全 文 ：赖红芳，潘立卫． 翠云草不同溶剂提取物的抗氧化性［J］． 江苏农业科学，2015，43(5):307 － 309．
doi:10． 15889 / j． issn． 1002 － 1302． 2015． 05． 101
翠云草不同溶剂提取物的抗氧化性
赖红芳，潘立卫
(河池学院化学与生命科学系，广西宜州 546300)
摘要:为研究不同溶剂提取翠云草(Selaginella uncinata)的总酚、黄酮含量及提取液的抗氧化性，分别用水、甲醇、
乙醇、乙酸乙酯提取翠云草中的活性物质，采用普鲁士蓝法、三氯化铝显色法分别测定不同提取物中总酚、黄酮的含
量;应用清除 DPPH自由基、Marklund法、水杨酸法、铁氰化钾还原法考察不同溶剂提取物的抗氧化活性。试验结果表
明:水提取物中总酚含量最高，为(118． 19 ± 0． 27)mg /g;甲醇提取物中黄酮含量最高，为(354． 08 ± 0． 21)mg /g，甲醇
提取物的抗氧化性最好。得出结论:60%甲醇可作为翠云草抗氧化活性物质提取的优选溶剂，而总酚、黄酮含量可作
为翠云草抗氧化提取物的质量评价指标。
关键词:翠云草;黄酮;总酚;抗氧化;还原能力
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2015)05 － 0307 － 03
收稿日期:2014 － 09 － 29
基金项目:广西教育厅科研项目(编号:201106LX584);河池学院科
研重点项目(编号:2013ZA － N004)。
作者简介:赖红芳(1975—)，女，广西柳州人，副教授，主要从事天然
产物提取及化学成分分析研究。Tel:(0778)3141892;E － mail:
laihongfang263@ 163． com。
翠云草(Selaginella uncinata)为卷柏科卷柏属植物，具有
清热利湿、止血、止咳等功效，可用于治疗急性黄疸型传染性
肝炎、胆囊炎、肠炎、痢疾、肾炎水肿、泌尿系统感染、风湿关节
痛、肺结核咯血，并可外用治疗疖肿、烧烫伤、外伤出血、跌打
损伤［1］。主要成分为黄酮类、多糖、少量糖苷类等物质［2 － 3］，
其中黄酮类成分有抗肿瘤、抗氧化、抗血栓、扩张血管等作
用［4 － 5］。生物体在自身新陈代谢过程中会产生大量活性氧自
由基，若这些自由基无法通过正常途径及时清除，就会引发各
种疾病。而天然抗氧化成分通过捕捉自由基来停止其连锁反
应，从而避免对活细胞的进一步伤害。通过研究黄酮类抗氧
化剂的作用机制发现，它通过酚羟基与氧自由基反应生成较
稳定的半醌式自由基，从而中止链式反应［6］。许多植物都具
有抗氧化活性和清除氧自由基的能力，主要抗氧化成分是多
酚类化合物和类黄酮等。本试验以不同溶剂提取翠云草中
酮、酚含量的测定及提取物抗氧化性的研究为目标;以芸香苷
和没食子酸为对照绘制标准曲线，采用 UV法对黄酮、总酚含
量进行测定;以提取物为研究对象，研究不同溶剂提取物对
DPPH、羟基、过氧基的清除率以及提取物的还原能力。本试
验为翠云草提取物的抗氧化性研究提供一定的参考。
1 试验材料与仪器
1． 1 试验材料
翠云草采自宜州市，经鉴定为翠云草。
1． 2 试剂
芸香苷标准品(上海源叶生物科技有限公司);无水乙
醇、甲醇、乙酸乙酯、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH、没食子酸、
FeCl3、K3［Fe(CN)6］、浓 HCl、DPPH、FeSO4·7H2O、水杨酸、
3% H2O2、Tris － HCl、Cl3CCOOH、维生素 C、BHT、磷酸二氢
钾、磷酸氢二钾均为分析纯。
1． 3 试验仪器
AE240S型电子分析天平(梅特勒 －托利多仪器上海有
限公司);KQ2200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);ＲE －52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);
SHB －Ⅲ型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公
司);2802 UV /VIS SPECTＲOPHOTOMETEＲ 型紫外可见分光
光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)。
2 试验方法
2． 1 预处理过程
置翠云草于真空干燥箱中 40 ℃干燥 24 h 后，用粉碎机
粉碎，称取 50 g 翠云草粉末于大烧杯中，用无水乙醇浸泡
12 h，进行脱脂、除叶绿素，抽滤并收集滤渣，晾干备用。
2． 2 样品溶液的制备
准确称取 4 份翠云草，每份 10 g，按料液比 1 g ∶ 30 mL分
别加入水、60%甲醇、60%乙醇、乙酸乙酯于 500 mL圆底烧瓶
中，回流 2 次，每次 1． 5 h。趁热抽滤并合并滤液，得不同溶剂
的提取液，用旋转蒸发仪旋转滤液浓缩近干，用少量 60%乙
醇转移至小烧杯中，真空干燥不同溶剂的提取物。称取干燥
后的各提取物，用 60% 乙醇溶解，配成质量浓度为
5． 0 mg /mL 的母液，置于 － 4 ℃冰箱保存备用。
2． 3 黄酮含量的测定
芸香苷标准曲线的绘制:依据文献［7］绘制芸香苷标准曲
线，得到芸香苷浓度(mg/mL)与吸光度值的回归方程:D =
10. 518C － 0. 002 9(r = 0． 999 6)。表明线性范围在 0． 000 ～
0. 024 mg /mL。
黄酮含量的测定:精确吸取 2． 5 mL不同溶剂翠云草待测
液于 25 mL容量瓶中，按照上述标准曲线进行测定，可得翠云
草不同提取物黄酮的质量浓度，从而得到不同溶剂提取翠云
草中黄酮的含量。
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2． 4 多酚含量的测定
没食子酸标准曲线的绘制:依据文献［8］绘制没食子酸
标准曲线，得回归方程:y = 238． 57x + 0． 015 5(r = 0． 999 5)，
式中:y为吸光度值;x 为没食子酸浓度(mg /mL)。表明线性
范围在 0． 000 ～ 0． 004 mg /mL。
精确吸取 0． 25 mL不同溶剂翠云草待测液于 25 mL容量
瓶中，按照上述标准曲线进行测定，可得翠云草不同提取物多
酚的质量浓度，从而得到不同溶剂提取翠云草中多酚的含量。
2． 5 抗氧化活性的测定
2． 5． 1 不同质量浓度提取物的配制 分别吸取 2． 5、5． 0、
10． 0、20． 0 mL不同提取物的母液，用 60%乙醇稀释，转移至
25 mL容量瓶中，并用 60%乙醇定容至刻度，摇匀，静置。分
别得到 0． 5、1． 0、2． 0、4． 0、5． 0 mg /mL不同质量浓度的样液。
2． 5． 2 清除 DPPH自由基的测定 采用 DPPH法:准确吸取
2 mL 一定浓度的翠云草提取液于 5 mL 比色管中，加入浓度
为 0． 1 mmol /mL 的 DPPH 溶液 2 mL，用无水乙醇定容至刻
度，摇匀后置于室温密闭静置 30 min，用无水乙醇作空白校
正，在 517 nm 波长处测定吸光度，将各提取液的清除率与
BHT对比。根据下列公式计算不同质量浓度的翠云草提取
液对 DPPH自由基的清除率:
清除率 =(1 －
D1 － D2
D0
)× 100%。
式中:D1 为加提取液后 DPPH 溶液的吸光度;D2 为提取液的
吸光度;D0 为未加提取液时 DPPH溶液的吸光度
［9］。
2． 5． 3 清除过氧自由基的能力测定 采用 Marklund 法:分
别向比色管中加入 3 mL、pH 值 8． 2、50 mmol /L 的 Tris － HCl
缓冲液，以及 0． 2 mL 不同浓度的提取液，置于 25 ℃恒温
10 min，然后加入 0． 2 mL、25 ℃预温的 60 mmol /L没食子酸，
并用 60%乙醇定容至 5 mL，摇匀后静置 15 min，进行比色测
定。以蒸馏水为空白对照，波长为 420 nm，隔 30 s测定 1 次，
连续测 3 min。将各提取液的清除率与维生素 C对比，以过氧
自由基的抑制率表示样品清除过氧自由基的能力［10］，计算公
式为:
抑制率 =(
v0 － v
v0
)× 100%。
式中:v0 为没食子酸自氧化速率，即 D0 － t曲线拟合斜率;v为
添加提取液的氧化速率，即 D － t曲线拟合斜率;D0 为不添加
提取液的吸光度;D 为添加提取液的吸光度;t 为测定时间
(s)。
2． 5． 4 清除羟自由基的能力测定 采用水杨酸法［11］:准确
吸取 2 mL 不同浓度提取液于 10 mL 比色管中，依次加入
1 mL 的 3% H2O2、1 mL 9 mmol /L的 Fe
2 +、1 mL 9 mmol /L的
水杨酸 －乙醇溶液，用 60%乙醇定容，摇匀并静置 10 min。
与试剂空白液作比较，在 510 nm处测吸光度以得到各提取液
的清除率，并将其与 BHT对比，计算公式为:
清除率 =(
D0 － DX
D0
)× 100%。
式中:D0 为试剂空白液的吸光度;DX 为加有提取液的吸
光度。
2． 5． 5 还原能力测定 采用铁氰化钾还原法:向 3． 0 mL、pH
值 6． 6 的磷酸缓冲溶液中分别加入 1 mL 提取物溶液、1 mL
1%铁氰化钾，置于 50 ℃恒温下加热 20 min。之后急速冷却，
加入 2． 5 mL 10%三氯乙酸，离心分离 10 min。取上层清液
5 mL，加入 5 mL水、1 mL 0． 1% FeCl3，均匀混合，静置 10 min
后于波长 700 nm处测吸光度。将各提取液的还原性与 BHT
对比，A值越大则样品的还原能力越强［12］。
3 结果与分析
3． 1 翠云草提取物中的有效成分含量
由表 1 可知，随提取溶剂的不同，翠云草中总酚、黄酮含
量也不同。对于多酚的提取，水提取物的含量最高，为
(188． 19 ± 0． 27)mg /g。多酚含量随提取剂极性的减小而逐
渐降低，依次为甲醇提取物、乙醇提取物，乙酸乙酯提取物的
含量最低，仅为(5． 15 ± 0． 15)mg /g。对于黄酮的提取，甲醇
提取物的含量最高，为(354． 08 ± 0． 21)mg /g，其次为乙醇提
取物、水提取物、乙酸乙酯提取物，含量分别为(225． 79 ±
0. 15)、(200． 73 ± 0. 32)、(9． 90 ± 0． 18)mg /g。
表 1 不同提取溶剂的翠云草黄酮和多酚测定结果(n =3)
提取溶剂
总酚含量
(mg /g)
黄酮含量
(mg /g)
水 188． 19 ± 0． 27 200． 73 ± 0． 32
甲醇 112． 53 ± 0． 38 354． 08 ± 0． 21
乙醇 81． 37 ± 0． 19 225． 79 ± 0． 15
乙酸乙酯 5． 15 ± 0． 15 9． 90 ± 0． 18
3． 2 提取物清除 DPPH自由基能力的测定
由图 1 可知，不同溶剂提取物都有较好的 DPPH 自由基
清除能力，清除率随浓度的增大而增大，在浓度 0． 2 ～
2． 0 mg /mL 范围内呈量效关系，各不同溶剂提取物清除率均
低于 BHT，各提取物清除 DPPH自由基能力顺序为:BHT ＞甲
醇提取物 ＞乙醇提取物 ＞水提取物 ＞乙酸乙酯提取物。
3． 3 提取物清除过氧自由基能力的测定
由图 2 可知，不同溶剂提取物对过氧自由基的抑制能力
强弱不一，在浓度 0． 02 ～ 0． 20 mg /mL 范围内呈现一定量效
关系，其中维生素 C 对过氧自由基的抑制率最高，乙酸乙酯
提取物抑制率最低。各物质对过氧自由基的抑制能力顺序
为:维生素 C ＞甲醇提取物 ＞乙醇提取物 ＞水提取物 ＞乙酸
乙酯提取物。
3． 4 提取物清除羟自由基能力的测定
由图 3 可知，不同溶剂提取物对羟自由基均有一定的抑
制能力，除水提取物外，其他各提取物对羟自由基抑制率与浓
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度的关系并不明显。其中，甲醇提取物、乙醇提取物具有较高
的抑制率，但均低于 BHT，而水提取物在浓度 0． 1 ～
1． 0 mg /mL 范围内呈明显的量效关系。各物质对羟自由基的
抑制能力顺序为:BHT ＞甲醇提取物 ＞乙醇提取物 ＞水提取
物 ＞乙酸乙酯提取物。
3． 5 提取物还原能力的测定
由图 4 可知，翠云草的不同溶剂提取物均具有一定的还
原能力，并随浓度的增大而增大，当浓度低至 0． 05 ～
0． 20 mg /mL 时，甲醇、乙醇、水提取物的还原能力相当，乙酸
乙酯提取物的还原能力最差。还原能力大小依次为:BHT ＞
甲醇提取物 ＞乙醇提取物 ＞水提取物 ＞乙酸乙酯提取物。
4 结论与讨论
本研究以不同溶剂对翠云草回流的方法提取黄酮和总
酚，采用邻苯三酚自氧化法、DPPH法、清除羟基法、铁氰化钾
还原法［13］4 种国内外常用体外抗氧化活性检测方法，对宜州
翠云草水提取物、60%乙醇提取物、60%甲醇提取物、乙酸乙
酯提取物的抗氧化性进行化学评价。结果表明，翠云草提取
物具有一定的抗氧化性，虽然清除 DPPH 基、羟基、过氧基的
能力以及还原能力各不相同，但其能力趋势大致相同。翠云
草在我国分布较广，本身具有一定药用价值，且在食品抗氧化
添加剂、化妆品等方面均有应用，因此，对翠云草抗氧化性的
进一步研究将具有重要科学意义。
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