 ,立即检查 ,5min 之内出现气泡者为阳性反应 ,记
录为“+ ”,反之记为“ - ”.
21316 唯一碳源的利用 　共有 10 种碳源参与测试 ,分别为 :
葡萄糖、肌醇、乳糖、丙酮酸钠、乙酸钠、柠檬酸钠、琥珀酸钠、
淀粉、蔗糖、果糖. 每种碳源均以终浓度 0. 1 %与 White 培养
基及 CS7 微量元素混合. 碳源母液浓度为 1 % , 过滤灭菌 ,
CS7 微量元素直接加入 White 培养基 A 组分中 ,高压灭菌
20min , 将 10ml 碳源溶液及 0. 75ml White B 组分加入融化
并冷却至 50 ℃左右的 White A 培养基中 ,混匀后倒平板 ,以
YMA 平板为阳性对照 ,不加任何碳源的平板为阴性对照 ,
28 ℃下培养生长记录为“+ ”, 不生长记录为“ - ”.
3 　结果与分析
311 　酯酶同工酶分析中间锦鸡儿根瘤菌多样性
　　对 15 株中间锦鸡儿根瘤菌和 10 株参比菌株酯
酶同工酶的分析 ,证明不同菌株间存在差异 (图 1) .
图 1 　酯酶同工酶 PAGE 图谱
Fig. 1 Esterase profiles of rhizobia resolved by PAGE.
(a) CCBAUA21BS , CCBAU032B , CCBAU6 , 127 K17 , USDA2370 ,
CCBAU I66 , CCBAU I2 , NZP2213 , USDA205 , USDA1002 , GH6 ,
GH60 ( b ) GH29 , GH55 , GH14 , GH72 , GH33 , GH10 , GH4 ,
GH11 , GH74 , GH24 , GH2 , GH34 , GH60 , GH12 , GH6 (from left to
right) .
541 期 　　　　　　　　　　　高丽锋等 :毛乌素沙地中间锦鸡儿根瘤菌的多样性及其抗逆性 　　　　　　　　
来自同一根瘤菌种的不同参比菌株酯酶同工酶差别
很大. 如 M . tianshanese 的菌株 A21BS、6、032B ,共
有 6 个等位基因编码 6 种不同构型的等位酶. 其中 ,
A21BS 和 6 共享一个等位基因 ,032B 与前两者没有
相同的等位酶谱. 除 S . meliloti USDA 1002 T和 S .
f redii USDA 205 T 酯酶酶谱完全相同外 ,其余参比
菌株都拥有各自独特的酯酶同工酶酶谱. 与参考菌
株相比 ,中间锦鸡儿根瘤菌酶谱多样性也相当高. 根
据酯酶同工酶谱构建菌株间关系树状图 (图 2) 显示
中间锦鸡儿根瘤菌与参比菌株相互交叉.
312 　NaCl 浓度对中间锦鸡儿根瘤菌生长的影响
　　如表 2 所示 ,毛乌素沙地中间锦鸡儿根瘤菌具
极高的耐盐性 ,菌株 GH11、GH60 甚至可以在含有
图 2 　根据酯酶同工酶谱构建的供试菌株关系树状图
Fig. 2 Dendrogram for relationship among strains tested based on es2
terase profiles.
表 2 　毛乌素沙地中间锦鸡儿根瘤菌生理生化特征
Table 2 Characteristics of rhizobia Caragana intermedia in Maowusu sandland
指标
Characte2
ristic
GH55 GH6 GH14 GH12 GH24 GH11 GH74 GH4 GH2 GH34 GH33 GH10 GH60 GH29 GH72
NaCl 浓度 ( %) 0. 1 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
NaCl concentration 0. 5 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
1 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
2 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
3 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
4 + + + + + + + + + + + + + + + + +
5 + + + + + + + + + + + + + + +
6 + + + + + + + + + + + + + + +
7 + + + + + + + + + + + + + + +
8 + - + + + + - - + + - - + + +
9 + - + - + + - - + - - - + + +
10 - - - - - + - - - - - - + - -
温度 ( ℃) 8 + + + + + + + + + + + + + + +
Temperature 43 + + + + + + + + + + + + + + +
50 - + + + + + + + - + - + + + +
60 - - + + + + + + - - - + + + +
酸碱度 pH 4. 0 + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
5. 5 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
7. 0 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
9. 0 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
10. 0 + + + + + + + + + + + + + + + + + +
碳源 葡萄糖 Glucose + + + + + + + + + + + + + + +
Carbon sources 肌醇 Inositol + + + + + + + + + + + + + + +
乳糖 Lactose - + - + - + - - + - - - - - +
丙酮酸盐 Pyruvic acid sodium + + + + + + + + + + + + + + +
乙酸钠 Acetic sodium + + + + + + + + + + + + + + +
柠檬酸钠 Sodium citrate + + + + + + + + + + + + + + +
琥珀酸钠 Succinic acid sodium + + + + + + + + + + + + + + +
淀粉 Starch - - - - - + - - - - - - - - +
蔗糖 Sucrose + + + + + + + + + + + + + + +
果糖 Fructose + + + + + + + + + + + + + + +
溴麝香草酚蓝 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y
反应 B. T. B
过氧化氢酶反应 + + + + + + + + + + + + + + +
Production of catalase
+ :阳性反应 Positive reaction , number of + for the intensit y of reaction , - :阴性反应 Negative reaction , Y:黄色 Yellow.
10 % NaCl 的 YMA 培养基上生长 ,53. 3 %的菌株可
以忍耐 9 % NaCl ,而 73. 3 %的菌株在含有 3 %NaCl
的 YMA 培养基上生长良好. 随着盐离子浓度的增
加 ,根瘤菌生活力逐渐下降. 当 NaCl 的浓度提高到
4 %～7 %时 ,细菌生长缓慢 ,3～5d 才可见 1～1. 5
mm 的菌落 ,当 NaCl 浓度达到 8 %时 ,有 33. 3 %的
菌株停止生长.
313 　温度变化对中间锦鸡儿根瘤菌生长的影响
64 应 　用 　生 　态 　学 　报 　　　　　　　　　　　　　　　　　　15 卷
　　一般认为 ,根瘤菌的最适生长温度为 25～
30 ℃,只有少数苜蓿根瘤菌菌株在 42. 5 ℃下生长 ,
极少数根瘤菌 4 ℃条件下生长[2 ] . 根瘤菌在 60 ℃条
件下处理 5min 即全部被杀死[3 ] . 毛乌素沙地中间
锦鸡儿根瘤菌对温度适应范围较宽. 以 28 ℃生长菌
株为对照 ,100 %的菌株可以在 8 ℃和 43 ℃下生长.
50 ℃处理 20min、60 ℃处理 10min 后转移到 28 ℃条
件下培养 ,仍有 80 %和 66. 7 %菌株可以正常生长.
314 　p H 值对中间锦鸡儿根瘤菌生长的影响
　　据报道[3 ] ,根瘤菌生长的最适 p H 值为 6～7 ,有
些根瘤菌在 p H4. 5～9. 5 范围内能生长. 毛乌素沙
地中间锦鸡儿根瘤菌生长的 p H 值范围较宽. 在
p H5. 5～9. 0 内 ,除菌株 GH10 和 GH60 在p H9. 0 生
活力下降外 ,其余供试菌株保持均较强的生活力. 菌
株 GH74、GH4 和 GH29 在 p H 为 4. 0 和 10. 0 的环
境中仍有较强的生活力 ,其它菌株生长受到抑制 ,菌
斑较小.
315 　中间锦鸡儿根瘤菌对唯一碳源的利用
　　中间锦鸡儿根瘤菌对碳源基本上没有选择性.
除利用乳糖、淀粉表现出差异外 ,中间锦鸡儿根瘤菌
可以利用其余碳源 ,这可能是对毛乌素沙地营养匮
乏的一种适应.
316 　中间锦鸡儿根瘤菌产酸产碱性检测
　　生长速度和在 YMA 培养基上产酸产碱是区分
快生型根瘤菌和慢生型根瘤菌的两个重要特征[5 ] .
一般地 ,快生型根瘤菌在 YMA 培养基上产酸 ,慢生
型根瘤菌产碱. 所有供试中间锦鸡儿根瘤菌均引起
含溴麝香草酚兰的 YMA 培养基由草绿色变为黄
色 ,表明根瘤菌分泌酸性物质 ,证明中间锦鸡儿根瘤
菌属于快生型根瘤菌
317 　中间锦鸡儿根瘤菌过氧化物酶活性检测
　　在所有供试菌菌苔上滴加 H2O2 , 5min 内可见
有气体产生 ,表明所有菌株都有过氧化氢酶活性 ,说
明中间锦鸡儿根瘤菌有较强的抗逆性.
4 　讨 　　论
　　毛乌素沙地高温干旱是动植物和微生物生长发
育的限制因子 ,但这种生态条件同时亦赋予毛乌素
沙地根瘤菌较强的抗逆性. Murphy & Musterson [8 ]
认为 ,在根瘤菌中 ,酯酶同工酶在不同菌株间差异极
大.本研究从酯酶同工酶水平揭示了毛乌素沙地中
间锦鸡儿根瘤菌丰富的遗传多样性 ,同时从蛋白质
水平论证了前人认为来自同一宿主的菌株存在表型
差异的观点[1 ] . 中间锦鸡儿根瘤菌丰富的遗传多样
性以及抗逆性的多样性可能也是对相对恶劣的自然
环境的一种适应 ,是物种生态系统功能正常发挥的
有效保障.
　　据 Jordan 等[5 ]报道 ,根瘤菌属区别于土壤杆菌
属的反应特征是不生成 32酮基乳糖、不利用柠檬
酸、不利用淀粉. 本研究结果不完全符合上述 3 种反
应特征. 33. 3 %的中间锦鸡儿根瘤菌利用乳糖作为
唯一碳源 ,而所有菌株都可以利用柠檬酸 ,接近
13. 3 %的菌株可以利用淀粉. 李颖等[6 ]报道分离自
宁夏沙坡头的锦鸡儿根瘤菌 95 %可以利用乳糖和
柠檬酸 ,所有菌株都不以淀粉为唯一碳源. 关桂兰
等[2 ]报道分离的新疆干旱地区豆科植物根瘤菌中
35 %分解淀粉. 因此 ,我们认为 ,以唯一碳源的利用
与否作为衡量是否属于根瘤菌的标准似乎不太确
切 ,而只能作为一种参考 ,因为根瘤菌的生理生化性
质受其所处生境的影响较大.
　　许多研究结果表明 ,影响根瘤菌与其寄主共生
固氮的因素较为复杂 ,除遗传因素起主导作用外 ,生
态环境也有可能成为生物生存的重要调节因素. 有
关根瘤菌抗逆机制已有较多报道. 在低渗环境中 ,
Rhizobi um 、A grobacteri um 和 B radyrhizobi um 中
的一些菌株在壁膜间隙积累高浓度的葡聚糖 ,为细
菌提供了调节细胞质体积、渗透压和壁膜间隙离子
强度的机制 ,而且已有相关基因的报道[7 ] . 有些根
瘤菌在高渗环境中积累甘氨酸、甜菜碱来平衡细胞
内外的渗透压. 此外 ,根瘤菌胞外多糖的合成与渗透
调节也密切相关. 在酸性环境中 ,根瘤菌细胞可以改
变外界环境 ,分泌出在膜间穿梭的质子 ,排斥 H + ,
忍耐细胞间 p H 梯度变化 ,或者忍耐金属离子毒害.
生长于适度酸性环境中的根瘤菌较生长于中性环境
中的根瘤菌更能忍耐严重的酸冲击 ,这是一种适应
性的酸耐性反应. 杨江科等[15 ]也发现 p H 对根瘤菌
生长状况和结瘤有影响. 毛乌素沙地缺水少氮的生
境影响宿主与根瘤菌的共生性质. 不论是宿主还是
细菌 ,均经自然选择不断适应干旱环境 ,表现出耐盐
耐酸碱耐高温的特性. 生长于毛乌素沙地的中间锦
鸡儿根瘤菌较强抗逆的分子机理有待进一步研究.
如前所述 ,毛乌素沙地具有较高的光温生产潜力 ,昼
夜温差较大 ,旱生植物体内积累的碳水化合物较多 ,
从而为固氮共生体提供了足够的能量. 据关桂兰
等[3 ]报道 ,锦鸡儿根瘤菌一般都具有超常的吸氢酶
活性 ,可以节省大量放氢反应中将要损失的能量 ,这
也是根瘤菌适应干旱环境的积极表现. 同时 ,本研究
结果表明中间锦鸡儿根瘤菌对碳源并不苛求 ,尽可
741 期 　　　　　　　　　　　高丽锋等 :毛乌素沙地中间锦鸡儿根瘤菌的多样性及其抗逆性 　　　　　　　　
能有效地利用宿主提供的一切能量形式 ,成为干旱
沙地有效氮供给的唯一“氮库”,为宿主提供充足的
氮源 ,这也许正是豆科中间锦鸡儿作为毛乌素沙地
优势物种的主要原因之一.
致谢 本研究一直得到陈文新院士的指导 ,并赠送参比菌株 ,
特此致谢.
参考文献
1 　Chen M2Z(陈明周) ,Xie F2L (谢福莉) ,and Zhou J2C (周俊初) .
2001. Diversity of Sinorhizobia f redii strains. Chin J A ppl Ecol
(应用生态学报) ,12 (4) : 587～600 (in Chinese)
2 　Guan G2L (关桂兰) ,Su Y(苏　云) ,Wang W2W(王卫卫) , et al .
1990. Hydrogen uptake and nitrogen fixing of noduled leguminous
plants in Xinjiang arid area. A rid Zone Res (干旱区研究) ,7 (4) : 9
～14 (in Chinese)
3 　Guan G2L (关桂兰) , Wang W2W (王卫卫) , Yang Y2S (杨玉锁)
eds. 1991. Nitrogen Fixation Biological Resource in Xinjiang Arid
Region. Beijing : Science Press. (in Chinese)
4 　Hu Z2A(胡志昂) ,Wang H2X(王洪新) . 1998. Advances in molec2
ular ecology. Acta Ecol S in (生态学报) ,18 (6) : 565～573 (in Chi2
nese)
5 　Jordan DC. 1984. Family Ⅲ. Rhizobiaceae. In. Kreig NR and Holt
J G eds. Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology. Baltimore :
Williams & Wilkins. 234～256
6 　Li Y(李　颖) ,Ruan X2C (阮小超) ,Chen W2X(陈文新) . 1996.
Characteristics of rhizobia isolated from Shapotou region in Ningxia
Autonomous Region of China Ⅰ. Numerical analysis. J Chin A gric
U niv (中国农业大学学报) ,1 (5) :15～20 (in Chinese)
7 　Miller KJ ,Wood J M. 1996. Osmoadaptation by rhizosphere bacteri2
a. A nnu Rev Microbiol ,50 :101～136
8 　Murphy PM & Mastersom CL . 1970. Determination of multiple
forms of esterases in Rhizobium by paper electrophoresis. J Gen
Microbiol ,61 :121～129
9 　Selander RK , Caugant DA , Ochman H , et al . 1986. Methods of
multilocus enzymes electrophoresis for bacterial population genetics
and systematics. A ppl Envi ron Microbial ,51 : 873～884
10 　Vincent J M. 1970. A manual for the practical study of root2nodule
bacteria. In : International Biological Programme Handbook No. 15.
Oxford : Blackwell Science Publications.
11 　Wang H2X(王洪新) , Hu Z2A (胡志昂) , Zhong M (钟敏) , et al .
1994. Morphological variations of Caragana population in
Maowusu sandy grassland. Acta Ecol S in (生态学报) ,14 (4) : 365
～371 (in Chinese)
12 Wang H2X(王洪新) ,Hu Z2A(胡志昂) ,Zhong M (钟　敏) , et al .
1994. Seed protein diversity of Caragana populations in Maowusu
sandy grassland and its biological implication. Acta Ecol S in (生态
学报) ,14 (4) : 372～379 (in Chinese)
13 　Wei W(魏　伟) ,Wang H2X(王洪新) , Hu Z2A (胡志昂) , et al .
1999. Primary study on the molecular ecology of Caragana spp .
populations distributed over Maowusu sandland : from RAPD data.
Acta Ecol S in (生态学报) ,19 (1) : 16～22 (in Chinese)
14 　Zhang X2S(张新时) . 1994. Principles and optimal models for de2
velopment of Maowusu sandy grassland. Acta Ecol S in (生态学
报) ,14 (1) : 1～16 (in Chinese)
15 　Yang J2K(杨江科) ,Zhou Q (周 　琴) ,and Zhou M2C (周俊初) .
2001. Effect of p H on nodulation of soybean rhizobia from Weifang
and Huayuankou soils. Chin J A ppl Ecol (应用生态学报) ,12 (4) :
639～640 (in Chinese)
作者简介 　高丽锋 ,女 ,1972 年生 ,博士生 ,主要从事分子生
态学和生物多样性与生态系统功能研究. Tel : 0102
6259143126221 E2mail :gao
-
lifeng @yahoo. com. cn
84 应 　用 　生 　态 　学 　报 　　　　　　　　　　　　　　　　　　15 卷