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SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析



全 文 :基因组学与应用生物学,2012年,第 31卷,第 5期,第 498-504页
Genomics and Applied Biology, 2012, Vol.31, No.5, 498-504
研究报告
Research Report
SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析
林春华 1 李兆龙 2 乔燕春 1 林伟君 3* 刘自珠 1 谭雪 1
1广州市农业科学研究院,广州, 510308; 2仲恺农业工程学院生命科学学院,广州, 510225; 3广东省农科院科技情报研究所,广州, 510640
*通讯作者, linweijun_gz@163.com
摘 要 本实验对影响 SRAP-PCR体系中的Mg2+、dNTPs和引物浓度等因子进行了体系优化,建立了一套
适合白簕 SRAP 检测的 25 μL 反应体系:1.5 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1 μmol/L 引物,10 ng 模板
DNA,1.5 U Taq DNA聚合酶;进一步以白梗簕菜为模板,利用优化的体系进行多态性标记引物组合分析,共
筛选出 17对引物;利用这些引物对 7个白簕品种进行 SRAP遗传多样性分析,共扩增出 461条谱带。其中多
态性谱带 155条,多态性谱带比率为 33.6%,白簕品种间的相似系数为 0.707 7~0.947 4。经 UPGMA聚类分
析结果显示,所检测的 7个白簕品种分为两大类,其中亲缘关系较近的青梗簕菜和细叶密刺簕菜聚成了一
组;而其余的 4个种,包括白梗簕菜、细叶小刺簕菜、紫柄簕菜、大叶大刺簕菜和红梗簕菜,聚成另一组。
关键词 白簕, SRAP反应体系,优化,系统分析
Optimization of SRAP-PCR System for Phylogenetic Analysis of
Acanthopanax trifoliatus Species
Lin Chunhua 1 Li Zhaolong 2 Qiao Yanchun 1 LinWeijun 3* Liu Zizhu 1 Tan Xue 1
1 Guangzhou Academy of Agricultural Sciences, Guangzhou, 510308; 2 College of Life Sciences, Zhongkai University of Agriculture and Engineering,
Guangzhou, 510225; 3 Sci-tech Information Institute, GAAS, Guangzhou, 510640
* Corresponding author, linweijun_gz@163.com
DOI: 10.3969/gab.031.000498
Abstract The genomic DNA of Acanthopanax trifoliatus was extracted by using modified CTAB method. The
uniform design was used to optimize the sequence-related amplified polymorphism (SRAP) reaction system for
phylogenetic analysis of Acanthopanax trifoliatus. The present study showed that an optimal SRAP-PCR system
was established. The reaction volume of the system is 25 μL which consists of 1.5 mmol/L Mg2+, 1.5 mmol/L
dNTPs, 1 μmol/L primer, 10 ng template DNA and 1.5 U Taq DNA polymerase. SRAP-PCR markers were used to
study the genetic diversity of 7 Acanthopanax trifoliatus resources. Using Bai-geng Acanthopanax trifoliatus as
template to screen polymorphic primer combinations and 17 SRAP primers were selected for the present study.
Total bands amplified were 461. Of these bands, 155 were polymorphic, and the percentage of polymorphic bands
was 33.6%. The similarity coefficient among the seven species of Acanthopanax trifoliatus are 0.707 7~0.947 4.
The result of UPGMA analysis showed that seven species of Acanthopanax trifoliatus were clustered into two
groups. Qing-geng Acanthopanax trifoliatus and Xi-ye-mi-ci Acanthopanax trifoliatus have close relationship and
clustered into one group. And other five species including Bai-geng Acanthopanax trifoliatus, Xi-ye-xiao-ci
Acanthopanax trifoliatus, Zi-bing Acanthopanax trifoliatus, Da-ye-da-ci Acanthopanax trifoliatus and Hong-geng
Acanthopanax trifoliatus clustere into another group.
Keywords Acanthopanax trifoliatus, SRAP markers, Optimum design, Phylogenetic analysis
基金项目:本研究由广东省科技攻关项目(2008B021500011)和广东省教育部产学研结合项目(2010B090400492)共同资助
白簕 (Acanthopanax trifoliatus (Linn.) Merr.),别
名鹅掌簕、禾掌簕、三加皮、三叶五加。为五加科(Ar-
aliaceae)攀援状灌木。广泛分布于我国中部及南部,
生于村落、山坡路旁、林缘和灌丛中,垂直分布于海
平面以上至 3 200 m。簕菜在印度、越南、菲律宾也有
分布(中国科学院中国植物志编辑委员会, 1978,科学
出版社, pp.112-113)。白簕为民间常用草药,有舒筋
活络、祛风除湿、理气、止咳之效(林春华等, 2009)。白
簕也是一种营养和保健价值都很高的野生蔬菜,在
广东恩平等地人们习惯将其叶和嫩茎炒食,或煮鲫鱼
汤,做消除暑气的食疗汤水,还被加工成簕菜干和簕菜
茶,颇受人民的喜爱。目前,国内外对白簕的研究重点
在其化学成分分析和活性研究(倪娜和刘向前, 2006;
张秋燕和张福平, 2003,食品研究与开发, 24(3): 66-67;
杜江等 , 1992, 蔡凌云等 , 2009a; 2009b; Kiem et al.,
2003b;倪娜等, 2009; Kang et al., 1998; Park et al., 2004;
Cai et al., 2003;国家药典委员会, 2005,化学工业出版
社, pp.44;李时珍, 2011,华夏出版社 , pp.1413-1414;
安士影等, 2009)。在白簕种质资源收集、引种、利用等
研究鲜有报导,白簕人工栽培尚处于起步阶段,但生产
上已出现品种混杂、优良资源逐渐贫乏的现状,这在很
大程度上制约了白簕产业的发展。
本研究通过优化 SRAP分子标记,建立了适合白
簕资源的 SRAP分析体系,开展了白簕植物的遗传多
样性及亲缘关系研究,以期对白簕种质资源的保存、优
良品种纯化以及杂交育种等工作提供参考依据;同时
为有效鉴定白簕的种类、构建白簕资源的遗传图谱,及
重要性状的标记定位等奠定基础。
1结果与分析
1.1 DNA提取与检测
由图 1 可见,利用改良 CTAB 法对簕菜资源
图 1白簕资源 DNA图样
注: M: 100 ng; 1~7:同表 2
Figure 1 The genomic DNA of Acanthopanax trifoliatus species
Note: M: 100 ng; 1~7: The same as those indicated in table 2
进行基因组 DNA 提取,获得的条带清晰,杂质较
少。改良 CTAB 法完全可以满足进一步分子标记
和 PCR扩增的需要。
1.2均匀设计结果分析
由图 2可见,在 25个处理中,各处理 Taq酶、模
板 DNA、dNTPs、引物、Mg2+浓度的组成不同,扩增结
果表现出显著差异。其中 1、2、4、8、10、15、21组合基
本上扩增不出谱带。其它组合有扩增结果,从 2次的
重复结果来看,以 11、12、13、20、21号处理的扩增结
果相对较好,亮度和重复性好,其中以 11号组合的带
型清晰且稳定。11 号组合的浓度为 1.5 mmol/L
Mg2+,1.5 mmol/L dNTPs,1 μmol/L 引物,10 ng 模板
DNA,1.5 U Taq DNA聚合酶。利用该优化体系可进
一步做分子标记分析。
1.3 SRAP引物筛选与分析
从 99组 SRAP引物组合中筛选出 17个多态性
较好的组合对 7份材料进行分析,共扩增到 461条
谱带,其中多态性谱带 155条,多态性谱带比率为
33.6%,不同引物的扩增条带为 7~12条,每个引物平
均 10条(图 3)。
1.4白簕相关系数分析
分析结果表明:各材料之间的相关系数在
0.707 7~0.947 4之间,其中材料 4、材料 5之间相似
系数最高(0.947 4),亲缘关系最近;材料 3和 7的相
似系数最小(0.707 7),亲缘关系最远(表 1)。
1.5聚类分析
利用 NTSYS2.1软件进行 UPGMA法的聚类分
析结果表明:7份供试材料分为 2大类群,第一类群
又分为 2个亚类,第一亚类为白梗簕菜和细叶小刺
簕菜,第二亚类为紫柄簕菜、大叶大刺簕菜和红梗簕
菜;第二大类为青梗簕菜和细叶密刺簕菜(图 4)。
图 2应用均匀设计方案得到的各处理扩增结果
注:引物 me5, em5组合
Figure 2 The result of amplification of every treatment according to uniform design
Note: The primer was a combination of me5 and em5
SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析
Optimization of SRAP-PCR System for Phylogenetic Analysis of Acanthopanax trifoliatus Species 499
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
2讨论
利用 SRAP分子标记对白簕资源进行遗传多样
性分析,相比 AFLP、SSR等分子标记更易于操作,引
物利用率较高,且经济有效。本试验最终确定的白簕
25 μL 反应体系包括 1.5 mmol/L Mg2+,1.5 mmol/L
dNTPs,1 μmol/L 引物,10 ng 模板 DNA,1.5 U Taq
DNA聚合酶。优化后的体系能获得较清晰的扩增结
果,每对引物扩增总数在 10条左右,平均多态率为
33.6%。文雁成等(2006)利用 SRAP分析了中国甘蓝
型油菜品种的遗传多样性,多态性比例平均为 24%,
王华忠等(2008)利用 SRAP标记分析不同类型甜菜
的遗传多样性,多态性带的比率平均为 43.7%,任羽
等(2008)利用 SRAP分析了石解属植物亲缘关系,多
态性比率平均为 84.07%,可见本研究获得的多态性
结果更接近于品种间 SRAP分析的结果,将研究材
料定位于栽培品种更合适。
本实验聚类分析表明,7份白簕资源共分为两大
类,其中白梗与细叶小刺种、紫柄与大叶大刺及红梗
种、青梗与细叶密刺种之间相关系数均较大,亲缘关
系较近,这与其嫩芽分别为浅绿、红绿和绿色的形态
学相一致;紫柄与青梗种、白梗和青梗种、红梗与白
梗种、红梗与青梗种、细叶小刺与细叶密刺种之间的
相关系数较小,亲缘关系较远,这与其嫩芽颜色差异
图 3 SRAP引物组合 em8me1, em5me5, em5me1和 em7me6在 4%聚丙烯酰胺凝胶上的扩增图样
注: A: em8me1; B: em5me5; C: em5me1; D: em7me6
Figure 3 Polyacrylamide gel (4%) patterns of Acanthopanax trifoliatus SRAP with primer pairs of em8me1, em5me5, em5me1 and
em7me6
Note: A: em8me1; B: em5me5; C: em5me1; D: em7me6
图 4 7份白簕材料间的亲缘关系聚类分析
注: 1~7:见表 2
Figure 4 Dendrogram of 7 Acanthopanax trifoliatus accessions
based on SRAP
Note: 1~7: Showed in table 2
表 1 7份白簕材料之间的相似系数
Table 1 The similarity coefficient of the Acanthopanax trifoliatus
accessions
编号
No.
1
2
3
4
5
6
7
1
1.0000
0.8148
0.7757
0.8101
0.7467
0.7200
0.7246
2
-
1.0000
0.7792
0.8293
0.7949
0.7692
0.7500
3
-
-
1.0000
0.8533
0.8169
0.7887
0.7077
4
-
-
-
1.0000
0.9474
0.7895
0.7429
5
-
-
-
-
1.0000
0.7778
0.7576
6
-
-
-
-
-
1.0000
0.7879
7
-
-
-
-
-
-
1.0000
500
SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析
Optimization of SRAP-PCR System for Phylogenetic Analysis of Acanthopanax trifoliatus Species
悬殊也一致。说明白簕嫩芽颜色可作为白簕品种资
源形态学分类的主要衡量指标之一。这为生产上单
一从形态学进行分类和筛选优良品种提供理论指
导,同时为杂交育种和制定形态学分类指标奠定基
础。白簕是药食两用植物,不仅能用作蔬菜鲜食,而
且对医学和药学产业都有重要的作用(Kiem et al.,
2003a)。因此,加强白簕的药食兼用产品研究和开发
将成为重要课题。
3材料与方法
3.1供试材料
试验所用 7份材料均于 2010年春季采自广州
市农科院恩平白簕基地,表 2列出了 7份材料的品
种名及生物学性状。
3.2 DNA提取与检测
从各组材料中挑选其幼嫩叶片,参照王丽等
(2006)改良 CTAB法提取白簕基因组 DNA;再用 0.8%
的琼脂糖凝胶电泳检测 DNA的浓度及纯度,检测后
表 2试验所用的白簕材料
Table 2 Samples of Acanthopanax trifoliatus used in this research
将每个样品浓度调至 50 ng/μL。
3.3 SRAP反应体系建立
本试验为均匀设计 SRAP反应体系,参考郭凌
飞等(2008)所用的方法,以 1号白簕样品为模板,针
对 25 μL反应体系中 5个因素(Taq DNA聚合酶,模
板 DNA, dNTPs, 引物, Mg2+)各设定 5 个水平,建立
U25(55)均匀设计表,各因素水平详见表 3 (表中所选
用引物为 me5em5)。
以上所有 PCR扩增反应在 MasterCycler Gradi-
ent梯度 PCR仪(Eppendorf)上完成。SRAP扩增程序
参照乔燕春等(2008)在枇杷上确定的 PCR反应程序
并略为优化,优化的扩增程序为:94℃ 5 min,一个循
环;94℃ 1 min,35℃ 1 min,72℃ 1.5 min,5 个循环;
94℃ 1 min,50℃ 1 min,72℃ 1.5 min,35 个循环;
72℃延伸 10 min。扩增结束后,抽取 10 μL的 PCR
产物,加入 2 μL上样缓冲液,用 2%琼脂糖凝胶(含
GoldView)在 0.5×TBE中以 120 V电压下电泳 2 h。然
后在凝胶成像系统上检测并拍照。
编号
No.
1
2
3
4
5
6
7
品种名
Species or cultivar
白梗簕菜
Bai-geng Acanthopanax trifoliatus
细叶小刺簕菜
Xi-ye-xiao-ci Acanthopanaxtrifoliatus
紫柄簕菜
Zi-bing Acanthopanaxtrifoliatus
大叶大刺簕菜
Da-ye-da-ci Acanthopanaxtrifoliatus
红梗簕菜
Hong-geng Acanthopanaxtrifoliatus
青梗簕菜
Qing-geng Acanthopanaxtrifoliatus
细叶密刺簕菜
Xi-ye-mi-ci Acanthopanaxtrifoliatus
性状
The character for samples
嫩芽及成熟叶浅绿色,中叶,茎浅绿,中刺,高产,主栽品种
Colour of young nud, mature leaf and stem is light green; the intermediate of leaf
size and thorn length; heavy prolificacy; main cultival
嫩芽浅绿色,成熟叶绿色,小叶,茎浅绿,低产
Colour of young nud and stem is light green; colour of mature leaf is green; the
small of leaf size; poor prolificacy
成熟叶绿色,嫩芽红绿色,中叶,叶柄和茎紫色,中刺,高产
Colour of mature leaf is green; colour of young nud is red-green; colour of petiole
and stem is purple; the intermediate of leaf size and thorn length; heavy Prolificacy
成熟叶绿色,嫩芽红绿色,大叶,茎青色,大刺,高产,不耐高温
Colour of mature leaf is green; colour of young nud is red-green; colour of stem is
bluish-green; the large of leaf size and thorn length; heavy prolificacy; not resistant
high temperature
成熟叶绿色,嫩芽红绿色,中叶,茎红色,中刺,高产,生长快
Colour of mature leaf is green; colour of young nud is red-green; colour of stem is
red; the intermediate of leaf size and thorn length; heavy Prolificacy
嫩芽及成熟叶绿色,中叶,茎青色,中刺,高产,主栽品种
Colour of young nud and mature leaf stem is green; colour of stem is bluish-green;
the intermediate of leaf size and thorn length; heavy prolificacy; main cultival
嫩芽及成熟叶绿色,小叶,茎青色,刺密,口感甜,易受蚜虫危害,低产
Colour of young nud and mature leaf stem is green; colour of stem is bluish-green;
the small of leaf size; thorn is dense; flavor is sweat; not resistant to Macrosiphomel-
la sanborni; poor prolificacy
501
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
3.4引物筛选
供试引物为 9条正向引物和 11条反向引物(序
列见表 4),每条正向引物都与 11条反向引物配对,
组成 99组引物组合,以 1号样品 DNA为模板,分别
对 99个引物组合进行 PCR扩增反应,筛选出扩增清
晰的引物组合,然后用选出的 7组 DNA样品进一步
检验这些标记是否有多态性。
3.5遗传多样性分析
用筛选出的引物对 7 份白簕材料进行扩增及
4%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,拍照并统计结果。采用
NTSYS2.1软件进行 UPGMA法的聚类分析,并得出
7份材料的遗传距离。
作者贡献
林春华为本研究的主要执行人,负责实验设计、
数据整理及撰写论文;林伟君为本论文的通讯作者,
负责论文的修改和审核;李兆龙和乔燕春两位作者
负责大部分实验内容的操作;刘自珠和谭雪两位作
者为本研究的各项实验提供协助及建议。
致谢
本研究由广东省科技攻关项目(2008B0215000-
11)和广东省教育部产学研结合项目(2010B0904004-
92)共同资助。感谢贺立红副教授对本研究的帮助;感
谢恩平白簕基地多年的业务合作和技术支持。
参考文献
An S.Y., Qian S.H., Jiang J.Q., and Wang K.C., 2009, Chemical
constituents in leaves of Acanthopanax gracilistylus, Zhong-
caoyao (Chinese Traditional and Herbal Drugs), 40 (10):
1528-1534 (安士影, 钱士辉, 蒋建勤, 王康才, 2009, 细柱
表 3白簕 SRAP反应体系的优化表
Table 3 The uniformity design for Acanthopanax trifoliatus SRAP reaction system
处理号
No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
Taq DNA聚合酶(U)
Taq DNA polymerase (U)
1(0.5)
1(0.5)
1(0.5)
1(0.5)
1(0.5)
2(1.0)
2(1.0)
2(1.0)
2(1.0)
2(1.0)
3(1.5)
3(1.5)
3(1.5)
3(1.5)
3(1.5)
4(2.0)
4(2.0)
4(2.0)
4(2.0)
4(2.0)
5(2.5)
5(2.5)
5(2.5)
5(2.5)
5(2.5)
模板 DNA (mg/L)
Template DNA (mg/L)
1(10)
2(20)
3(30)
4(40)
5(50)
1(10)
2(20)
3(30)
4(40)
5(50)
1(10)
2(20)
3(30)
4(40)
5(50)
1(10)
2(20)
3(30)
4(40)
5(50)
1(10)
2(20)
3(30)
4(40)
5(50)
dNTPs (mmol/L)
3(0.20)
4(0.25)
2(0.15)
5(0.30)
1(0.10)
4(0.25)
1(0.10)
3(0.20)
2(0.15)
5(0.30)
2(0.15)
3(0.20)
5(0.30)
1(0.10)
4(0.25)
1(0.10)
5(0.30)
4(0.25)
3(0.20)
2(0.15)
5(0.30)
2(0.15)
1(0.10)
4(0.25)
3(0.20)
C (引物) (μmol/L)
C (Primer) (μmol/L)
2(0.3)
5(0.6)
1(0.2)
3(0.4)
4(0.5)
3(0.4)
1(0.2)
4(0.5)
5(0.6)
2(0.3)
4(0.5)
3(0.4)
5(0.6)
2(0.3)
1(0.2)
5(0.6)
4(0.5)
2(0.3)
1(0.2)
3(0.4)
1(0.2)
2(0.3)
3(0.4)
4(0.5)
5(0.6)
C (Mg2+) (mmol/L)
1(1.0)
3(2.0)
4(2.5)
2(1.5)
5(3.0)
5(3.0)
2(1.5)
3(2.0)
1(1.0)
4(2.5)
2(1.5)
4(2.5)
5(3.0)
3(2.0)
1(1.0)
4(2.5)
1(1.0)
2(1.5)
5(3.0)
3(2.0)
3(2.0)
5(3.0)
1(1.0)
4(2.5)
2(1.5)
因素及水平
Factors and levels
注: C:浓度
Note: C: Concentration
502
SRAP分子标记分析体系的建立及白簕资源亲缘关系分析
Optimization of SRAP-PCR System for Phylogenetic Analysis of Acanthopanax trifoliatus Species
五加叶的化学成分,中草药, 40(10): 1528-1534)
Cai L.Y., Li Y.X., and Chen J., 2009a, Microwaveassisted tech-
nology of total flavonoids from root bark of Acanthopanax
trifoliatus, Shipin Kexue (Food Science), 30(4): 44-47 (蔡凌
云,黎云祥,陈蕉, 2009a, 白簕根皮总黄酮提取工艺研究,
食品科学, 30(4): 44-47)
Cai L.Y., Li Y.X., Chen J., Tian M.J., and Du W.T., 2009b,
Polysaccharide extraction technology and content of Acan-
thopanan trifoliatus, Guangpu Shiyanshi (Chinese Journal of
Spectroscopy Laboratory), 2: 251-257 (蔡凌云,黎云祥,陈
蕉,田茂洁,杜武庭, 2009b,白簕多糖的提取工艺和含量
比较,光谱实验室, 2: 251-257)
Cai X.F., Shen G., Dat N.T., Kang O.H., Lee Y.M., Lee J.J., and
Kim Y.H., 2003, Inhibitory effect of kaurane type diter-
penoids from Acanthopanax koreanum on TNF-α secretion
from trypsin-stimulated HMC-1 cells, Archives of Pharma-
cal Research, 26(9): 731-734
Du J., and Gao L., 1992, Chemical constituents of the leaves of
Acanthopanax trifoliatus (Linn) Merr., Zhongguo Zhongyao
Zazhi (China Journal of Chinese Materia Medica), (6):
356-357, 383 (杜江,高林, 1992,白簕叶的化学成分研究,
中国中药杂志, (6): 356-357, 383)
Guo L.F., Zou M.H., Du L.Q., Zeng H., and Lu C.Z., 2008, Opti-
mization of the sequence-related amplified polymorphism
(SRAP) reaction system for macadamia by uniform design,
Guoshu Xuebao (Journal of Fruit Science), 25(2): 250-253
(郭凌飞,邹明宏,杜丽清,曾辉,陆超忠, 2008,均匀设计
优化澳洲坚果 SRAP 反应体系 , 果树学报 , 25 (2):
250-253)
Kang H., Song H., Lee J., Pyun K.H., and Choi I., 1998, Effects
of acanthoic acid on TNF-alpha gene expression and hap-
toglobin synthesis, Mediators Inflamm, 7(6): 257-259
Kiem P.V., Minh C.V., Cai X.F., Lee J.J., and Kim Y.H., 2003a,
表 4应用引物序列表
Table 4 The primer sequences used in SRAP reaction
编号
Code
me1
me2
me3
me4
me5
me6
me7
me8
me9
正向引物(5-3)
Forward primers (5-3)
TGAGTCCAAACCGGATA
TGAGTCCAAACCGGAGC
TGAGTCCAAACCGGAAT
TGAGTCCAAACCGGACC
TGAGTCCAAACCGGAAG
TGAGTCCAAACCGGTAA
TGAGTCCAAACCGGTCC
TGAGTCCAAACCGGTGC
TGAGTCCAAACCGGTAG
编号
Code
em2
em2
em3
em4
em5
em6
em7
em8
em9
em10
em11
反向引物(5-3)
Reverse primers (5-3)
GACTGCGTACGAATTAAT
GACTGCGTACGAATTTGC
GACTGCGTACGAATTGAC
GACTGCGTACGAATTTGA
GACTGCGTACGAATTAAC
GACTGCGTACGAATTGCA
GACTGCGTACGAATTCAA
GACTGCGTACGAATTCTG
GACTGCGTACGAATTCGA
GACTGCGTACGAATTCAG
GACTGCGTACGAATTCCA
A new 24-Nor-Lupane-Glycoside of Acanthopanax trifolia-
tus, Arch Pharm Res., 26(9): 706-708
Kiem P.V., Minh C.V., Dat N.T., Cai X.F., Lee J.J., and Kim Y.
H., 2003b, Two new phenylpropanoid glycosides from the
stem bark of Acanthopanax trifoliatus, Archibes of Pharma-
cal Research, 26(12): 1014-1017
Lin C.H., Lin W.J., Tan X., Li X.Z., and Qiu J., 2009, Quality
and acute toxication test of a wild vegetable Acanthopanax
trifoliatus, Xiandai Shipin Keji (Modern Food Science and
Technology), 2(25): 201-202, 171 (林春华, 林伟君, 谭雪,
李雪壮,仇洁, 2009,野生蔬菜簕菜品质及急性毒性试验
研究,现代食品科技, 2(25): 201-202, 171)
Ni N., and Liu X.Q., 2006, Advances in studies on plants of A-
canthopanax Miq. in Araliaceae, Zhongcaoyao (Chinese Tra-
ditional and Herbal Drugs), 37(12): 1895-1900 (倪娜,刘向
前, 2006,五加科五加属植物的研究进展,中草药, 37(12):
1895-1900)
Ni N., Liu X.Q., and Zhang X.D., 2009, Determination of acan-
thoic acid and kaurenoic acid from root barks of eight kinds
of Acanthopanax Miq. plants by RP-HPLC, Zhongnan Dax-
ue Xuebao (Zirankexue Ban) (Journal of Central South Uni-
versity (Science and Technology)), 5(40): 1216-1221 (倪娜,
刘向前,张晓丹, 2009, 8种五加属植物根皮中五加酸和贝
壳烯酸的 RP-HPLC法定量分析, 中南大学学报(自然科学
版), 5(40): 1216-1221)
Park E., Zhao Y., and Kim Y., Lee J.J., and Sohn D.H., 2004, A-
canthoic acid from acanthopanax koreanum protects against
liver injury induced by tert-butyl hydroperoxide or carbon
tetrachloride in vitro and in vivo, Planta Medica, 70 (4):
321-327
Qiao Y.C., Lin S.Q., Liu C.M., and Yang X.H., 2008, Optimiza-
tion of SRAP analysis and its application in germplasm re-
search of Loquat (Eriobotrya japonica), Guoshu Xuebao
503
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
(Journal of Fruit Science), 25(3): 348-352 (乔燕春,林顺权,
刘成明,杨向晖, 2008, SRAP分析体系的优化及在枇杷种
质资源研究上的应用,果树学报, 25(3): 348-352)
Ren Y., Yin J.M., and Yang G.H., 2008, Analysis of genetic rela-
tionship of dendrobium in hainan by SRAP makers, Redai
Zuowu Xuebao (Chinese Journal of Tropical Crops), 29(6):
767-770 (任羽,尹俊梅,杨光穗, 2008,海南石解属植物亲
缘关系的 SRAP分析,热带作物学报, 29(6): 767-770)
Wang H.Z., Wu Z.D., Wang X.W., and Fang Z.Y., 2008, Analy-
sis of the genetic diversity in different types of sugar beets
by SRAP and SSR markers, Zuowu Xuebao (Acta Agronoo-
mica Sinica), (1): 37-46 (王华忠,吴则东,王晓武,方智远,
2008,利用 SRAP与 SSR标记分析不同类型甜菜的遗传
多样性,作物学报, (1): 37-46)
Wang L., Qiao A.M., SunY.M., and Sun M., 2006, Extraction of
genomic DNA from flowering Chinese cabbage and opti-
mization of RAPD reaction system, Xinan Shifan Daxue
Xuebao (Zirankexue Ban) (Journal of Southwest China Nor-
mal University (Natural Science Edition)), (2): 124-128 (王
丽,乔爱民,孙一铭,孙敏, 2006,菜心基因组 DNA提取及
RAPD反应体系的优化,西南师范大学学报(自然科学版),
(2): 124-128)
Wen Y.C., Wang H.Z., Shen J.X., Liu G.H., and Zhang S.F.,
2006, Analysis of genetic diversity and genetic basis of Chi-
nese rapeseed cultivars (Brassica napus L.) by sequence-re-
lated amplified polymorphism markers, Zhongguo Nongye
Kexue (Scientia Agrcultura Sinica), 39 (2): 246-256 (文雁
成,王汉中,沈金雄,刘贵华,张书芬, 2006,用 SRAP标记
分析中国甘蓝型油菜品种的遗传多样性和遗传基础,中
国农业科学, 39(2): 246-256)
504